Yeast Transformation Kit II for Saccharomyces cerevisiae  

酵母轉化試劑盒（用于釀酒酵母）

【通(tōng)知】：本試劑盒自(zì)2024/4月(yuè)開(kāi)始升級到(dào)第二代，在第一(yī)代試劑盒的基礎上(shàng)添加感受态凍存液，一(yī)改第一(yī)代試劑盒中感受态現做現用的嚴格要求，用戶能(néng)更靈活的調整感受态制備和轉化的時間，更人性化。同時，維持包裝規格的基礎上(shàng)，維持原價格。

産品信息

【溫馨提示】：見(jiàn)我司懋康生(shēng)物(wù)整理的酵母雙雜(zá)交（Yeast two-hybrid assay）産品專題。

産品描述

本酵母轉化試劑盒（Yeast Transformation Kit）是基于高(gāo)效的聚乙二醇/醋酸锂（PEG/LiAc）方法來制備和轉化酵母菌感受态細胞的一(yī)款試劑盒，操作簡單快捷，适用菌株廣泛，能(néng)用于多(duō)個(gè)質粒的共同轉化。每個(gè)試劑盒可做200次質粒的轉化。

本品基于第一(yī)代試劑盒做出升級，新增感受态凍存液，這樣制備好的感受态不用現做現用，能(néng)置于-80℃穩定保存6-12個(gè)月(yuè)。

産品組分

保存與運輸方法

保存：Carrier DNA置于-20ºC保存，其他室溫保存，1年(nián)有效。 

運輸：冰袋運輸。

注意事(shì)項

1） 第一(yī)次使用Carrier DNA，需要将裝Carrier DNA的整個(gè)管子置于沸水(shuǐ)中煮沸5min，然後立即放(fàng)在冰上(shàng)，之後放(fàng)在-20ºC保存。下(xià)次使用時需在冰上(shàng)解凍Carrier DNA。

2） PEG溶液低(dī)溫情況下(xià)會(huì)析出，使用前最好常溫溫育确保完全溶解才使用。

3） 酵母轉化整個(gè)過程請無菌操作。

4） 為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

使用方法

一(yī)、 酵母感受态細胞的制備

1.1 取-80℃保存的甘油菌在YPDA固體培養基上(shàng)劃線，30℃培養2-4天以活化菌種。

1.2 挑取酵母單菌落在YPDA固體培養基上(shàng)劃3-5mm短線，30℃培養2-4天。待酵母單菌落生(shēng)長(cháng)至2mm時，接種。

1.3 挑取酵母單菌落接種到(dào)3ml YPDA液體培養基，30℃培養過。

1.4 第二天轉接到(dào)含50ml YPDA液體培養基的三角瓶中繼續培養，直至OD600達到(dào)0.5-0.8範圍。4000rpm離心5min收集細胞，去上(shàng)清。

1.5 用30ml無菌去離子水(shuǐ)重懸沉澱細胞。4000rpm離心5min，去上(shàng)清。

1.6 沉澱用1.5ml的100 mM LiAc重懸（100 mM LiAc：150μl 1M LiAc+1350μl 無菌水(shuǐ)混勻即可】，之後轉移到(dào)1.5ml離心管内。4000rpm離心5min，去上(shàng)清。

1.7 用1.0ml凍存液重懸沉澱，此時，即得到(dào)所需的酵母感受态細胞。按50μl（或100μl）分裝到(dào)1.5-2ml無菌凍存管内，或直接轉化，或進行凍存。【注意】：如果進行文庫轉化，按600μl/管分裝。

1.8 按照(zhào)緩慢(màn)冷凍的方法（二選一(yī)）：①将感受态放(fàng)入程序降溫盒内，再放(fàng)到(dào)-80℃冰箱過夜，之後取出置于-80℃保存；②将感受态用多(duō)層紙(zhǐ)包好放(fàng)入泡沫盒内，再放(fàng)于-80℃冰箱過夜，之後取出置于-80℃保存。感受态至少6個(gè)月(yuè)穩定。【注意】：緩慢(màn)凍存是保存凍存後感受态細胞轉化效率的關鍵步驟。

二、酵母質粒轉化

2.1按照(zhào)以下(xià)體系制備轉化用混合液，每個(gè)轉化反應需310μl的混合液。

2.2 取310μl轉化混合液加入上(shàng)述制備好的1管感受态細胞（50-100μl/管），用槍輕輕反複吹吸菌體，使得管底的酵母細胞充分懸浮。

2.3 置于30℃水(shuǐ)浴鍋孵育30min，每10min輕輕混勻一(yī)次。

2.4 置于42℃水(shuǐ)浴鍋熱激30min，每10min輕輕混勻一(yī)次。

2.5 12000rpm離心15s，去掉上(shàng)清液。

2.6 【可選步驟】用1ml YPD plus（MS6309-50ML）重新懸浮沉澱，30℃搖床震蕩培養30-60min。12000rpm離心15s，去掉上(shàng)清液。【注意】：轉化産物(wù)使用YPD Plus複蘇，轉化效率可提高(gāo)50-100%。若想提高(gāo)現有酵母的轉化效率，推薦進行此步操作。

2.7 往沉澱内加入100μl無菌去離子水(shuǐ)，重新懸浮沉澱。并轉移到(dào)相(xiàng)應的酵母培養平闆上(shàng)，用無菌玻棒輕輕的将細胞均勻塗開(kāi)。室溫正置10 min，待液體被吸收後，倒置平闆，30℃培養2-4天。

三、酵母文庫轉化

相(xiàng)關産品

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海夢澤生物科技有限公司是一(yī)家涉足于生(shēng)命科學和生(shēng)物(wù)技(jì)術(shù)領域研究的試劑、儀器(qì)和實驗室消耗品與實驗服務工(gōng)作，主要從(cóng)事(shì)細胞生(shēng)物(wù)學、植物(wù)學、分子生(shēng)物(wù)學、免疫學、生(shēng)物(wù)化學、蛋白(bái)組學。生(shēng)物(wù)制藥與診斷試劑研發生(shēng)産等領域。 本公司秉承“以人為(wèi)本，以誠為(wèi)信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為(wèi)廣大客戶提供優質産品。