前言：
在免疫印迹（WB）、免疫沉澱（IP）、免疫共沉澱（Co-IP），以及染色質免疫沉澱（ChIP）等許多(duō)研究組織或細胞内蛋白(bái)表達，蛋白(bái)純化以及蛋白(bái)-蛋白(bái)、蛋白(bái)-核酸間互作的各種免疫實驗内，首先要做的第一(yī)步就(jiù)是進行組織（細胞）裂解，通(tōng)過破壞細胞膜或細胞核膜的屏障，将要待研究的對象釋放(fàng)到(dào)體外環境中。為(wèi)此，擁有合适的組織/細胞裂解液是開(kāi)展實驗重要的一(yī)環。
針對各種下(xià)遊實驗的特點，懋康生(shēng)物(wù)（MKBio）提供幾種常見(jiàn)的組織/細胞裂解液，基本涵蓋用戶需求。
總表：各種組織/細胞裂解液主要特點和應用差異（MKBIO）
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産品 貨号 |
MP1501 |
MP1502 |
MP1503 |
MP1504 |
MP1505 |
MP1506 |
MP1507 |
MP1508 |
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産品 名稱 |
RIPA裂解液（強） |
RIPA裂解液（中） |
RIPA裂解液（弱） |
WB/IP裂解液 |
NP-40裂解液 |
SDS裂解液 |
RIPA裂解液（強，無抑制劑） |
WB/IP裂解液（無抑制劑） |
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有效裂解成分 |
1% Triton X-100，1%脫氧膽酸鈉，0.1% SDS |
1% NP-40，0.5%脫氧膽酸鈉，0.1% SDS |
1% NP-40，0.25%脫氧膽酸鈉 |
1% Triton X-100 |
1% NP-40 |
1% SDS |
1% Triton X-100，1%脫氧膽酸鈉，0.1% SDS |
1% Triton X-100 |
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裂解強度 |
強 |
中 |
溫和 |
溫和 |
溫和 |
強 |
強 |
溫和 |
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對膜蛋白(bái)的提取 |
很好 |
較好 |
一(yī)般 |
一(yī)般 |
一(yī)般 |
很好 |
很好 |
一(yī)般 |
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對胞漿蛋白(bái)的提取 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
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對核蛋白(bái)的提取 |
很好 |
較好 |
較好 |
較好 |
較好 |
很好 |
很好 |
較好 |
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胞漿磷酸化蛋白(bái)提取 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
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核轉錄因子提取 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
很好 |
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蛋白(bái)酶抑制劑 |
含有 |
含有 |
含有 |
含有 |
含有 |
含有 |
不含 |
不含 |
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磷酸酶抑制劑 |
含有 |
含有 |
含有 |
含有 |
含有 |
含有 |
不含 |
不含 |
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主要用途 |
WB，IP |
WB，IP |
WB，IP，Co-IP |
WB，IP，Co-IP |
WB，IP，Co-IP |
WB，ChIP |
WB，IP |
WB，IP，Co-IP |
組織/細胞裂解液選擇說明：
a） 對于普通(tōng)的WB，IP，Co-IP，推薦使用WB/IP裂解液（# MP1504-100ML），經此裂解所得的産物(wù)沒有非常粘滞的透明狀DNA團塊形成，不必采用超聲處理等就(jiù)可以非常理想地用于後續操作。另外，此裂解液裂解的産物(wù)也适合用于磷酸化蛋白(bái)的WB檢測。
b） 對于某些特殊蛋白(bái)的IP，如果WB/IP裂解液（# MP1504-100ML）效果不理想，可嘗試用RIPA（強，中，弱）或NP-40裂解液。若發現IP背景很高(gāo)，說明非特異性蛋白(bái)被沉澱下(xià)來，則需選用裂解強度較高(gāo)的裂解液，如RIPA（強或中）。如果發現目的蛋白(bái)無法被沉澱下(xià)來，說明裂解液的強度過強，可使用較溫和的裂解液如RIPA（弱）或NP-40裂解液。
c） 對于某些難溶解蛋白(bái)的WB，如果WB/IP裂解液（# MP1504-100ML）效果不理想，可嘗試使用裂解強度更高(gāo)的裂解液如RIPA（強，中）或SDS裂解液。
d） 對于特定用途需要自(zì)行添加特定抑制劑或不需添加抑制劑，可考慮選擇RIPA裂解液（強，無抑制劑）（# MP1507-100ML）或WB/IP裂解液（無抑制劑）（# MP1508-100ML），後者很多(duō)情況下(xià)兼容酶活性和生(shēng)物(wù)小(xiǎo)分子的檢測，具體兼容性如何請自(zì)行測試，我司無相(xiàng)應數據提供。
補充知識點
一(yī)、 關于去垢劑（detergents）
1.1 去垢劑的分類
幾種組織/細胞裂解液裂解強度（應用）的差異主要還(hái)是配方中去污劑種類和濃度的不同。去污劑分為(wèi)變性去污劑（denaturing detergents）和非變性去污劑（non-denaturing detergents），前者可以是陰離子比如SDS，或陽離子比如乙基三甲基溴化铵，這些去垢劑總體來說破壞膜和通(tōng)過打破蛋白(bái)-蛋白(bái)間相(xiàng)互作用來變性蛋白(bái)；非變性去垢劑分為(wèi)非離子比如Triton X-100，膽鹽比如膽酸鹽類和兩性離子去垢劑比如CHAPS。
1.2 常見(jiàn)去垢劑（用于蛋白(bái)增溶）的特征
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去垢劑 |
類型 |
聚集數 |
膠束分子量 |
臨界膠束濃度(CMC, mM) |
臨界膠束濃度(CMC, %，w/v) |
濁點（℃） |
透析去除 |
|
Triton X-100 |
非離子型 |
140 |
90,000 |
0.24 |
0.0155 |
64 |
否 |
|
Triton X-114 |
非離子型 |
/ |
/ |
0.21 |
0.0113 |
23 |
否 |
|
NP-40 |
非離子型 |
149 |
90,000 |
0.29 |
0.0179 |
80 |
否 |
|
Brij-35 |
非離子型 |
40 |
49,000 |
0.09 |
0.1103 |
>100 |
否 |
|
Brij-58 |
非離子型 |
70 |
82,000 |
0.077 |
0.0086 |
>100 |
否 |
|
Tween-20 |
非離子型 |
/ |
/ |
0.06 |
0.0074 |
95 |
否 |
|
Tween-80 |
非離子型 |
60 |
76,000 |
0.012 |
0.0016 |
/ |
|
|
Octyl Glucoside |
非離子型 |
27 |
8,000 |
23-25 |
0.6716-0.7300 |
/ |
是 |
|
Octylthio Glucoside |
非離子型 |
/ |
/ |
9 |
0.2772 |
>100 |
是 |
|
SDS |
陰離子 |
62 |
18,000 |
288 |
6-8 |
0.1728-2304 |
是 |
|
CHAPS |
兩性離子 |
10 |
6,149 |
8-10 |
0.4920-0.6150 |
>100 |
是 |
|
CHAPSO |
兩性離子 |
11 |
6,940 |
8-10 |
0.5048 |
90 |
是 |
二、 幾個(gè)免疫實驗的基本概念
免疫印迹（Immunoblotting）：又(yòu)稱蛋白(bái)質印迹（Western blotting），是根據抗原抗體的特異性結合檢測複雜(zá)樣品中的某種蛋白(bái)的方法。該法是在凝膠電(diàn)泳和固相(xiàng)免疫測定技(jì)術(shù)基礎上(shàng)發展起來的一(yī)種新的免疫生(shēng)化技(jì)術(shù)。由于免疫印迹具有 SDS-PAGE 的高(gāo)分辨力和固相(xiàng)免疫測定的高(gāo)特異性和敏感性，現已成為(wèi)蛋白(bái)分析的一(yī)種常規技(jì)術(shù)。免疫印迹常用于鑒定某種蛋白(bái)，并能(néng)對蛋白(bái)進行定性和半定量分析。結合化學發光(guāng)檢測，可以同時比較多(duō)個(gè)樣品同種蛋白(bái)的表達量差異。
免疫沉澱（Immunoprecipitation）：是利用抗體特異性反應純化富集目的蛋白(bái)的一(yī)種方法。抗體與細胞裂解液或表達上(shàng)清中相(xiàng)應的蛋白(bái)結合後，再與蛋白(bái)A/G或二抗偶聯的agarose或Sepharose珠子孵育，通(tōng)過離心得到(dào)珠子-蛋白(bái)A/G或二抗-抗體-目的蛋白(bái)複合物(wù)，沉澱經過洗滌後，重懸于電(diàn)泳上(shàng)樣緩沖液，煮沸5-10min，在高(gāo)溫及還(hái)原劑的作用下(xià)，抗原與抗體解離，離心收集上(shàng)清，上(shàng)清中包括抗體、目的蛋白(bái)和少量的雜(zá)蛋白(bái)。
免疫共沉澱（Co-Immunoprecipitation）：是以抗體和抗原之間的專一(yī)性作用為(wèi)基礎的用于研究蛋白(bái)質相(xiàng)互作用的經典方法。是确定兩種蛋白(bái)質在完整細胞内生(shēng)理性相(xiàng)互作用的有效方法。當細胞在非變性條件(jiàn)下(xià)被裂解時，完整細胞内存在的許多(duō)蛋白(bái)質－蛋白(bái)質間的相(xiàng)互作用被保留了下(xià)來。當用預先固化在argarose beads上(shàng)的蛋白(bái)質A的抗體免疫沉澱A蛋白(bái)，那麽與A蛋白(bái)在體内結合的蛋白(bái)質B也能(néng)一(yī)起沉澱下(xià)來。再通(tōng)過蛋白(bái)變性分離，對B蛋白(bái)進行檢測，進而證明兩者間的相(xiàng)互作用。
染色質免疫共沉澱技(jì)術(shù)（Chromatin Immunoprecipitation, ChIP）：是一(yī)種适用于研究蛋白(bái)質與生(shēng)物(wù)體細胞中 DNA 相(xiàng)互作用的經典方法，這項技(jì)術(shù)幫助研究者判斷在細胞核中基因組的某一(yī)特定位置會(huì)出現何種組蛋白(bái)修飾 。檢測原理是當在活細胞狀态下(xià)固定蛋白(bái)質－DNA 複合物(wù)，并将其随機(jī)切斷為(wèi)一(yī)定長(cháng)度範圍内的染色質小(xiǎo)片段，然後通(tōng)過免疫學方法沉澱此複合體，特異性地富集目的蛋白(bái)結合的 DNA 片段，通(tōng)過對目的片斷的純化與檢測，從(cóng)而獲得蛋白(bái)質與 DNA 相(xiàng)互作用的信息。
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
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