5-Fluoroorotic Acid (5-FOA) 5-氟乳清酸

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5-FOA 5-氟乳清酸；URA3基因；Orotine-5'-monophosphate (OMP) decarboxylase；Counter-selection agent反選劑；CAS：703-95-7；

産品描述：

5-氟乳清酸（5-Fluoroorotic Acid，5-FOA）用于酵母反選是一(yī)種常用的分子遺傳篩選方法。酵母菌質粒清除、質粒穿梭、等位置換和雙雜(zá)交篩選都會(huì)用到(dào)5-FOA。5-FOA自(zì)身對酵母細胞無毒，但功能(néng)型URA3基因能(néng)編碼表達乳清酸核苷-5′-單磷酸脫羧酶（OMP脫羧酶），将其轉化為(wèi)有毒形式（如5-氟尿嘧啶），從(cóng)而使得酵母細胞無法生(shēng)長(cháng)。因此，在添加尿嘧啶的5-FOA培養基中，攜帶URA3突變基因的酵母菌能(néng)正常生(shēng)長(cháng)。5-FOA主要用于釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae（URA3）的鑒定和篩選，雖然曾用于其他菌株，包括粟酒裂殖酵母Schizosaccharomyces pombe（URA4 and URA5），白(bái)色念珠菌Candida albicans（URA3）和大腸杆菌E. coli（pyrF）。酵母雙雜(zá)交系統中5-FOA的使用允許構建激活結構域雜(zá)交文庫來鑒定蛋白(bái)-蛋白(bái)相(xiàng)互作用。

産品應用：

1. 檢測酵母URA3基因表達；

2. 構建酵母雙雜(zá)交文庫；

3. 其他酵母遺傳學領域包括基因替換，可移動遺傳因子分析和基因突變鑒定研究。

重要參數

1） CAS NO：703-95-7, 220141-70-8, 207291-81-4

2） 同義名：5-fluoro-2,6-dioxo-1,2,3,6-tetrahydropyrimidine-4-carboxylic acid; 5-Fluorouracil-4-carboxylic acid; 5-Fluoro orotic acid; 2,6-Dihydroxy-5-fluoropyrimidine-4-carboxylic acid;

3） 純度：≥98%

4）外觀：類白(bái)色至淡黃色粉末

5）熔點：~258°C（高(gāo)溫非常穩定，如煮沸和高(gāo)壓滅菌）

6）溶解性：溶于DMSO，微溶于水(shuǐ)，乙醇，甲醇

使用方法

一(yī)、5-FOA培養基配置方法（以粉末形式）

1.1 配制400ml标準的酵母合成培養基，并加入1g 5-FOA（#MF2521）粉末，充分溶解混勻，0.22µm濾膜過濾除菌。【或者可當高(gāo)壓滅菌的标準培養基冷卻到(dào)55ºC後再加入1g 5-FOA粉末，然後過濾除菌。】

1.2 高(gāo)壓滅菌瓊脂粉/水(shuǐ)混合液（濃度為(wèi)20g/600ml），使其冷卻到(dào)55ºC。

1.3 将溫熱的5-FOA培養液倒入瓊脂粉/水(shuǐ)溶液内，攪勻後，倒平闆。

二、5-FOA培養基配置方法（以儲存液形式）

2.1 取100mg 5-FOA凍幹粉，用1ml無水(shuǐ)DMSO充分溶解，配制成100mg/ml（100×）的儲存液。短期頻繁使用，置于4ºC避光(guāng)保存；長(cháng)期保存，根據單次用量分裝凍存，-20ºC保存6個(gè)月(yuè)有效。

2.2 根據實驗室認可的方法，配制标準的酵母合成培養基（含瓊脂粉），高(gāo)壓滅菌。放(fàng)入轉子一(yī)起滅菌以便後續攪勻組分用。

2.3 冷卻到(dào)55ºC後加入任何熱敏感組分（氨基酸，糖類或者其他成分）。

2.4 每升培養基加10ml100×5-FOA儲存液，混勻後，倒平闆。

常見(jiàn)問題（FAQs）：

Q1. 如何保存5-FOA？

A1. 5-FOA粉末可置于4°C短期保存，-20°C長(cháng)期保存。根據産品特性溶解配置儲存液，需避光(guāng)置于4°C短期保存。小(xiǎo)量分裝後-20°C長(cháng)期保存，可穩定保存6個(gè)月(yuè)。

Q2. 5-FOA選擇性培養基pH是多(duō)少？

A2.大于pH 4.5條件(jiàn)下(xià)5-FOA選擇性被破壞，唯一(yī)的問題在于質子化形式的FOA會(huì)滲透進入細胞。一(yī)般情況标準配方配置的平闆pH=2.8。在pH=6或6.2時5-FOA完全無活性，pH =5.4時5-FOA活性很好，pH=4或更低(dī)時5-FOA活性達到(dào)100%。正常情況配置5-FOA培養基不用調pH。

Q3.預制的5-FOA選擇性平闆能(néng)保存多(duō)久？

A3.絕大多(duō)數實驗室保存5-FOA預制平闆數月(yuè)（3-6個(gè)月(yuè)）。有的實驗室數據顯示能(néng)放(fàng)9個(gè)月(yuè)和＞12個(gè)月(yuè)（4°C存放(fàng)），圈上(shàng)封口膜防止幹燥。

Q4. 5-FOA使用濃度？

A4. FOA（1mg/ml）在酵母分子遺傳學中常用作選擇性試劑；在Ura+細胞群體重篩選出Ura-細胞；篩選釀酒酵母菌乳清酸核苷-5′-單磷酸脫羧酶（OMP脫羧酶）突變株。FOA（0.1mg/ml）用來正篩選尿嘧啶營養缺陷型的硫依賴型嗜熱古細菌（Sulfolobus acidocaldarius）。

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