細胞生(shēng)物(wù)學和組織學研究中，細胞核染料/探針占據著(zhe)極其重要的江湖(hú)地位，染料本身的功能(néng)是用來觀察細胞核和染色體，以及染色體帶型分析。然而通(tōng)過應用方式的多(duō)重變化，賦予其廣闊的應用天地。或單一(yī)細胞染色，比如碘化丙啶PI，常用做細胞周期分析或者細胞活力分析；或與其他細胞核染料，如Hochest 33342，根據其細胞膜滲透性的差異和染色特征不同，用來做凋亡檢測區分；或與其他特異性探針，如Annexin V，用來區分早，中晚期細胞；或與抗體染色結合，或與特定亞細胞結構熒光(guāng)探針如線粒體選擇性探針Mitotracker，F-actin選擇性探針鬼筆環肽，以及自(zì)熒光(guāng)蛋白(bái)如GFP，RFP結合使用，起到(dào)複染和定位功能(néng)。

根據染料是否細胞膜滲透性和應用特征上(shàng)的一(yī)些差異，我司（上(shàng)海懋康生(shēng)物(wù)MKBio by V. Shallan）将以下(xià)應用頻率最廣的核酸探針做出分類，

1. 活細胞以及非固定組織的細胞核探針

具細胞膜滲透性的核酸探針可以最少預處理的方式對活細胞或組織進行染色。核染色不僅能(néng)展示組織内細胞的自(zì)然定位，且能(néng)通(tōng)過細胞自(zì)發的生(shēng)理過程如有絲分裂，凋亡來示蹤細胞核變化。

Hoechst 33342& Hoechst 33258 兩者都是藍色細胞核熒光(guāng)探針（Ex=352nm，Em=461nm），可穿透完整細胞膜，作用機(jī)制在于嵌入雙鏈DNA小(xiǎo)溝，一(yī)經結合後釋放(fàng)出強烈的藍色熒光(guāng)。細胞毒性非常低(dī)，基本不會(huì)影響細胞功能(néng)。因此經染色後的活細胞可注射進入組織進行發育變化的示蹤分析，或感染其他細胞種類的示蹤分析。Hoechst染料對細胞質染色背景低(dī)。Hoechst染料通(tōng)常用來區分凋亡細胞核的完整染色質，也常同BrdU标記結合使用，根據DNA染色定位細胞的基礎上(shàng)來判斷和分析增殖細胞。

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2. 固定細胞/組織的細胞核探針

2.1 DAPI

最經典的核/染色體複染藍色熒光(guāng)探針（Ex=364nm，Em=454nm），用以鑒定細胞核和觀察染色體條帶分型。DAPI選擇性結合雙鏈DNA，細胞質染色的背景很低(dī)或幾乎沒有。和溴化乙錠EB相(xiàng)比，靶向雙鏈DNA的靈敏度高(gāo)很多(duō)。DAPI本身熒光(guāng)很弱，一(yī)經DNA結合，産生(shēng)比自(zì)身強20多(duō)倍的藍色熒光(guāng)。而且DAPI自(zì)身的弱熒光(guāng)，不會(huì)同綠色或紅(hóng)色标記二抗或FISH探針發生(shēng)交叉幹擾。DAPI屬于細胞膜半滲透性的熒光(guāng)探針，在高(gāo)濃度的情況下(xià)，也能(néng)用在未固定細胞或組織切片染色。

2.2 PI 碘化丙啶

碘化丙啶（PI），可以說是細胞核和染色質染色的首推紅(hóng)色熒光(guāng)染料。作為(wèi)一(yī)種溴化乙啶類似物(wù)，嵌入雙鏈DNA後釋放(fàng)紅(hóng)色熒光(guāng)（Ex=540nm，Em=608nm）。PI不可透過完整細胞膜，但卻能(néng)穿過破損的細胞膜而對核染色。某些固定條件(jiàn)，PI高(gāo)度選擇性進行核染色。而有些細胞或組織需經過RNase的簡單處理來達到(dào)特異核染色目的。碘化丙啶PI可作為(wèi)綠色熒光(guāng)探針或者标記二抗的優異複染探針。

2.3 7-AAD (7-Aminoactinomycin D) 7-氨基放(fàng)線菌素D

7-氨基放(fàng)線菌素（7-AAD）是一(yī)種細胞核紅(hóng)色熒光(guāng)染料，嵌入雙鏈DNA發生(shēng)光(guāng)譜遷移（Ex=488nm，Em=650nm），适合用于熒光(guāng)顯微鏡或流式細胞儀的多(duō)色染色。7-AAD幾乎不可透過完整細胞膜，随著(zhe)細胞凋亡、死亡發生(shēng)，7-AAD的質膜通(tōng)透性逐漸增加。另，可穿透進入經過固定和透化處理的細胞，廣泛用于FACS，熒光(guāng)強度雖低(dī)于PI，但是适合于FITC，PE同時檢測。7-AAD選擇性結合DNA GC富集區域，對多(duō)線染色體染色産生(shēng)不同的條帶類型，并在染色體分帶研究中用于染色質分析。

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3. 染色體分帶（Chromosome-banding）熒光(guāng)探針

3.1  7-氨基放(fàng)線菌素（7-AAD）選擇性結合DNA GC區域，多(duō)線染色體和染色質研究中經染色産生(shēng)不同的條帶類型。

3.2  DAPI，或将DAPI或Hoechst 33258 與非熒光(guāng)DNA結合藥物(wù)聯合使用，可用于染色體分帶研究。DAPI還(hái)可用于高(gāo)分辨率染色體核型分析。

3.3  Hoechst 33342選擇性結合DNA AT區域，幾乎或不會(huì)對細胞質造成背景染色。常用于染色體分選（chromosome sorting），多(duō)變量分析（multivariate analysis）和染色體核型分析（karyotyping）。Hoechst染料常與色黴素A3（Chromomycin A3）聯合使用，通(tōng)過雙激光(guāng)流式檢測對人染色體進行定量分類（雙變量流式核型分析）。

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