RIPA Lysis Buffer (Strong) RIPA裂解液（強）

産品标簽：

RIPA Lysis Buffer RIPA裂解液；細胞/組織裂解液；總蛋白(bái)提取；BCA蛋白(bái)濃度檢測試劑盒；Bradford蛋白(bái)濃度測定試劑盒；PMSF；

産品信息

【溫馨提示】：見(jiàn)我司懋康生(shēng)物(wù)（MKBIO）整理的組織/細胞裂解液重要特點以及選擇指南(nán)。

産品描述

RIPA裂解液（RIPA Lysis Buffer），本意為(wèi)Radio Immunoprecipitation Assay，是一(yī)種傳統的細胞組織快速裂解液，對組織和細胞都有較好的裂解作用。RIPA的配方有很多(duō)種，根據其裂解強度的不同，大緻可分為(wèi)強、中、弱三類，應用上(shàng)會(huì)有一(yī)些差異【見(jiàn)附表1】。

本品為(wèi)裂解性較強的1×RIPA裂解液，主要成分為(wèi)50mM Tris-HCl（pH 7.4），150mM NaCl，1% Triton X-100,1%脫氧膽酸鈉，0.1% SDS，以及正釩酸鈉，氟化鈉，EDTA和抑肽酶等多(duō)種抑制劑，可廣譜且有效抑制蛋白(bái)降解，經本品裂解所得的蛋白(bái)樣品，适用于蛋白(bái)免疫印迹（Western Blot），免疫沉澱（IP）等實驗。經本品裂解收集的蛋白(bái)樣品，可使用增強型BCA蛋白(bái)濃度測定試劑盒（貨号：MP1902-500T）測定總蛋白(bái)濃度。由于本品含有較高(gāo)濃度的去垢劑，不适合用Bradford法來測定總蛋白(bái)濃度。

産品組成

保存與運輸方法

保存：-20℃凍存，1年(nián)穩定。

運輸：冰袋運輸。

注意事(shì)項

1）  為(wèi)了取得最佳的使用效果，建議第一(yī)次使用本品的時候将裂解液分裝凍存，避免反複凍融。

2）  裂解樣品的所有步驟需在冰上(shàng)或4℃進行。

3）  為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

使用方法

A，培養的細胞樣品

1）  充分融解RIPA裂解液，之後混勻。取适當量的裂解液，使用前數分鍾内加入PMSF（分子量：174.2 g/mol），使其最終濃度為(wèi)1mM。

2）  貼壁細胞：吸除培養液，用PBS、生(shēng)理鹽水(shuǐ)或無血清培養液洗一(yī)遍（如果血清中的蛋白(bái)沒有幹擾，可忽略此步）。按照(zhào)六孔闆的每孔細胞加入150-250μl裂解液的比例加量。用槍吹打數下(xià)，使裂解液和細胞充分接觸。通(tōng)常裂解液接觸細胞1-2秒(miǎo)後，細胞就(jiù)會(huì)被裂解。

       懸浮細胞：離心收集細胞，用手指彈散細胞。按照(zhào)六孔闆的每孔細胞加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解後應沒有明顯的細胞沉澱。如果細胞量較多(duō)，必需分裝成50-100萬細胞/管，然後再裂解。

3）  充分裂解後，10,000-14,000g離心3-5分鍾，取上(shàng)清，即可進行後續的PAGE、WB和免疫沉澱等實驗。

【裂解液用量說明】：通(tōng)常6孔闆每孔細胞加入150μl裂解液已經足夠，如果細胞密度非常高(gāo)可以适當加大裂解液的用量到(dào)200μl或250μl。

B， 組織樣品

1）  将組織剪切成細小(xiǎo)的碎片，使用勻漿儀進行勻漿。

2）  充分融解RIPA裂解液，之後混勻。取适當量的裂解液，使用前數分鍾内加入PMSF（分子量：174.2 g/mol），使其最終濃度為(wèi)1mM。

3）  按照(zhào)每20mg組織加入150-250μl裂解液的比例加量。【注意：如果裂解不充分可以适當添加用量，如果需要高(gāo)濃度的蛋白(bái)樣品，可适當降低(dī)用量。】

4）  充分裂解後，10,000-14,000g離心3-5分鍾，取上(shàng)清，即可進行後續的PAGE、WB和免疫沉澱等實驗。

5）  如果組織樣品本身非常細小(xiǎo)，可以适當剪切後直接加入裂解液裂解，通(tōng)過高(gāo)強度的漩渦混勻器(qì)使樣品裂解充分，之後使用相(xiàng)同步驟操作。直接裂解的優點是比較方便，不必使用勻漿器(qì)，缺點是不如使用勻漿器(qì)那樣裂解的足夠充分。

【注意】：RIPA裂解液的裂解産物(wù)經常會(huì)出現一(yī)小(xiǎo)團透明膠狀物(wù)，屬正常現象。該透明膠狀物(wù)為(wèi)含有基因組DNA等的複合物(wù)。在不檢測和基因組DNA結合特别緊密的蛋白(bái)的情況下(xià)，可以直接離心取上(shàng)清用于後續實驗；如果需要檢測和基因組結合特别緊密的蛋白(bái)，則可以通(tōng)過超聲處理打碎打散這些透明膠狀物(wù)，随後離心取上(shàng)清用于後續實驗。像檢測一(yī)些常見(jiàn)的轉錄因子，例如NF-kB、p53，通(tōng)常不必進行超聲處理，就(jiù)可以檢測到(dào)這些轉錄因子。  

附表1. 三種RIPA裂解液（強、中、弱）組分和應用差異