Benzonase Nuclease 全能(néng)核酸酶/廣譜核酸酶
（酵母重組表達，無細菌内毒素殘留，無蛋白(bái)酶污染）
【公告】：應客戶和市(shì)場需求，我司在供應真核表達無内毒素殘留全能(néng)核酸酶（#MP1509）的基礎上(shàng)，新增兩款原核表達普通(tōng)科研級别的全能(néng)核酸酶，一(yī)款是不帶标簽的全能(néng)核酸酶（#MP1510），一(yī)款是帶Strep Tag II标簽的全能(néng)核酸酶（#MP1511），新增産品适用于對内毒素水(shuǐ)平無特别要求的實驗。
産品關鍵詞：
Benzonase Nuclease 全能(néng)核酸酶（廣譜核酸酶）；粘質沙雷氏菌（Serratia Marcescen）；非特異性核酸内切酶；RIPA裂解液；DNA/RNA降解；CAS：9025-65-4；
基本描述：
Benzonase，中文名全能(néng)核酸酶，或廣譜核酸酶，一(yī)種源于粘質沙雷氏菌（Serratia Marcescen，又(yòu)稱為(wèi)靈杆菌）的非特異性核酸内切酶，由兩個(gè)完全一(yī)樣的亞基構成，每個(gè)亞基大約30kDa，含有245個(gè)氨基酸和兩個(gè)必需的二硫鍵。可以切割和降解各種形式的DNA和RNA（單鏈，雙鏈，線性，環狀，或超螺旋形式），生(shēng)成含有5’-磷酸末端的3-5個(gè)寡核苷酸殘基片段，并且在很多(duō)種操作條件(jiàn)下(xià)有效。對核酸堿基序列無特異性要求，可在鏈内任意核苷酸間進行切割，廣泛用于去除生(shēng)物(wù)制品中的核酸。
主要應用：
1、科研研究中，作為(wèi)培養細胞上(shàng)清和細胞裂解液去粘度的首選酶制劑，去除核酸幹擾提高(gāo)後續蛋白(bái)純化或功能(néng)研究；
需求背景：進行重組蛋白(bái)純化或者天然蛋白(bái)提取研究中，第一(yī)步就(jiù)需要用細胞/組織裂解液如RIPA對其進行裂解釋放(fàng)蛋白(bái)，此時往往伴随著(zhe)大量的基因組DNA被釋放(fàng)出來，很多(duō)并不是獨立存在的，往往與核蛋白(bái)以複合物(wù)的形式存在，導緻提取物(wù)非常粘稠，呈鼻涕狀。蛋白(bái)提取過程中若不能(néng)很好處理這些粘稠基因組，會(huì)造成蛋白(bái)提取效率的降低(dī)極核蛋白(bái)的丢失。傳統方法有采用超聲處理，DNase/RNase消化來降低(dī)或消除核酸影響，但由于操作的非标準化，通(tōng)常難以評估此核酸清除步驟的有效性和數據穩定性。
此時，若在加裂解液的同時加入一(yī)定量的Benzonase Nuclease全能(néng)核酸酶（廣譜核酸酶），可以很好的清除粗提物(wù)中的核酸，有效降低(dī)粘度【見(jiàn)圖1】，提高(gāo)後續操作的效率。
圖1、細胞裂解液經Benonase處理和未處理的比較圖。左管是僅加RIPA裂解液所得的離心産物(wù)，可看(kàn)到(dào)鼻涕狀粘稠物(wù)懸浮在管中；右管事(shì)加RIPA裂解液和Benonase共同處理所得的離心産物(wù)，可看(kàn)到(dào)上(shàng)清非常透明。
2、用在生(shēng)化分析樣品制備— — ELISA、色譜分析、雙相(xiàng)電(diàn)泳和足迹分析等過程，使用本品benonase處理含有核酸的蛋白(bái)樣品，可提高(gāo)分辨率，以及提高(gāo)回收率。
3、疫苗工(gōng)業(yè)、蛋白(bái)和多(duō)糖類制藥工(gōng)業(yè)，去除宿主核酸殘留，使得疫苗和蛋白(bái)類核酸污染顯著降低(dī)至皮克級别，提供生(shēng)物(wù)功效。
4、防止細胞凝聚（Cell clumping），特别是融化凍存的細胞樣品時；
應用優勢：Benonase不僅無蛋白(bái)酶活性，而且不會(huì)對健康細胞的生(shēng)長(cháng)造成幹擾。
應用背景：全血來源的外周血單個(gè)核細胞（PBMCs）在疫苗研究中具有重要的應用價值，比如，定量疫苗誘導的T細胞反應。T細胞反應實驗最初要求新鮮分離的細胞從(cóng)而達到(dào)最佳的檢測信号，這給大規模的實驗中對樣本處理提出嚴格的操作限制。然而，凍存PBMCs（尤其是從(cóng)凍存血液中分離出的PBMCs）一(yī)旦融化非常容易聚集到(dào)一(yī)起，影響後續的分析。
應用示例：Smith JG et al.研究顯示Benonase（≥50 U/ml）加入PBMC融化緩沖液中有效預防細胞凝聚，從(cóng)而使得PBMC冷凍保存的應用成為(wèi)可能(néng)。【文獻來源：Smith JG et al.Development and validation of a gamma interferon ELISPOT assay for quantitation of cellular immune responses to varicella-zoster virus. Clin Diagn Lab Immunol. 2001 Sep;8(5):871-9.】
Fig. 2. Comparison of results with frozen PBMCs isolated from freshly collected blood versus blood stored overnight (4°C). SFC represent the adjusted VZV ELISPOT response, i.e., the mean response to VZV antigen for replicate wells minus the mean response to MRC-5 control antigen for replicate wells.
産品優勢：
1、酵母重組表達，無細菌内毒素殘留。【大部分商業(yè)化的Benonase都是大腸杆菌重組表達，由于自(zì)身菌株特性，不管純化方法如何，或多(duō)或少都會(huì)受細菌内毒素影響。】
2、無蛋白(bái)酶殘留，不會(huì)對蛋白(bái)本身造成幹擾，影響測試結果準确性。
3、比活力高(gāo)≥1.0×106U/mg蛋白(bái)【活性單位定義：在37℃，pH8.0反應條件(jiàn)，2.625ml反應體系中，30min内使△A260吸收值變化1.0（相(xiàng)當于完全消化37μg鲑魚精DNA成為(wèi)寡核苷酸）所用的酶量定義為(wèi)一(yī)個(gè)活性單位（U）】
4、提供兩種純度的産品：≥ 90%（SDS-PAGE），以及≥ 99%（SDS-PAGE），前者滿足最基本的科研應用，價格更經濟實惠；後者滿足生(shēng)物(wù)制品要求。
5、酶活性值：≥250 U/μL。對于小(xiǎo)體積制備物(wù)，可用稀釋緩沖液20mM Tris-Cl pH8.0, 2mM MgCl2, 2mM NaCl稀釋到(dào)一(yī)定濃度，再加入體系中。稀釋後溶液可4℃保存幾天維持穩定。
6、液體酶形式提供，使用更方便。直接加入裂解液共同使用即可。
産品使用：
本品為(wèi)即用型溶液，可根據終濃度直接加入反應體系，或稀釋到(dào)一(yī)個(gè)中間濃度後直接加入反應體系【稀釋方法，見(jiàn)FAQs】。對于不同的應用，酶使用量有所差别，建議用量參考下(xià)表，具體實驗請做優化調整。
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實際應用 |
建議工(gōng)作濃度 |
工(gōng)作條件(jiàn)* |
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常規蛋白(bái)純化 |
25U/ml |
37℃30-60min |
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核蛋白(bái)純化 |
100U/ml |
37℃10min；4℃30min； |
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病毒純化 |
12.5U/ml |
37℃30min |
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【*】Benzonase Nuclease的有效工(gōng)作溫度是0-42°C，最佳工(gōng)作溫度是37℃。低(dī)溫使用酶活性有所降低(dī)，可通(tōng)過 多(duō)添加2-5倍Benzonase Nuclease或延長(cháng)消化時間（2-3h）來進行活力補償。 |
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産品訂購：更大包裝或産品技(jì)術(shù)問題，請來電(diàn)/在線咨詢，電(diàn)話：021-54736159。QQ：2971634497。
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貨号 |
産品名稱 |
規格 |
CAS NO. |
價格（元） |
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MP1509-25KU |
Benzonase Nuclease 全能(néng)核酸酶 |
25KU |
9025-65-4 |
400 |
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MP1509-50KU |
Benzonase Nuclease 全能(néng)核酸酶 |
50KU |
9025-65-4 |
720 |
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MP1509-100KU |
Benzonase Nuclease 全能(néng)核酸酶 |
100KU |
9025-65-4 |
1380 |
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MP1510-25KU |
Benzonase Nuclease 全能(néng)核酸酶（不含标簽） |
25KU |
9025-65-4 |
350 |
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MP1510-100KU |
Benzonase Nuclease 全能(néng)核酸酶（不含标簽） |
100KU |
9025-65-4 |
1180 |
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MP1511-25KU |
Benzonase Nuclease 全能(néng)核酸酶（帶Strep标簽） |
25KU |
9025-65-4 |
600 |
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MP1511-100KU |
Benzonase Nuclease 全能(néng)核酸酶（帶Strep标簽） |
100KU |
9025-65-4 |
1800 |
【産品選擇指導】：
1） 不需帶标簽的全能(néng)核酸酶，且對内毒素水(shuǐ)平要求不高(gāo)（比如做蛋白(bái)結晶實驗），請選擇Benzonase Nuclease 全能(néng)核酸酶（不含标簽）（#MP1510），價格最經濟。
2） 若需帶标簽的全能(néng)核酸酶，可選擇帶Strep标簽的全能(néng)核酸酶（貨号：MP1511-25KU）或帶His标簽的全能(néng)核酸酶（貨号：MP1509-25KU）。前者滿足對内毒素水(shuǐ)平要求不高(gāo)的實驗，後者适用于要求無内毒素的實驗。
3） 若需不含内毒素污染的全能(néng)核酸酶，請選擇真核重組表達的全能(néng)核酸酶（貨号：MP1509-25KU）。
我司提供的Benzonase，比Merck、Sigma同等類型的産品性價比高(gāo)很多(duō)，且基本有現貨，見(jiàn)下(xià)：
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品牌/名稱 |
貨号 |
規格 |
濃度 |
價格（元） |
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Merck（Benzonase Nuclease,純度>90%，E. Coli） |
70746-3 |
10KU |
25 U/μL |
1835 |
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Merck（Benzonase Nuclease,純度>90%，E. Coli） |
71205-3 |
25KU |
250 U/μL |
2828 |
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Sigma（Benzonase Nuclease,純度>90%，E. Coli） |
E1014 |
5KU |
≥250 U/μL |
743 |
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Sigma（Benzonase Nuclease,純度>90%，E. Coli） |
E1014 |
25KU |
≥250 U/μL |
2629 |
【注】：Benzonase is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany
相(xiàng)關産品：更大包裝或産品技(jì)術(shù)問題，請來電(diàn)/在線咨詢，電(diàn)話：021-54736159。QQ：2971634497。
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貨号 |
産品名稱 |
規格 |
價格（元） |
貨期 |
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MP1501-100ML |
100ml |
225 |
現貨 |
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MP1502-100ML |
RIPA Lysis Buffer (Medium) RIPA裂解液（中） |
100ml |
225 |
現貨 |
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MP1503-100ML |
RIPA Lysis Buffer (Weak) RIPA裂解液（弱） |
100ml |
225 |
現貨 |
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MP1504-100ML |
Lysis Buffer for WB/IP Assays 免疫印迹及免疫沉澱用（WB/IP）裂解液 |
100ml |
225 |
現貨 |
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MP1505-100ML |
NP-40 Lysis Buffer NP-40裂解液 |
100ml |
225 |
現貨 |
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MP1506-100ML |
SDS Lysis Buffer SDS裂解液 |
100ml |
225 |
現貨 |
常見(jiàn)問題（FAQs）：
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問1：在實驗的哪一(yī)步加入Benzonase全能(néng)核酸酶？ 答1：根據具體應用有所變化，但是總的原則是，在發酵步驟之後和蛋白(bái)收集之前加入Benzonase。 |
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問2：如何稀釋Benzonase全能(néng)核酸酶？ 答2：一(yī)般建議按照(zhào)1:1000-1:20000來稀釋，具體根據實際應用濃度、反應體系、反應溫度、作用時間等參數來靈活變動。使用稀釋緩沖液20mM Tris-Cl pH8.0, 2mM MgCl2, 2mM NaCl來稀釋，4℃保存幾天穩定。最好現配現用。或使用貯存緩沖液20mM Tris-Cl pH8.0, 2mM MgCl2, 2mM NaCl, 50%甘油來稀釋到(dào)一(yī)個(gè)中間濃度，-20℃保存長(cháng)期穩定。 |
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問3：Benzonase全能(néng)核酸酶是否無蛋白(bái)酶活性？ 答3：本品未檢測到(dào)蛋白(bái)酶活性，因此使用過程中不會(huì)被降解。但是樣品自(zì)身含有的蛋白(bái)酶可能(néng)會(huì)對本品造成不可逆的降解。 |
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問4：Benzonase全能(néng)核酸酶是否安全？ 答4：内部毒性測試數據，單次注射小(xiǎo)鼠和大鼠：發現在很高(gāo)濃度下(xià)都沒有毒性效應。另，極高(gāo)濃度靜(jìng)脈注射小(xiǎo)鼠未觀察到(dào)緻突變性。 |
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問5：為(wèi)什麽Benzonase全能(néng)核酸酶不工(gōng)作？什麽會(huì)抑制其活性？ 答5：在寬廣的作用條件(jiàn)下(xià)Benzonase都具有活性【見(jiàn)下(xià)表】，然而，1-2mM Mg2+對酶活性維持是十分必要的。Mn2+可替代Mg2+，但Benzonase隻有在Mg2+存在下(xià)才能(néng)達到(dào)最佳工(gōng)作活性。當單價陽離子濃度＞300mM，磷酸鹽濃度＞100mM，硫酸铵濃度＞100mM的情況下(xià)，酶活性被抑制約50%。另外，＞1mM EDTA也會(huì)抑制酶活性。
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問6：發現Benzonase全能(néng)核酸酶活性喪失，為(wèi)什麽？ 答6：Benzonase通(tōng)常很穩定，但是某些稀少情況會(huì)發生(shēng)活力損失。有幾種可能(néng)原因：由于樣品中變性劑比如蛋白(bái)酶的存在或不正确保存方法引起的不可逆酶活性喪失；由于螯合劑如EDTA存在引起可逆失活，因其去除維持酶活必須的Mg2+。 |
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問7：一(yī)不小(xiǎo)心将Benzonase全能(néng)核酸酶置于工(gōng)作台上(shàng)整周，是否能(néng)繼續使用？ 答7：Benzonase穩定性測試顯示其十分穩定。25°C（濕度60%）保存數周酶活性不受影響。 |
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問8：如何抑制Benzonase全能(néng)核酸酶活性？ 答8：操作體系中添加劑/試劑都有可能(néng)影響Benzonase活性——比如，高(gāo)鹽（單價陽離子濃度＞300mM，磷酸鹽濃度＞100mM，硫酸铵濃度＞100mM）。其他已知抑制劑如螯合劑EDTA，導緻Mg2+損失（EDTA＞1mM即可抑制酶活性），這一(yī)抑制可通(tōng)過添加MgCl2來解除。 |
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問9：如何去除體系中的Benzonase全能(néng)核酸酶？ 答9：通(tōng)過以下(xià)幾種下(xià)遊的操作方法來去去除，比如澄清用的深度過濾法；TFF (Tangential flow filtration)；色譜純化（IEX, SEC, HIC）等。 |
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問10：Benzonase全能(néng)核酸酶與蛋白(bái)酶抑制劑cocktail兼容嗎(ma)？ 答10：兼容。但需注意很多(duō)商業(yè)化的蛋白(bái)酶cocktails含有EDTA。＞1mM EDTA會(huì)抑制酶活性。 |
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注意事(shì)項
為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。
本産品僅能(néng)用作科研用途，不可他用。
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海夢澤生物科技有限公司是一(yī)家涉足于生(shēng)命科學和生(shēng)物(wù)技(jì)術(shù)領域研究的試劑、儀器(qì)和實驗室消耗品與實驗服務工(gōng)作，主要從(cóng)事(shì)細胞生(shēng)物(wù)學、植物(wù)學、分子生(shēng)物(wù)學、免疫學、生(shēng)物(wù)化學、蛋白(bái)組學。生(shēng)物(wù)制藥與診斷試劑研發生(shēng)産等領域。 本公司秉承“以人為(wèi)本，以誠為(wèi)信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為(wèi)廣大客戶提供優質産品。
