檢測原理：
酵母雙雜(zá)交系統（Yeast two-hybrid assay）是用于體内研究蛋白(bái)相(xiàng)互作用的一(yī)種非常便利的工(gōng)具，常用的如GAL4為(wèi)基礎的系統，使用酵母轉錄因子GAL4來檢測轉錄激活後的蛋白(bái)相(xiàng)互作用。某些轉錄因子（如GAL4）由兩個(gè)可以分開(kāi)，功能(néng)上(shàng)相(xiàng)互獨立的結構域組成，N端有一(yī)個(gè)147個(gè)氨基酸組成的DNA結合域（DNA binding domain，BD），C端有一(yī)個(gè)由113個(gè)氨基酸組成的轉錄激活域（transcription activation domain，AD）。BD可以和上(shàng)遊激活序列（UAS）結合，而AD能(néng)激活UAS下(xià)遊基因進行轉錄。單獨的BD或AD不能(néng)激活基因轉錄，兩者隻有通(tōng)過某種方式結合在一(yī)起形成完整的轉錄激活因子的功能(néng)【見(jiàn)圖1】。酵母雙雜(zá)交系統主要利用酵母GAL4的這個(gè)特性通(tōng)過兩個(gè)雜(zá)交蛋白(bái)在酵母細胞中的相(xiàng)互結合及對報(bào)告基因的轉錄激活來研究活細胞内蛋白(bái)質的相(xiàng)互作用，對蛋白(bái)質之間微弱、瞬間的作用都能(néng)通(tōng)過報(bào)告基因敏感的檢測到(dào)。
酵母雙雜(zá)交系統應用：
對新的與已經蛋白(bái)相(xiàng)互作用的鑒定
對預測蛋白(bái)相(xiàng)互作用的确認
對蛋白(bái)相(xiàng)互作用區域的鑒定
圖1. 雙雜(zá)交檢測原理圖。兩個(gè)蛋白(bái)分别表達，一(yī)個(gè)（誘餌蛋白(bái)bait protein）融合到(dào)Gal4 DNA結合域表達，另一(yī)個(gè)（誘捕蛋白(bái)prey protein）融合到(dào)Gal4轉錄激活結構域（AD）表達。在Y2HGold酵母菌株中，隻有當兩個(gè)蛋白(bái)之間相(xiàng)互作用并結合到(dào)Gal4反應性啓動子上(shàng)才能(néng)活化報(bào)告基因（AUR1-C, ADE2, HIS3,和MEL1）的表達。
酵母雙雜(zá)交系統重要元件(jiàn)介紹（以Matchmarker GAL4-based two hybrid assay為(wèi)例）
1、誘餌（the bait）
為(wèi)了建立GAL4 DNA-BD/bait融合蛋白(bái)，推薦使用質粒pGBKT7；
要調查三元蛋白(bái)複合物(wù)，推薦使用含2個(gè)MCS區域的三雜(zá)交載體，能(néng)表達GAL4 DNA-BD/bait融合蛋白(bái)和第二個(gè)感興趣蛋白(bái)，在bait和prey蛋白(bái)之間發揮橋梁作用。
2、檢測蛋白(bái)作用的四個(gè)報(bào)告基因
Matchmarker gold系統是采用4個(gè)報(bào)告基因/3個(gè)不同bait識别序列的雙雜(zá)交系統（見(jiàn)圖2）。其采用新型穩定的酵母雙雜(zá)交抗生(shēng)素-金擔子素Aureobasidin A（AbA）（貨号：MS0002-1ML），可有效殺死非抗性克隆，從(cóng)而大大降低(dī)背景克隆生(shēng)長(cháng)。同時有效縮減假陽性，由于人和prey蛋白(bái)單獨将結合引起假陽性都需要識别3個(gè)不同序列，激活4個(gè)報(bào)告基因的表達。
4個(gè)報(bào)告基因分别是：1個(gè)AbA抗生(shēng)素篩選報(bào)告基因，2個(gè)營養篩選報(bào)告基因，1個(gè)藍白(bái)斑篩選報(bào)告基因。
1）AUR1-C
AUR1基因的主要突變版，能(néng)夠表達肌醇磷脂酰神經酰胺合成酶（Inositol phosphorylceramide (IPC) synthase）。當蛋白(bái)發生(shēng)作用促使GAL4轉錄激活，AUR1-C基因進行表達。釀酒酵母中此基因的表達孵育其對高(gāo)毒抗生(shēng)素金擔子素Aureobasidin A（AbA）的抗性。由于其背景極其低(dī)，這一(yī)篩選報(bào)告子優于單一(yī)的營養缺陷報(bào)告子。
2）HIS3
Y2HGold菌株不能(néng)合成組氨酸，從(cóng)而無法在缺少這一(yī)必須氨基酸的培養基上(shàng)生(shēng)長(cháng)。當誘餌和誘捕蛋白(bái)相(xiàng)互作用，Gal4反應性的His3表達促使細胞合成組氨酸并能(néng)在His缺陷培養基上(shàng)生(shēng)長(cháng)。
3）ADE2
Y2HGold菌株無法在不含腺嘌呤的基本培養基上(shàng)生(shēng)長(cháng)，但當兩個(gè)蛋白(bái)相(xiàng)互作用，Ade2表達被活化，細胞能(néng)在Ade缺陷的基礎培養基上(shàng)生(shēng)長(cháng)。
4）MEL1
MEL1編碼α-半乳糖苷酶，存在許多(duō)酵母菌内的天然表達蛋白(bái)。當雙雜(zá)交發生(shēng)，MEL1表達和分泌，在底物(wù)X-α-Gal（貨号：MF2003-25MG）存在的情況下(xià)，酵母菌落變為(wèi)藍色。
3、三個(gè)不同的結合位點（three different binding sites）
Y2HGold菌株三個(gè)啓動子控制4個(gè)報(bào)告基因是不相(xiàng)關的，除UAS區域的短蛋白(bái)結合位點特異性結合Gal4 DNA-BD。因此，誘捕蛋白(bái)（文庫蛋白(bái)或靶蛋白(bái)）與UAS内部或邊緣的不相(xiàng)關序列作用（假陽性）就(jiù)會(huì)自(zì)動被篩查出來。
圖2. Matchmarker酵母菌株的報(bào)告基因構造。Y2HGold中，HIS3，ADE2，MEL1，和AUR1-C報(bào)告基因分别由三個(gè)完全異源的Gal4反應啓動元件(jiàn)-G1，G2，M1操控。而啓動子内的蛋白(bái)結合位點是不同的，雖然每一(yī)個(gè)結合位點與Gal4識别的17-mer共有序列相(xiàng)關聯。
酵母雙雜(zá)交系統操作流程（以Matchmarker GAL4-based two hybrid assay為(wèi)例）
完整的Matchmarker篩選過程包含以下(xià)步驟：
第一(yī)步：執行對照(zhào)實驗；
第二步：誘餌載體的構建及自(zì)我激活和毒性檢測；
第三步：篩選Mate&Plate文庫
第四步：确認和闡釋結果
圖3.使用Mate&Plate文庫進行雙雜(zá)交篩選。捕獲蛋白(bái)（bait protein）是酵母菌Y2HGold表達的Gal4 DNA-BD融合蛋白(bái)。高(gāo)複雜(zá)性文庫表達Gal4 AD融合蛋白(bái)，由Y187酵母菌提供。當兩種轉化菌株混合過夜能(néng)接合産生(shēng)二倍體（Diploids）。此二倍體含有4個(gè)報(bào)告基因：HIS3，ADE2，MEL1和AUR1-C，受雙雜(zá)交作用而活化表達。
酵母雙雜(zá)交檢測需要産品信息：
我司（懋康生(shēng)物(wù)）提供酵母雙雜(zá)交研究需要的一(yī)系列産品，從(cóng)酵母菌株、酵母質粒、酵母培養基到(dào)篩選标志(zhì)（抗生(shēng)素），歡迎來電(diàn)咨詢。
一(yī)、富集培養基（Rich Medium酵母培養）
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貨号 |
名稱 |
規格 |
價格（元） |
|
350g |
550 |
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|
MS6302-250G |
YPD Medium YPD液體培養基 |
250g |
438 |
|
350g |
550 |
||
|
MS6304-250G |
YPDA Medium YPDA液體培養基 |
250g |
438 |
【補充描述】：
1）YPD是用于大多(duō)數酵母菌生(shēng)長(cháng)所需的酵母提取物(wù)、蛋白(bái)胨和葡萄糖優化配比後組成的混合物(wù)；
2）YPDA培養基是在YPD基礎上(shàng)添加硫酸腺嘌呤，終濃度120 µg/ml。
二、基本培養基（Minimal Medium酵母培養）
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貨号 |
名稱 |
規格 |
價格（元） |
|
467g |
1428 |
||
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MS6312-267G |
Minimal SD Base SD基礎培養基 |
267g |
768 |
|
Minimal SD Agar Base Gal/Raf SD瓊脂基礎培養基（含半乳糖/棉子糖） |
270g |
1428 |
|
|
MS6314-185G |
Minimal SD Base Gal/Raf SD基礎培養基（含半乳糖/棉子糖） |
185g |
988 |
【補充描述】：
1）SD Medium：酵母菌用的基本的合成限定培養基（Minimal synthetically defined medium），包含氮源，碳源（葡萄糖，除非有特殊說明）和DO添加劑（Dropout Supplement）。
2）DO（Dropout Supplement or Solution）：特定氨基酸和核苷的混合物(wù)，添加到(dào)SD base内以配制SD Medium。DO缺少一(yī)種或者更多(duō)未轉化酵母菌需要的營養成分使其在SD Medium上(shàng)生(shēng)長(cháng)，作為(wèi)營養篩選标志(zhì)。
三、省卻成分氨基酸混合物(wù)（DO Supplements 酵母培養）
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類型 |
名稱 |
貨号 |
規格 |
價格（元） |
|
Single Dropout Supplements (SDO) 單一(yī)省卻成分添加劑 |
DO Supplement -His |
MS6316-10G |
10g |
418 |
|
DO Supplement -Leu |
MS6317-10G |
10g |
418 |
|
|
DO Supplement -Trp |
MS6318-10G |
10g |
418 |
|
|
DO Supplement -Ura |
MS6319-10G |
10g |
418 |
|
|
Double Dropout Supplements (DDO) 雙省卻成分添加劑 |
DO Supplement -His/-Leu |
MS6320-10G |
10g |
418 |
|
DO Supplement -His/-Ura |
MS6321-10G |
10g |
418 |
|
|
DO Supplement -Leu/-Trp |
MS6322-10G |
10g |
418 |
|
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DO Supplement -Met/-Trp |
MS6323-10G |
10g |
418 |
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DO Supplement -Trp/-Ura |
MS6324-10G |
10g |
418 |
|
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DO Supplement -Trp/-His |
MS6325-10G |
10g |
418 |
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DO Supplement -Ura/-Leu |
MS6326-10G |
10g |
418 |
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Triple Dropout Supplements (TDO) 三省卻成分添加劑 |
DO Supplement -His/-Leu/-Trp |
MS6331-10G |
10g |
418 |
|
DO Supplement -His/-Leu/-Ura |
MS6332-10G |
10g |
418 |
|
|
DO Supplement -His/-Trp/-Ura |
MS6333-10G |
10g |
418 |
|
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DO Supplement -Leu/-Met/-Trp |
MS6334-10G |
10g |
418 |
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DO Supplement -Leu/-Trp/-Ura |
MS6335-10G |
10g |
418 |
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DO Supplement -Trp/-His/-Ade |
MS6336-10G |
10g |
418 |
|
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Quadruple Dropout Supplements (QDO) 四省卻成分添加劑 |
DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Trp |
MS6341-10G |
10g |
418 |
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DO Supplement -His/-Leu/-Met/-Trp |
MS6342-10G |
10g |
418 |
|
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DO Supplement -His/-Leu/-Trp/-Ura |
MS6343-10G |
10g |
418 |
四、酵母營養缺陷完全培養基（SD+DO Supplments）
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類型 |
名稱 |
貨号 |
規格 |
價格（元） |
|
SD + DO Broth 酵母缺陷型完全培養基（肉湯） |
SD/-His Broth |
MS6361-5L |
5L |
838 |
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SD/-Leu Broth |
MS6363-5L |
5L |
838 |
|
|
SD/-Trp Broth |
MS6365-5L |
5L |
838 |
|
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SD/-Ura Broth |
MS6367-5L |
5L |
838 |
|
|
SD/-His/-Leu Broth |
MS6381-5L |
5L |
838 |
|
|
SD/-His/-Ura Broth |
MS6383-5L |
5L |
838 |
|
|
SD/-Leu/-Trp Broth |
MS6385-5L |
5L |
838 |
|
|
SD/-Met/-Trp Broth |
MS6387-5L |
5L |
838 |
|
|
SD/-Trp/-Ura Broth |
MS6389-5L |
5L |
838 |
|
|
SD/-Trp/-His Broth |
MS6391-5L |
5L |
838 |
|
|
SD/-Trp/-Ade Broth |
MS6393-5L |
5L |
838 |
|
|
SD/-Ura/-Leu Broth |
MS6395-5L |
5L |
838 |
|
|
SD/-His/-Leu/-Trp Broth |
MS6411-5L |
5L |
838 |
|
|
SD/-His/-Leu/-Ura Broth |
MS6413-5L |
5L |
838 |
|
|
SD/-His/-Trp/-Ura Broth |
MS6415-5L |
5L |
838 |
|
|
SD/-Leu/-Met/-Trp Broth |
MS6417-5L |
5L |
838 |
|
|
SD/-Leu/-Trp/-Ura Broth |
MS6419-5L |
5L |
838 |
|
|
SD/-Trp/-His/-Ade Broth |
MS6421-5L |
5L |
838 |
|
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SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp Broth |
MS6431-5L |
5L |
838 |
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SD/-His/-Leu/-Met/-Trp Broth |
MS6433-5L |
5L |
838 |
|
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SD/-His/-Leu/-Trp/-Ura Broth |
MS6435-5L |
5L |
838 |
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SD + DO with Agar 酵母缺陷型完全培養基（瓊脂） |
SD/-His with Agar |
MS6362-5L |
10×0.5 L |
1078 |
|
SD/-Leu with Agar |
MS6364-5L |
10×0.5 L |
1078 |
|
|
SD/-Trp with Agar |
MS6366-5L |
10×0.5 L |
1078 |
|
|
SD/-Ura with Agar |
MS6368-5L |
10×0.5 L |
1078 |
|
|
SD/-His/-Leu with Agar |
MS6382-5L |
10×0.5 L |
1078 |
|
|
SD/-His/-Ura with Agar |
MS6384-5L |
10×0.5 L |
1078 |
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|
SD/-Leu/-Trp with Agar |
MS6386-5L |
10×0.5 L |
1078 |
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|
SD/-Met/-Trp with Agar |
MS6388-5L |
10×0.5 L |
1078 |
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|
SD/-Trp/-Ura with Agar |
MS6390-5L |
10×0.5 L |
1078 |
|
|
SD/-Trp/-His with Agar |
MS6392-5L |
10×0.5 L |
1078 |
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|
SD/-Trp/-Ade with Agar |
MS6394-5L |
10×0.5 L |
1078 |
|
|
SD/-Ura/-Leu with Agar |
MS6396-5L |
10×0.5 L |
1078 |
|
|
SD/-His/-Leu/-Trpwith Agar |
MS6412-5L |
10×0.5 L |
1078 |
|
|
SD/-His/-Leu/-Urawith Agar |
MS6414-5L |
10×0.5 L |
1078 |
|
|
SD/-His/-Trp/-Urawith Agar |
MS6416-5L |
10×0.5 L |
1078 |
|
|
SD/-Leu/-Met/-Trpwith Agar |
MS6418-5L |
10×0.5 L |
1078 |
|
|
SD/-Leu/-Trp/-Urawith Agar |
MS6420-5L |
10×0.5 L |
1078 |
|
|
SD/-Trp/-His/-Adewith Agar |
MS6422-5L |
10×0.5 L |
1078 |
|
|
SD/-Ade/-His/-Leu/-Trpwith Agar |
MS6432-5L |
10×0.5 L |
1078 |
|
|
SD/-His/-Leu/-Met/-Trpwith Agar |
MS6434-5L |
10×0.5 L |
1078 |
|
|
SD/-His/-Leu/-Trp/-Urawith Agar |
MS6436-5L |
10×0.5 L |
1078 |
五、篩選抗生(shēng)素（底物(wù)）
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貨号 |
名稱 |
規格 |
價格（元） |
|
1ml |
900 |
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25mg |
285 |
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1g |
280 |
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5-Fluoroorotic acid monohydrate (5-FOA) 5-氟乳清酸一(yī)水(shuǐ)合物(wù) |
500mg |
316 |
【補充描述】：
1）Aureobasidin A（AbA）金擔子素A是報(bào)告基因AUR1-C的篩選抗生(shēng)素，以判斷酵母菌是否能(néng)表達賦予其AbA抗性的酶。
2）X-α-Gal是α-半乳糖苷酶（由MEL1基因編碼）的底物(wù)，當雙雜(zá)交發生(shēng)時MEL1報(bào)告基因正常表達催化底物(wù)發生(shēng)顔色反應，使得酵母菌落呈藍色。
3）X-Gal是ß-半乳糖苷酶（由lacz基因編碼）的底物(wù)。
4）5-FOA（5-氟乳清酸）酵母反篩選（counter-selection）底物(wù)，常用于釀酒酵母（URA3）的鑒定和篩選。
六、酵母質粒提取試劑盒
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貨号 |
名稱 |
規格 |
價格（元） |
|
50次 |
495 |
【試劑盒工(gōng)作原理】：
該試劑盒把矽膠柱純化技(jì)術(shù)同經典的SDS堿裂解法結合起來，用戶可在1小(xiǎo)時内從(cóng)酵母培養液中純化出高(gāo)純度的質粒DNA。純化過程不需用任何到(dào)有害的有機(jī)物(wù)抽提，亦不需用到(dào)耗時的乙醇沉澱。質粒DNA的産量依賴于酵母攜帶質粒的拷貝數，酵母菌株以及生(shēng)長(cháng)條件(jiàn)。一(yī)般來說，酵母質粒的拷貝數較低(dī)，5.0ml過夜培養液中質粒DNA産量約為(wèi)1.0 µg左右。純化的質粒可直接用于酶切，PCR,電(diàn)轉化等應用。酵母收集後,加入破壁酶和玻璃珠去除細胞壁,用傳統堿裂法裂解細胞，然後将獲得的上(shàng)清液轉移至結合柱結合DNA，經過兩次快速洗滌，最後用無菌水(shuǐ)洗脫出質粒DNA。
七、酵母轉化試劑盒
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貨号 |
名稱 |
規格 |
價格（元） |
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200T |
768 |
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|
120 Rxns |
1246 |
【補充描述】：
酵母質粒轉化試劑盒，含PEG/liAC酵母轉化需要的所有試劑，操作簡單，轉化效率高(gāo)。
八、酵母雙雜(zá)交菌和感受态細胞
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貨号 |
名稱 |
規格 |
價格（元） |
|
MF2351-300UL |
Y2HGold Yeast Strain 酵母雙雜(zá)交用甘油菌 |
300μl |
咨詢 |
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MF2352-100UL |
Y2HGold Chemically Competent Cell 酵母菌化學感受态細胞 |
100μl |
咨詢 |
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MF2353-300UL |
Y187 Yeast Strain 酵母雙雜(zá)交用甘油菌 |
300μl |
咨詢 |
|
MF2354-100UL |
Y187 Chemically Competent Cell 酵母菌化學感受态細胞 |
100μl |
咨詢 |
九、酵母菌載體
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貨号 |
名稱 |
規格 |
價格（元） |
|
MF3601-20UL |
pGBKT7 DNA-BD Vector 酵母雙雜(zá)交克隆載體 |
20μl |
咨詢 |
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MF3602-20UL |
pGBKT7-53 Vector 酵母雙雜(zá)交對照(zhào)載體 |
20μl |
咨詢 |
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MF3603-20UL |
pGBKT7-Lam Vector 酵母雙雜(zá)交對照(zhào)載體 |
20μl |
咨詢 |
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MF3604-20UL |
pGADT7-AD Vector 酵母雙雜(zá)交克隆載體 |
20μl |
咨詢 |
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MF3605-20UL |
pGADT7-T Vector酵 母雙雜(zá)交對照(zhào)載體 |
20μl |
咨詢 |
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MF3606-20UL |
pBridge Vector 酵母三雜(zá)交克隆載體 |
20μl |
咨詢 |
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MF3609-20UL |
pGBT9 Vector 酵母雙雜(zá)交克隆載體 |
20μl |
咨詢 |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海夢澤生物科技有限公司是一(yī)家涉足于生(shēng)命科學和生(shēng)物(wù)技(jì)術(shù)領域研究的試劑、儀器(qì)和實驗室消耗品與實驗服務工(gōng)作，主要從(cóng)事(shì)細胞生(shēng)物(wù)學、植物(wù)學、分子生(shēng)物(wù)學、免疫學、生(shēng)物(wù)化學、蛋白(bái)組學。生(shēng)物(wù)制藥與診斷試劑研發生(shēng)産等領域。 本公司秉承“以人為(wèi)本，以誠為(wèi)信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為(wèi)廣大客戶提供優質産品。
