Alkaline Phosphatase Stain Solution (Modified Gomori's Method)

堿性磷酸酶染色液（改良鈣钴法）

産品信息

【溫馨提示】：見(jiàn)我司懋康生(shēng)物(wù)整理的堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP，AKP）産品專題。

【溫馨提示】：見(jiàn)我司懋康生(shēng)物(wù)整理的堿性磷酸酶活性檢測試劑盒（定量檢測）産品專題。

【溫馨提示】：見(jiàn)我司懋康生(shēng)物(wù)整理的堿性磷酸酶染色檢測試劑盒（定性，幹細胞檢測）産品專題。

産品描述

堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP，AKP或AP）是一(yī)類磷酸酯酶，堿性條件(jiàn)下(xià)能(néng)夠将核苷酸、蛋白(bái)、甾醇等分子去磷酸化，廣泛分布于哺乳動物(wù)組織内。ALP主要存在于物(wù)質交換活躍處（細胞膜），如腸上(shàng)皮和腎近曲小(xiǎo)管的刷狀緣、附睾上(shàng)皮之靜(jìng)纖毛、肝的毛細膽管膜以及微動脈和毛細血管動脈部之内皮。還(hái)發現于内質網、高(gāo)爾基複合體、吞飲小(xiǎo)泡、腸上(shàng)皮之溶酶體、中性粒細胞之中性顆粒以及平滑肌之細胞膜及吞飲小(xiǎo)泡。

本堿性磷酸酶染色液（改良鈣钴法）（Alkaline Phosphatase Stain Solution (Modified Gomori's Method)）利用的是金屬沉澱法來定性檢測磷酸酶活性。檢測原理是以天然存在的β-甘油磷酸鈉為(wèi)底物(wù)，經堿性磷酸酶水(shuǐ)解釋放(fàng)出磷酸，磷酸根與鈣離子結合為(wèi)磷酸鈣沉澱，再依次被置換為(wèi)磷酸钴和硫化钴，最終産物(wù)為(wèi)黑(hēi)色硫化钴沉澱。

産品組成

保存與運輸方法

保存：2-8℃保存，6個(gè)月(yuè)穩定。

運輸：冰袋運輸。

注意事(shì)項

1）   ALP染色液、ALP硫化液容易失效，建議開(kāi)封後根據小(xiǎo)份保存，避免重複性開(kāi)蓋使用，影響性能(néng)。

2）   ALP硫化液具有腐蝕性和刺激性氣味，操作需小(xiǎo)心。

3）   樣本需新鮮，取材後請立即處理，否則會(huì)影響酶活性。

4）   組織固定需在4℃進行，時間不要超過24h，否則酶活性會(huì)減弱或消失。

5）   組織在石蠟包埋時，溫度不要超過56℃。應使用熔點為(wèi)52-54℃的石蠟進行浸染，浸蠟時間要短，否則酶活性會(huì)減弱或消失。

6）   石蠟切片脫蠟所用的二甲苯需用AR級以上(shàng)的，不純的二甲苯會(huì)分解黑(hēi)色沉澱。

7）   冰凍切片染色時，應減少切片在室溫暴露的時間。

8）   為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

操作步驟

實驗前準備材料：蒸餾水(shuǐ)，溫箱或水(shuǐ)浴鍋

一(yī)、 石蠟切片染色

1.1    石蠟切片脫蠟至蒸餾水(shuǐ)；

1.2   切片入ALP染色液，37℃孵育2~12h；

【注意：若需要做陰性對照(zhào)，可選一(yī)切片入ALP對照(zhào)液，該對照(zhào)液不含酶的反應底物(wù)。】

1.3    流動水(shuǐ)清洗2min，入蒸餾水(shuǐ)；

1.4    入硝酸钴染液，37℃孵育5min；

1.5    流水(shuǐ)洗5min，入蒸餾水(shuǐ)；

1.6    準備ALP硫化工(gōng)作液：取ALP硫化液用蒸餾水(shuǐ)或去離子水(shuǐ)稀釋50倍，混勻即得到(dào)硫化工(gōng)作液，現配現用。切片放(fàng)入硫化工(gōng)作液，孵育1-2min；

1.7    流水(shuǐ)洗10min，入蒸餾水(shuǐ)；

1.8    （可選）核固紅(hóng)複染細胞核，用蒸餾水(shuǐ)洗；

1.9    石蠟切片常規脫水(shuǐ)、透明、中性樹膠封片。

二、 冰凍切片染色

2.1 冰凍切片在丙酮-氯仿等量混合液内，4℃固定2-5min；

2.2  切片入ALP染色液，37℃孵育5-15min；

【注意：若需要做陰性對照(zhào)，可選一(yī)切片入ALP對照(zhào)液，該對照(zhào)液不含酶的反應底物(wù)。】

2.3 流水(shuǐ)洗2min，入蒸餾水(shuǐ)；

2.4 入硝酸钴染液，37℃孵育5min；

2.5 流水(shuǐ)洗5min，入蒸餾水(shuǐ)；

2.6 準備ALP硫化工(gōng)作液：取ALP硫化液用蒸餾水(shuǐ)或去離子水(shuǐ)稀釋50倍，混勻即得到(dào)硫化工(gōng)作液，現配現用。切片放(fàng)入硫化工(gōng)作液，孵育1-2min；

2.7    流水(shuǐ)洗10min，入蒸餾水(shuǐ)；

2.8    （可選）核固紅(hóng)複染細胞核，用蒸餾水(shuǐ)洗；

2.9    冰凍切片用甘油明膠封片劑封片。

三、 染色結果

相(xiàng)關産品

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海夢澤生物科技有限公司是一(yī)家涉足于生(shēng)命科學和生(shēng)物(wù)技(jì)術(shù)領域研究的試劑、儀器(qì)和實驗室消耗品與實驗服務工(gōng)作，主要從(cóng)事(shì)細胞生(shēng)物(wù)學、植物(wù)學、分子生(shēng)物(wù)學、免疫學、生(shēng)物(wù)化學、蛋白(bái)組學。生(shēng)物(wù)制藥與診斷試劑研發生(shēng)産等領域。 本公司秉承“以人為(wèi)本，以誠為(wèi)信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為(wèi)廣大客戶提供優質産品。