【溫馨提示】：
見(jiàn)我司懋康生(shēng)物(wù)整理的酵母雙雜(zá)交檢測（Yeast two-hybrid assay）産品專題。
基本描述
Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit™（酵母轉化試劑盒）是一(yī)款專門(mén)設計用于酵母轉化和文庫篩選的試劑盒，比目前商業(yè)或公開(kāi)的文獻方法更快捷和更有效。本試劑盒制備的酵母細胞可立即用于轉化或凍存待用（≤ -70°C）。本試劑盒制備的細胞适用于環形和線性DNAs轉化，同時也能(néng)用于其他真菌包括C. albicans，S. pombe和P. pastoris的轉化。
産品亮點：
~ 高(gāo)轉化效率：每µg質粒DNA（環形）可産生(shēng)105- 106個(gè)酵母轉化子；
~ 制備好的感受态細胞可凍存後待用；
~ 快速簡單步驟于10min内可制備酵母感受态細胞；
~ 簡單單一(yī)步驟，1h内完成轉化；
~ 适用菌株類型廣（S. cerevisiae, C. albicans, S. pombe, Pichia pastoris）；
~ 簡單方法用于多(duō)質粒轉化；
産品組分：本試劑盒可做120個(gè)常規轉化或600個(gè)微量轉化實驗。試劑盒4℃一(yī)年(nián)有效。
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組分 |
規格 |
保存 |
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EZ1 Solution |
60ml |
0-4℃ |
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EZ2 Solution |
6ml |
0-4℃ |
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EZ3 Solution |
60ml |
0-4℃ |
操作流程【見(jiàn)下(xià)圖】：
A. 感受态細胞制備
30℃，于10ml YPD肉湯培養酵母菌直至中數量級（~5 x 106-2 x107cells/ml或OD600= 0.8-1.0）。以下(xià)步驟室溫進行。
A1，500 x g離心細胞4min，吸掉上(shàng)清液；
A2，加入10ml EZ1溶液清洗沉澱。重新離心沉澱細胞，吸掉上(shàng)清液；
A3，加入1ml EZ2溶液重懸沉澱細胞。
此時獲得的感受态細胞即可直接用于轉化或凍存備用（≤ -70°C）。注意需緩慢(màn)凍存細胞，不可使用液氮瞬間凍存細胞。
B. 轉化
以下(xià)步驟适用于新鮮制備和凍存（室溫融化）的酵母感受态細胞。
B1，取50µl感受态細胞與0.2-1µg DNA（體積少于5µl）混合；加入500µl EZ3溶液，完全混合；
B2，30°C孵育45min，孵育過程中用手指輕彈或低(dī)速渦旋（如果适用于轉化DNA）2-3次讓其混勻；
B3，從(cóng)上(shàng)面轉化混合液中取50-150µl到(dào)适當平闆上(shàng)，沒有必要沉澱或清洗細胞。、
B4，30°C孵育平闆2-4天使得轉化子生(shēng)長(cháng)。
訂購信息：Zymo Research原裝正品，現貨供應。歡迎來電(diàn)咨詢，021-54736159，QQ：2971634497。
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貨号 |
産品名稱 |
規格 |
價格（元） |
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T2001 |
Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit™（酵母轉化試劑盒） |
120 Rxns |
1532 |
T2001 Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit™ User Manual
常見(jiàn)問題（FAQs）：
1. 試劑盒内含什麽及工(gōng)作原理？
答複：試劑盒所用步驟是特别設計，某些步驟，類似于基于锂陽離子的方法，不需要原生(shēng)質體制備。作用機(jī)制可能(néng)涉及一(yī)些代謝通(tōng)路(lù)，但并未完全清晰。
2. 試劑盒是否适用于C. albicans，S. pombe，或Pichia pastoris？
答複：根據Zymo實驗室内部數據，适合以上(shàng)菌株感受态細胞制備和轉化。
3. 感受态細胞≤ -70°C能(néng)存放(fàng)多(duō)久？感受态細胞的融化方法？
答複：感受态細胞≤ -70°C保存半年(nián)轉化效率不會(huì)有損失，超過半年(nián)效率開(kāi)始逐漸降低(dī)。
4. 感受态細胞的反複凍融會(huì)影響轉化效率？
答複：室溫融化。
5. 限制性内切酶處理的質粒是否不經純化就(jiù)能(néng)直接轉化？
答複：是的。不同的内切酶消化緩沖液對轉化效率影響微弱。每個(gè)轉化實驗将DNA體積調整到(dào)5µl。
6. 是否需要使用含山梨醇的平闆？
答複：不需要。任何平闆都适合本轉化實驗。
7. 是否添加載體DNA？
答複：不需要添加載體DNA。
引用文獻（Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit™）：
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Plasmids were transformed with high efficiency using the Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit™ in the construction of synthetic yeast promoters. Researchers showed that decreasing nucleosome affinity correlated with increasing promoter strength and expression levels higher than native species. |
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The Frozen-EZ Yeast Transformation II Kit was used to integrate various TEF1 promoter mutants upstream of a gene in Saccharomyces cerevisiae. Efficient transformation allowed comparison of gene activity and, therefore, determination of promoter strength. |
— — Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
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