核酸/蛋白(bái)提取重要工(gōng)具酶：

脫氧核糖核酸酶I，核糖核酸酶A，全能(néng)核酸酶

（DNase I，RNase A，Benzonase）

搜索關鍵詞：

脫氧核糖核酸酶I（DNase I），Sigma D5025，核糖核酸酶A（RNase A）,全能(néng)核酸酶（Benzonase）,Merck 70746-3；CAS：9001-99-4；蛋白(bái)酶K（Protease K）；

背景需求：

分子生(shēng)物(wù)學實驗中，要想研究核酸（DNA, RNA）的各種功能(néng)、表達和群落分布等相(xiàng)關研究，首先要做的第一(yī)步就(jiù)是核酸制備。核酸制備的第一(yī)步就(jiù)是細胞内含物(wù)（細胞核，細胞漿）的釋放(fàng)，由于DNA和RNA經常會(huì)裂解的過程中共同釋放(fàng)出來，不管采用任何強烈程度的提取液都無法避免兩者的幹擾，為(wèi)此，需要采用特異性的酶來去除幹擾，保證任一(yī)核酸類型的純度。要提取高(gāo)質量的DNA，需要用RNase A來消化樣品中殘留的RNA；要提取高(gāo)質量的RNA，需要用DNase I來消化樣品中殘留的基因組DNA等。

蛋白(bái)研究中，尤其是重組蛋白(bái)（比如生(shēng)物(wù)制品重組單克隆抗體，重組功能(néng)蛋白(bái)，甚至是疫苗）的制備中，對蛋白(bái)的純度要求很高(gāo)，而蛋白(bái)提取的第一(yī)步同樣是對細胞内含物(wù)的釋放(fàng)，此時随著(zhe)而來的問題就(jiù)是要盡量去除核酸的幹擾，此時既有DNA又(yòu)有RNA的幹擾，傳統方法選擇DNase+RNase組合的酶消化或超聲方法來破壞RNA，這兩種方法都存在不少的缺點，而全能(néng)核酸酶（Benzonase）的出現，讓這一(yī)步變得很簡單。一(yī)種酶即可輕松去除任何核酸類型的幹擾。

我司（懋康MKBio）生(shēng)物(wù)根據科研工(gōng)作者和工(gōng)業(yè)用戶的需求，生(shēng)産和供應幾種應用率很高(gāo)的酶制品，産品品質高(gāo)，且能(néng)有大規格供應，歡迎咨詢。

Part 1. 脫氧核糖核酸酶I (DNase I, CAS：9003-98-9)

常見(jiàn)同義名：

DNase I, Deoxyribonucleate 5’-oligonucleotidohydrolase, Deoxyribonuclease A脫氧核糖核酸5′-寡核苷酸水(shuǐ)解酶，脫氧核糖核酸酶A

CAS NO.：9003-98-9

來源：牛胰腺Bovine Pancreas

分子量：~31kDa

特異性（目的）：水(shuǐ)解多(duō)種形式DNA，如單鏈DNA、雙鏈DNA，甚至染色質（其切割速率受組蛋白(bái)影響）

基本描述：

脫氧核糖核酸酶I（Deoxyribonuclease I，DNase I），在大多(duō)數細胞和組織中都能(néng)發現的一(yī)種核酸内切酶，偏好切割鄰近嘧啶的磷酸二酯鍵，産生(shēng)5’端為(wèi)磷酸基團、3’端為(wèi)羟基的多(duō)聚核苷酸（見(jiàn)下(xià)圖反應流程圖1），平均消化産物(wù)最小(xiǎo)為(wèi)多(duō)聚四核苷酸。Mg2+存在條件(jiàn)下(xià)，DNase I可随機(jī)識别和切斷DNA任一(yī)條鏈上(shàng)的任意位點；而在Mn2+存在條件(jiàn)下(xià)，DNase I識别DNA的兩條鏈并在幾乎相(xiàng)同的位點進行切割。

圖1. 脫氧核酸糖酸酶I(DNase I)作用機(jī)理圖

主要應用：

• 制備不含DNA的RNA樣本；

• RT-PCR反應前RNA樣本内基因組DNA等可能(néng)存在DNA污染的去除；

• T7，T3，SP6等RNA聚合酶催化的體外RNA轉錄後DNA模闆的去除；

• DNase I足迹法（DNase I footprinting）研究DNA-蛋白(bái)質相(xiàng)互作用；

• 缺口平移法标記探針用；

• 制備随機(jī)DNA片段文庫；

• TUNEL細胞凋亡檢測中用于剪切DNA制備陽性對照(zhào)；

訂購信息：我司（懋康生(shēng)物(wù)MKBio）提供的脫氧核糖核酸酶I（DNase I），來源于牛胰腺，通(tōng)過親和色譜純化所得，不含RNase和蛋白(bái)酶污染。提供凍幹粉和液體形式的産品，具體信息見(jiàn)懋康網站的介紹。訂購信息：www.maokangbio.com,電(diàn)話：02154736159，QQ:2971634497。

【溫馨提示】：見(jiàn)我司懋康生(shēng)物(wù)整理的Deoxyribonuclease I (DNase I)脫氧核糖核酸酶I，來源于牛胰腺産品專題。

Part 2. 蛋白(bái)酶K (Proteinase K, CAS：39450-01-6)

常見(jiàn)同義名：

Proteinase K (from Tritirachium album)蛋白(bái)酶K（林伯氏白(bái)色念球菌）；Endopeptidase K肽鏈内切酶K；

CAS NO.：39450-01-6

來源：基因來源林伯氏白(bái)色念球菌(Tritirachium album limber)，酵母重組表達

分子量：~29.3kDa

特異性（目的）：切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵，用于生(shēng)物(wù)樣品内蛋白(bái)質的降解，常用于核酸制品中核酸酶（Nuclease）的去除，能(néng)降解天然蛋白(bái)和變性蛋白(bái)。

基本描述：

蛋白(bái)酶K（Proteinase K），一(yī)種切割活性較廣的絲氨酸蛋白(bái)酶，pH 4-12的寬廣範圍内均有活性，SDS、尿素或EDTA存在條件(jiàn)下(xià)也很穩定。相(xiàng)對分子量約29.3kDa，能(néng)夠切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵，用于生(shēng)物(wù)樣品内蛋白(bái)質的降解。對天然和變性蛋白(bái)都表現出廣譜的切割特異性，廣泛用于DNA和RNA的純化實驗。

主要應用：

• 對酵母菌、細菌、組織裂解液或哺乳動物(wù)細胞裂解液中污染蛋白(bái)的降解來改善核酸的提取質量和産量；

• 對樣本材料内酶比如DNase，RNase的失活來改善高(gāo)分子量核酸的提取質量和産量；

• 膜結合蛋白(bái)定位和定向用的拓撲探針；

• 改善PCR克隆效率；

• 核酸酶保護實驗中失活酶混合物(wù)；

• 去除結合到(dào)陽離子蛋白(bái)如溶菌酶和核酸酶A上(shàng)的内毒素；

• 對石蠟包埋組織的處理以暴露抗原表位用于抗體标記用；

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Part 3. 核糖核酸酶A (RNase A, CAS：9001-99-4)

常見(jiàn)同義名：

Ribonuclease I核糖核酸酶I；Pancreatic Ribonuclease胰腺核酸酶；Endoribonuclease I内源核糖核酸酶I；Ribonucleate 3′-pyrimidinooligonucleotidohydrolase核糖核酸3′-嘧啶寡核苷酸水(shuǐ)解酶；

CAS NO.：9001-99-4

來源：Bovine Pancreas牛胰腺

分子量：~13.7kDa

特異性（目的）：低(dī)鹽濃度（0-100mM NaCl），可切割單鏈RNA，雙鏈RNA，以及RNA-DNA雜(zá)交形成的RNA鏈。高(gāo)鹽濃度（≥0.3M），RNase A僅特異性切割單鏈RNA。

基本描述：

核糖核酸酶A，英文名Ribonuclease A，縮寫RNase A，CAS NO：9001-99-4，一(yī)種核糖核酸内切酶（endoribonuclease），特異性識别嘧啶類核苷酸3’-核糖磷酸基團（作用機(jī)理見(jiàn)圖2），如序列pG-pG-pC-pA-pG經切割産生(shēng)pG-pG-pCp和A-PG，當切割單鏈RNA時活性最高(gāo)，推薦工(gōng)作濃度為(wèi)1-100μg/ml，兼容于各種反應體系。低(dī)鹽濃度（0-100mM NaCl），可切割單鏈RNA，雙鏈RNA，以及RNA-DNA雜(zá)交形成的RNA鏈。高(gāo)鹽濃度（≥0.3M），RNase A僅特異性切割單鏈RNA。RNase A不會(huì)水(shuǐ)解DNA，因DNA缺少形成環形中間體必需的2’-OH。

主要應用：

• RNase保護實驗（RNase protection assays）；

• 去除非特異性的結合RNA（bound RNA）；

• RNA序列分析；

• 蛋白(bái)樣品中含有的RNA污染降解；

• DNA純化；

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相(xiàng)關産品：

【備注】：核糖核酸酶H (RNase H)：特異性分解RNA-DNA雜(zá)交體中的RNA鏈的一(yī)種核糖核酸内切酶，不能(néng)消化單鏈或雙鏈DNA。

Part 4. 全能(néng)核酸酶/廣譜核酸酶 (Benzonase, CAS：9025-65-4)

常見(jiàn)同義名：

Benzonase endonuclease；Benzonase Nuclease；BenzNuclease; Universal Nuclease; Turbonuclease;全能(néng)核酸酶；廣譜核酸酶；

CAS NO.：9025-65-4

來源：基因來自(zì)粘質沙雷氏菌（Serratia Marcescen，又(yòu)稱為(wèi)靈杆菌）；酵母重組表達；

分子量：~27.9kDa

特異性（目的）：可以切割和降解各種形式的DNA和RNA（單鏈，雙鏈，線性，環狀，或超螺旋形式），生(shēng)成含有5’-磷酸末端的3-5個(gè)寡核苷酸殘基片段，并且在很多(duō)種操作條件(jiàn)下(xià)有效。

基本描述：

Benzonase，中文名全能(néng)核酸酶，或廣譜核酸酶，一(yī)種源于粘質沙雷氏菌（Serratia Marcescen，又(yòu)稱為(wèi)靈杆菌）的非特異性核酸内切酶，由兩個(gè)完全一(yī)樣的亞基構成，每個(gè)亞基大約30kDa，含有245個(gè)氨基酸和兩個(gè)必需的二硫鍵。可以切割和降解各種形式的DNA和RNA（單鏈，雙鏈，線性，環狀，或超螺旋形式），生(shēng)成含有5’-磷酸末端的3-5個(gè)寡核苷酸殘基片段，并且在很多(duō)種操作條件(jiàn)下(xià)有效（反應機(jī)制見(jiàn)圖3）。對核酸堿基序列無特異性要求，可在鏈内任意核苷酸間進行切割，廣泛用于去除生(shēng)物(wù)制品中的核酸。

主要應用：

• 科研研究中，作為(wèi)培養細胞上(shàng)清和細胞裂解液去粘度的首選酶制劑，去除核酸幹擾提高(gāo)後續蛋白(bái)純化或功能(néng)研究；

• 用在生(shēng)化分析樣品制備——ELISA、色譜分析、雙相(xiàng)電(diàn)泳和足迹分析等過程，使用本品benonase處理含有核酸的蛋白(bái)樣品，可提高(gāo)分辨率，以及提高(gāo)回收率。

• 疫苗工(gōng)業(yè)、蛋白(bái)和多(duō)糖類制藥工(gōng)業(yè)，去除宿主核酸殘留，使得疫苗和蛋白(bái)類核酸污染顯著降低(dī)至皮克級别，提供生(shēng)物(wù)功效。

• 防止細胞凝聚（Cell clumping），特别是融化凍存的細胞樣品時；

訂購信息：我司（懋康生(shēng)物(wù)MKBio）提供的全能(néng)核酸酶（Benzonase），酵母重組表達，通(tōng)過親和色譜純化所得，無細菌内毒素污染，無蛋白(bái)酶殘留。性價比可與sigma或merck同系列産品媲美。訂購信息：www.maokangbio.com,電(diàn)話：02154736159，QQ:2971634497。

【溫馨提示】具體信息見(jiàn)懋康網站全能(néng)核酸酶精品介紹（含常見(jiàn)問題和使用方法）。

注意事(shì)項

為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

本公司提供産品僅能(néng)用作科研用途，不可他用。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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