X-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷

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X-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷，IPTG，β-半乳糖苷酶（β-gal，beta-gal），藍白(bái)斑篩選，CAS：7240-90-6

産品信息：

産品描述：

X-Gal，英文全名5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl-beta-D-galactopyranoside，中文全名5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷，CAS NO：7240-90-6，是β-半乳糖苷酶（β-gal，beta-gal）的組織化學顯色底物(wù)，能(néng)被水(shuǐ)解生(shēng)成半乳糖和5-溴-4-氯-3-羟基吲哚。5-溴-4-氯-3-羟基吲哚是一(yī)種可溶、無色的吲哚水(shuǐ)解産物(wù)，随後通(tōng)過二聚合和氧化反應，被轉化為(wèi)一(yī)不可溶藍色産物(wù)-5,5’-二溴-4,4’-二氯靛藍。

X-Gal是分子生(shēng)物(wù)克隆實驗中用來檢測β-gal活性的一(yī)種主流試劑，可用來檢測外源DNA是否插入質粒DNA的lacZ區。當外源DNA成功插入lacZ區，會(huì)破壞β-gal的α-互補，導緻其活性喪失，則無法水(shuǐ)解X-Gal使得菌落呈白(bái)色。而保留β-gal正常活性的細菌能(néng)産生(shēng)藍色菌落。許多(duō)其它應用也常将X-Gal用作底物(wù)來檢測β-gal活性，這些應用包括：1）β-gal-抗體連接的免疫分析和免疫組化；2）基于β-gal誘導的大腸杆菌噬菌體檢測；3）腫瘤進展微轉移形成的檢測。

X-Gal常常與IPTG（貨号：MF2002-5G）聯合使用進行藍白(bái)斑克隆篩選。本品達分子生(shēng)物(wù)學級别。

基本特性：

1）CAS NO：7240-90-6

2）英文同義名：5-Bromo-4-chloro-3-indolyl β-D-galactoside; X-b-D-Galactoside; BCIG;X-Gal;

3）分子式：C14H15BrClNO6 

4）分子量：408.63 g/mol

5）純度：≥99%

6）外觀：白(bái)色至類白(bái)色或無色粉末

7）溶解性：溶于DMF（20mg/ml），DMSO

8）化學結構：

保存與運輸方法

保存：-20℃避光(guāng)幹燥保存，2年(nián)有效。

運輸：冰袋運輸。

使用方法

1. X-Gal儲存液配制

稱取0.2g X-Gal裝入15ml離心管，加入10ml DMF，震蕩使其充分溶解。按照(zhào)1ml/管分裝，并用鋁箔紙(zhǐ)包裹離心管使其避光(guāng)，置于-20℃凍存，正常情況下(xià)6-12個(gè)月(yuè)穩定。

2. IPTG儲存液配制

稱取0.238g IPTG（貨号：MF2002-5G）溶于10ml去離子水(shuǐ)中，充分溶解混勻後，經0.22μm濾膜過濾除菌，即得到(dào)100mM（100×）的儲存液。按照(zhào)1ml/管分裝，置于-20℃凍存，高(gāo)達一(yī)年(nián)穩定。

3. 藍白(bái)斑篩選方法

X-Gal常與IPTG聯合使用進行藍白(bái)斑克隆篩選。

方法1：X-Gal、IPTG加入固體培養基（推薦）

1）高(gāo)壓滅菌已加瓊脂的培養基，并冷卻到(dào)50℃左右；

2）每ml培養基内加入10μl 20mg/ml X-gal溶液、10μl 100mM IPTG（使其終濃度達到(dào)1mM）；

3）加入适量篩選抗生(shēng)素如氨苄青黴素，卡那黴素，羧苄青黴素等；

4）混勻後倒闆，置于無菌超淨台内使培養基凝固（通(tōng)常需要30min）。

【注意】：藍白(bái)斑篩選用的平闆請置于4℃避光(guāng)保存，1周穩定。

5）将轉化的感受态細胞塗布到(dào)上(shàng)述平台，于37℃倒置培養過夜，觀察藍白(bái)斑情況。

方法2：X-Gal、IPTG直接塗布平闆表面

1）于無菌超淨台内幹燥倒好的平闆；

2）加120μl 20mg/ml X-gal溶液、40μl 100mM IPTG到(dào)平闆表面，并塗布均勻覆蓋整個(gè)平闆；

3）于無菌超淨台内幹燥上(shàng)述平闆，至少需要30min；

4）将轉化的感受态細胞塗布到(dào)上(shàng)述平台，于37℃倒置培養過夜，觀察藍白(bái)斑情況。

注意事(shì)項

1）X-gal的首選溶劑為(wèi)DMF。若使用DMSO作為(wèi)溶劑，選擇相(xiàng)對新鮮且高(gāo)質量的DMSO極為(wèi)重要，持續性的研究發現由于使用舊(jiù)或低(dī)質量DMSO造成很多(duō)問題。建議大部分實驗都用DMF作為(wèi)溶劑。

2）為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

相(xiàng)關産品：

 — — Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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