X-α-Gal（α-半乳糖苷酶顯色底物(wù)/酵母雙雜(zá)交檢測）

— —酵母雙雜(zá)交檢測系統/蛋白(bái)-蛋白(bái)相(xiàng)互作用分析

搜索關鍵詞：

X-α-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃半乳糖苷；α-半乳糖苷酶 a-galactosidase；MEL1基因；GAL4 酵母雙雜(zá)交系統；CAS：107021-38-5；藍白(bái)斑篩選；

基本描述：

X-α-Gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃半乳糖苷，CAS：107021-38-5），一(yī)種用來檢測α-半乳糖苷酶（也稱為(wèi)蜜二糖酶，α-D-半乳糖苷半乳糖水(shuǐ)解酶，EC 3.2.1.22）活性的顯色底物(wù)。X-α-Gal的使用，避開(kāi)雙雜(zá)交分析中β-半乳糖苷酶溶液制備和濾膜提升實驗（filter-lift assay）的繁瑣操作，隻需直接添加在培養基上(shàng)，通(tōng)過藍色沉澱的生(shēng)成與否，即可用來檢測雙雜(zá)交相(xiàng)互作用。X-α-Gal可用來區分腸杆菌科内的不同物(wù)種以及劃分乳酸菌和雙歧杆菌。組織學研究中，X-α-Gal還(hái)可借助光(guāng)學顯微鏡來檢測組織的α-半乳糖苷酶活性。

利用α-半乳糖苷酶水(shuǐ)解二糖-蜜二糖作為(wèi)碳源，酵母菌得以正常生(shēng)長(cháng)或進行發酵。釀酒酵母菌内，該酶由幾種GAL基因調控的MEL1基因所編碼。一(yī)旦GAL4激活，α-半乳糖苷酶分泌，之後水(shuǐ)解培養基上(shàng)的X-α-Gal，使得菌落産生(shēng)藍斑。酵母雙雜(zá)交研究用的工(gōng)程菌包括AH109，PJ69-2A，Y190和Y187。

X-α-Gal優勢：

避開(kāi)雙雜(zá)交分析中β-半乳糖苷酶溶液制備和濾膜提升實驗（filter-lift assay）的繁瑣操作，隻需直接添加在培養基上(shàng)，通(tōng)過藍色沉澱的生(shēng)成與否，即可用來檢測雙雜(zá)交相(xiàng)互作用。

X-α-Gal與酵母雙雜(zá)交系統：

酵母雙雜(zá)交篩選是體内用來檢測蛋白(bái)-蛋白(bái)相(xiàng)互作用的一(yī)種遺傳分析實驗，此方法由Prof. Stan Fields及合作者開(kāi)發用來調查兩個(gè)已知蛋白(bái)的相(xiàng)互作用，另一(yī)個(gè)重要應用是從(cóng)文庫内篩選并鑒定某一(yī)特定蛋白(bái)的未知結合蛋白(bái)。陽性克隆也就(jiù)是那些能(néng)夠激活報(bào)告基因轉錄子，使得營養缺陷型酵母雙雜(zá)交菌株在營養缺陷選擇性培養基上(shàng)生(shēng)長(cháng)的菌落。大多(duō)數雙雜(zá)交方法使用大腸杆菌的LacZ基因作為(wèi)第二個(gè)報(bào)告基因，通(tōng)常要使用非常耗時的filter-lift assay來鑒定能(néng)在第二種選擇性平闆上(shàng)生(shēng)長(cháng)的菌落。而替換使用的X-α-Gal，可直接在營養缺陷性的選擇培養基上(shàng)來檢測基于GAL4-轉錄子的雙雜(zá)交作用。

基本特性：

1）  CAS NO：107021-38-5

2）  化學名：5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl-α-D-galactopyranoside5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃半乳糖苷；X-α-D-Galactoside X-α-D-半乳糖苷；

3）  分子式：C14H15BrClNO6

 4）分子量：408.64g/mol

5）純度：≥98%（TLC）

6）外觀：白(bái)色或近白(bái)色結晶粉末

7）化學結構：

使用方法【懋康整理】

方法1：直接倒入固體培養基

1）  溶解60mgX-α-gal于3ml DMF得20mg/ml儲存液，馬上(shàng)使用或者避光(guāng)儲存于-20℃，6個(gè)月(yuè)穩定；

2）  将高(gāo)壓滅菌好的瓊脂培養基于室溫冷卻至50℃；

3）  按照(zhào)每升培養基加入1ml 20mg/mlX-α-gal儲存液的用量，直接加入冷卻好的瓊脂培養基；【若有需要，此時也可加入篩選用的抗生(shēng)素】；

4）  倒平闆，使用前必須讓培養基室溫凝固（通(tōng)常至少需30min）。

方法2：塗布于預制培養平闆上(shàng)

1）  溶解24mg X-α-gal于6ml DMF得4mg/ml儲存液，馬上(shàng)使用或者避光(guāng)儲存于-20℃，6個(gè)月(yuè)穩定；

2）  超淨工(gōng)作台内放(fàng)置已經倒好的固體培養基，使其表面幹燥；

3）  吸取200μl (15cm平闆) 或100μl（10cm平闆）4mg/ml X-α-gal 儲存液于預制培養平闆上(shàng)，并塗布使其均勻分散在表面【注意：平闆邊緣通(tōng)常很難得以充分塗布，可能(néng)導緻假陽性克隆生(shēng)成。建議條件(jiàn)可能(néng)下(xià)，于平闆中央挑取克隆】。

4）  使用前将上(shàng)述塗布好的篩選平闆于超淨工(gōng)作台内，至少晾幹30min；

5）  将轉化好的細菌或酵母塗于平闆上(shàng)，分别置于37℃或30℃倒置培養，直至藍色菌落出現。

産品訂購【高(gāo)純度進口原料，≥98%（TLC），現貨供應，國(guó)内各科研單位不二的選擇】：

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海夢澤生物科技有限公司是一(yī)家涉足于生(shēng)命科學和生(shēng)物(wù)技(jì)術(shù)領域研究的試劑、儀器(qì)和實驗室消耗品與實驗服務工(gōng)作，主要從(cóng)事(shì)細胞生(shēng)物(wù)學、植物(wù)學、分子生(shēng)物(wù)學、免疫學、生(shēng)物(wù)化學、蛋白(bái)組學。生(shēng)物(wù)制藥與診斷試劑研發生(shēng)産等領域。 本公司秉承“以人為(wèi)本，以誠為(wèi)信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為(wèi)廣大客戶提供優質産品。