DAPI Stain DAPI染液

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産品标簽

DAPI 藍色細胞核探針；PI碘化丙啶；Hoechst 33342；Hoechst 33258；7-AAD；CAS：28718-90-3；

産品信息

溫馨提示：見(jiàn)我司整理的細胞核（Cell Nuclear）熒光(guāng)探針産品專題。

産品描述

DAPI，英文全稱4’,6-Diamidino-2’-phenylindole，中文全稱4’,6-聯脒-2’-苯基吲哚，是一(yī)種藍色熒光(guāng)染料，選擇性結合雙鏈DNA的小(xiǎo)溝區（優先結合AT富集的DNA）形成穩定的複合物(wù)，産生(shēng)比DAPI約強20倍的熒光(guāng)。DAPI的最大激發/發射波長(cháng)為(wèi)340/488nm，DAPI-DNA複合物(wù)的最大激發/發射波長(cháng)為(wèi)364/454nm，通(tōng)常用作熒光(guāng)顯微術(shù)、流式細胞術(shù)和染色體染色的細胞核複染劑。由于對DNA的高(gāo)親和性，DAPI還(hái)常常被用在細胞計數、凋亡檢測、支原體污染檢測、基于DNA内含物(wù)的細胞分選，以及高(gāo)内涵成像分析中的核分割工(gōng)具。雖然高(gāo)濃度情況下(xià)DAPI能(néng)夠進入活細胞，但DAPI不具細胞膜滲透性，通(tōng)常情況用來染固定細胞。對于活細胞染色，Hoechst 33342（貨号：MX4203-10MG）是一(yī)種受歡迎的具細胞膜滲透性的核複染劑。

我司提供兩種濃度的DAPI儲存液：一(yī)種濃度為(wèi)1mg/ml（貨号：MX4208-1ML），一(yī)種濃度為(wèi)5mg/ml（貨号：MX4208-200UL）。使用時根據實驗應用直接将儲存液用相(xiàng)應溶液稀釋到(dào)工(gōng)作濃度即可。推薦工(gōng)作濃度通(tōng)常為(wèi)0.5-10μg/ml，用于固定的細胞和組織的細胞核染色。

保存與運輸方法

保存：-20℃避光(guāng)保存，1年(nián)有效。

運輸：冰袋運輸。

注意事(shì)項

1）   DAPI對人體有一(yī)定刺激性，請注意适當防護。

2）   DAPI儲存液（1-5mg/ml）置于-20℃避光(guāng)保存，1年(nián)穩定。稀釋的工(gōng)作液（1-5μg/ml），置于+4℃，6個(gè)月(yuè)穩定。

3）   熒光(guāng)染料都存在淬滅的問題，建議染色後盡量當天完成檢測。

4）   為(wèi)減緩熒光(guāng)淬滅可以使用抗熒光(guāng)淬滅封片液。

5）   為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

使用方法

1.      工(gōng)作液配制

用雙蒸水(shuǐ)或PBS稀釋母液，配制成所需要的工(gōng)作濃度（0.5-10μg/ml）。

2.      固定的細胞或組織染色

對于固定的細胞或組織樣品，固定後，适當洗滌去除固定劑。DAPI染色通(tōng)常在其他染色的最後進行。

如果不需要進行其它染色，則直接進行DAPI 染色。

2.1對于貼壁細胞或組織切片：加入适量DAPI染色液，覆蓋住樣品即可。

對于懸浮細胞：至少加入待測染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放(fàng)置3-5min。

2.2 吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生(shēng)理鹽水(shuǐ)洗滌2-3次，每次3-5min。

2.3 直接在熒光(guāng)顯微鏡下(xià)觀察或封片後熒光(guāng)顯微鏡下(xià)觀察。Ex/Em=364/454nm。

常見(jiàn)問題

1、   DAPI是一(yī)種好的活細胞核标記探針？

回複：DAPI被認為(wèi)是一(yī)種半滲透性/無滲透性的細胞核染料。對細胞核的染色性能(néng)好壞依賴于細胞系類型。某些細胞系可用DAPI染色，某些完全不可以，而某些标記結果不一(yī)緻。替代的話，建議用Hoechst 33342（貨号：MX4204-10ML）或Hoechst 33258（貨号：MX4202-10ML），具有同DAPI一(yī)樣的波長(cháng)和核酸結合模式，但是有非常好的細胞膜滲透性。

2、   DAPI和Hoechst染料相(xiàng)當類似，如何二選一(yī)？

回複：DAPI是非常通(tōng)用的藍色熒光(guāng)染料，用于細胞核複染。對固定和透化的細胞/組織，具有非常明亮的細胞核标記。然而，此染料被認為(wèi)是半滲透至不滲透的染料，用于活細胞染色的結合不一(yī)緻。Hoechst 33342是一(yī)種細胞膜滲透性的染料，具有同DAPI的結合機(jī)制和熒光(guāng)特征。非常适合用于活細胞成像，效果就(jiù)如同DAPI用于固定細胞染色。

3、   有學者發現，先進行EdU插入的點擊反應後再用DAPI染細胞，比未進行點擊反應直接用DAPI染色的信号低(dī)，是什麽原因導緻的？

回複：點擊反應内的銅離子在很少程度上(shàng)會(huì)變性DNA（雖然變性程度沒有BrdU檢測那麽多(duō)），導緻DNA染料（包括DAPI和Hoechst染料）的結合能(néng)力受到(dào)影響。這部分影響僅在經典的EdU試劑盒内表現明顯，而對于第二代的EdU試劑盒（使用相(xiàng)對更低(dī)濃度的銅離子）基本無影響。

相(xiàng)關産品

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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