目錄号 | MF0402-10MG | 售價 | 250.00元 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
規格 | 10mg | 運輸溫度 | 冰袋 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
其他名稱 | Deoxyribonucleate 5’-oligonucleotidohydrolase, Deoxyribonuclease A 脫氧核糖核酸 5′-寡核苷酸水(shuǐ)解酶,脫氧核糖核酸酶A | 保存溫度 | -20°C幹燥保存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||
CAS号 | 9003-98-9 | 有效期 | 3年(nián) | ||||||||||||||||||||||||||||||||
應用 | 去除蛋白(bái)或RNA樣品中的DNA | 訂購數量 |
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産品簡介: DNase I from Bovine Pancreas, ≥500 units/mg protein 脫氧核糖核酸酶I (DNase I),來源于牛胰腺
關鍵詞: Deoxyribonucleate 5 –Oligonucleotidohydrolase,5′-寡核苷酸-水(shuǐ)解酶,Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas,EC No: 3.1.21.1,CAS NO:9003-98-9
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産品描述 脫氧核糖核酸酶I,英文Deoxyribonuclease I,縮寫DNase I,在大多(duō)數細胞和組織中都能(néng)發現的一(yī)種核酸内切酶,偏好切割鄰近嘧啶的磷酸二酯鍵,産生(shēng)5’端為(wèi)磷酸基團、3’端為(wèi)羟基的多(duō)聚核苷酸,平均消化産物(wù)最小(xiǎo)為(wèi)多(duō)聚四核苷酸。Mg2+存在條件(jiàn)下(xià),DNase I可随機(jī)識别和切斷DNA任一(yī)條鏈上(shàng)的任意位點;而在Mn2+存在條件(jiàn)下(xià),DNase I識别DNA的兩條鏈并在幾乎相(xiàng)同的位點進行切割。DNase I可水(shuǐ)解多(duō)種形式DNA,如單鏈DNA、雙鏈DNA,甚至染色質(其切割速率受組蛋白(bái)影響)。
脫氧核糖核酸酶I,英文Deoxyribonuclease I,縮寫DNase I,最早從(cóng)胰腺中分離而來,至今哺乳動物(wù)胰腺也是最主要的來源之一(yī)。DNase I以兩對二硫鍵結合的多(duō)種糖蛋白(bái)混合形式存在。最佳的工(gōng)作範圍是pH 7-8,DNase的活性依賴于Ca2+,并可被二價金屬離子如Co2+,Mn2+,Zn2+等激活。5mM Ca2+可保護酶使其不被水(shuǐ)解,而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原來的1/2。
本品來自(zì)牛胰腺,親和色譜純化制備所得,常用于去除蛋白(bái)或RNA樣品中的DNA,或者用于向DNA中引入缺口使标記堿基插入DNA。本品以凍幹粉形式供應,比活≥500 Kunit Units/mg蛋白(bái)。
産品特性 1) CAS NO:9003-98-9 2) 分子量:~31 kDa 3) 同義名:DNase I, Deoxyribonucleate 5’-oligonucleotidohydrolase, Deoxyribonuclease A 脫氧核糖核酸 5′-寡核苷酸水(shuǐ)解酶,脫氧核糖核酸酶A 4) 比活力:≥500 Kunit Units/mg protein 5) 活力定義:在50µl含40mM Tris-HCl, pH8.0,2.5 mM MgSO4,1mM CaCl2的反應緩沖體系中,37℃,10min内完全降解1µg λ-DNA所需的酶量即為(wèi)一(yī)個(gè)活力單位。此反應條件(jiàn)下(xià)得到(dào)的一(yī)個(gè)單位DNase活力約等于一(yī)個(gè)Kuntiz unit。 6) 激活劑:多(duō)種二價金屬離子如Mg2+、Mn2+、 Ca2+、Co2+、and Zn2+ 7) 抑制劑:EGTA,EDTA,鹽離子濃度(>100mM)都能(néng)降低(dī)DNase活性 8) 熱失活:含終止溶液(20mM EGTA,pH 8.0)内65℃,處理10min 9) 溶解性:溶于緩沖液(≥1mg/ml in 20mM Tris-HCl(pH 7.5), 1mM MgCl2, 50% 甘油)
保存與運輸方法 保存:凍幹粉-20℃幹燥凍存,至少3年(nián)穩定。 運輸:冰袋運輸。
使用方法 一(yī)、 儲存液制備 将低(dī)溫保存的本品置于室溫回溫至少20min,低(dī)速短時離心後,加入适量緩沖液配制成至少≥1mg/ml儲存液(如:20mM Tris-HCl(pH 7.5), 1mM MgCl2, 50% 甘油),根據一(yī)定用量分裝置于-20℃保存,至少1年(nián)穩定。
二、 反應緩沖液制備 建議1×反應緩沖液:40mM Tris-HCl(pH 8.0), 2.5mM (up to 10mM) MgSO4,1mM (up to 10mM) CaCl2 【注意】:當起始原料含EGTA,EDTA,其他螯合劑,和/或高(gāo)濃度鹽離子,此時反應緩沖液需更高(gāo)濃度的Mg2+和Ca2+。
三、使用步驟(作為(wèi)參考,具體實驗可做适當調整) 2.1 往一(yī)個(gè)RNase-free PCR管内加入:1µg RNA樣本;49 µl 1×反應緩沖液;1 µl DNase I, 1 unit/ml;【注意:酶的實際比活力請見(jiàn)産品标簽】,混勻。 2.2 37℃孵育10-15min。【注意:消化時間不要超過15min或消化溫度不要高(gāo)于37℃,否則殘留的RNase A污染可能(néng)會(huì)開(kāi)始降解RNA】 2.3 加入1µl終止液(20mM EGTA,pH 8.0)結合Ca2+和Mg2+,之後于65-70℃失活10min,終止反應。【注意:必須在熱失活之前加入終止液】
注意事(shì)項 1) 在不同的反應緩沖體系内,用來完全消化一(yī)定量DNA所需的DNase I量不同,請根據具體的工(gōng)作體系或實驗經驗來決定。【注意:鹽濃度>100mM會(huì)降低(dī)DNase I活性】 2) 為(wèi)了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。
相(xiàng)關産品:
注意事(shì)項 為(wèi)了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海夢澤生物科技有限公司是一(yī)家涉足于生(shēng)命科學和生(shēng)物(wù)技(jì)術(shù)領域研究的試劑、儀器(qì)和實驗室消耗品與實驗服務工(gōng)作,主要從(cóng)事(shì)細胞生(shēng)物(wù)學、植物(wù)學、分子生(shēng)物(wù)學、免疫學、生(shēng)物(wù)化學、蛋白(bái)組學。生(shēng)物(wù)制藥與診斷試劑研發生(shēng)産等領域。 本公司秉承“以人為(wèi)本,以誠為(wèi)信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為(wèi)廣大客戶提供優質産品。
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