【溫馨提示】：如果你對市(shì)場上(shàng)常見(jiàn)中文名都叫【博萊黴素】，但英文名又(yòu)不同的一(yī)些産品感到(dào)有所迷惑，可參考我司【懋康生(shēng)物(wù)】整理的Bleomycins (BLMs) 博萊黴素家族常用抗生(shēng)素成員(yuán)的應用選擇，也許有所收獲。

博萊黴素家族常見(jiàn)産品：

篩選抗生(shēng)素：Zeocin【凍幹粉】  Zeocin【100mg/ml】     Phleomycin 腐草(cǎo)黴素

細胞功能(néng)研究：Bleomycin Sulfate 硫酸博萊黴素     Bleomycin A5 Hydrochloride 鹽酸博萊黴素A5

産品關鍵詞：

Zeocin 博萊黴素（博來黴素）；Phleomycin 腐草(cǎo)黴素；Sh ble基因；Streptomyces verticillus 輪枝鏈黴菌；Hygromycin B 潮黴素B；G418遺傳黴素；CAS NO.：11006-33-0

基本描述：

Zeocin™是博來黴素/腐草(cǎo)黴素（bleomycin/phleomycin）抗生(shēng)素家族的成員(yuán)之一(yī)，從(cóng)輪枝鏈黴菌Streptomyces verticillus中分離得到(dào)，對細菌、真菌（包括酵母菌）、植物(wù)和哺乳動物(wù)細胞具很強的毒性。來自(zì)Streptoalloteichus hindustanus的Sh ble基因賦予Zeocin抗性。

Zeocin™是腐草(cǎo)黴素D1的商業(yè)名稱，一(yī)種堿性、水(shuǐ)溶性、銅離子螯合的糖肽抗生(shēng)素。銅離子的存在使得溶液為(wèi)藍色，此銅螯合的形式為(wèi)無活性。一(yī)旦進入細胞後，二價銅離子（Cu2+）被還(hái)原為(wèi)一(yī)價銅離子（Cu+），并被細胞内的巯基化合物(wù)去除。銅離子被去除後，Zeocin™被活化，嵌入DNA使其斷裂，最終導緻細胞死亡。

抗性基因：

Zeocin™抗性由編碼一(yī)種13,665Da大小(xiǎo)蛋白(bái)的Sh ble基因（Streptoalloteichus hindustanus bleomycin gene）賦予，該蛋白(bái)化學計量方式結合Zeocin™，抑制其DNA雙鏈切割活性。因此，能(néng)表達此蛋白(bái)的真核和原核宿主細胞被賦予Zeocin™抗性。

基本特性：

1）CAS NO.：11006-33-0

2）化學式：C55H83N19O21S2Cu

3）分子量：1137.41 g/mol

4）外觀：藍色溶液（100mg/ml in deionized，autoclaved water）

5）運輸：冰袋運輸

6）保存：-30°C~-10°C，至少1年(nián)有效

7）大腸杆菌篩選：25-50μg/mL（低(dī)鹽LB培養基，NaCl濃度不能(néng)超過5g/L）

8）酵母菌篩選：50-300μg/mL（YPD或基本培養基）

9）哺乳動物(wù)細胞篩選：50-1000μg/mL（合适培養基，根據細胞系而不同）

注意事(shì)項：

1）Zeocin™對光(guāng)敏感，需将抗生(shēng)素，或含該抗生(shēng)素的平闆或培養基置于黑(hēi)暗(àn)處。

2）降低(dī)細菌培養基的鹽濃度，調整pH到(dào)7.5使其保持活性，因高(gāo)離子強度和酸或堿性都會(huì)抑制Zeocin™活性；

3）儲存Zeocin™在-30°C~-10°C，使用前需冰上(shàng)融化。

4）Zeocin™有毒，為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

使用方法（應用舉例）：

1）大腸杆菌（E. Coli.）

宿主：不能(néng)包含Tn5轉座子（比如：Top10，DH5，DH10）

培養基：使用低(dī)鹽LB（10g Trypton，5g NaCl，5g Yeast extract），pH 7.5，防止Zeocin™失活

選擇濃度：25-50μg/mL用于大腸杆菌篩選

2）酵母菌（Yeast）

宿主：釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）,畢赤酵母（Pichia pastoris）

培養基：含1M山梨醇的YPD（電(diàn)轉化細胞）；YPD或基本培養基（化學轉化細胞）；測試培養基調pH到(dào)6.5-8.0，選擇pH值允許使用最低(dī)濃度Zeocin™。

轉化方法：電(diàn)轉法，使用锂離子步驟或使用EasyComp試劑盒。不能(néng)使用原生(shēng)質體用于酵母轉化，因Zeocin™會(huì)引起完整細胞死亡。

選擇濃度：50-300μg/mL，取決于酵母菌類型、培養基pH和離子強度。建立殺滅曲線确定能(néng)殺死未轉化宿主細胞的最低(dī)Zeocin™濃度。

3）哺乳動物(wù)細胞（Mammalian cells）

50-1000μg/mL用于篩選穩定轉染細胞系（平均常用濃度為(wèi)250-400μg/mL）。取決于細胞系，需要2-6周用Zeocin™篩選得到(dào)穩轉集落（foci）。進行穩轉株正式篩選前，需确定能(néng)夠殺死所有未轉染宿主細胞的最低(dī)Zeocin™濃度。

1） 确定細胞對Zeocin™的敏感性

2）篩選穩定轉染細胞系

篩選小(xiǎo)技(jì)巧：若是細胞對Zeocin™耐性更強，可用含Zeocin™培養基進行細胞分盤，并置于37°C孵育2-3h，使得細胞貼壁。然後将細胞置于4°C，2h。記得使用Hepes作為(wèi)培養基的緩沖體系。重新将細胞置于37°C孵育。4°C孵育細胞的目的是短時間内終止細胞分化，使得Zeocin™能(néng)發揮作用，殺死細胞。

訂購信息：原裝進口，現貨供應。歡迎來電(diàn)訂購，電(diàn)話：021-54736159，手機(jī)：18121428569，楊先生(shēng)。

【注意1】：對Zeocin不敏感的細胞，如絲狀真菌和一(yī)些酵母菌，建議使用腐草(cǎo)黴素（貨号：MS0008-1ML），其抗性同樣源于Sh ble基因。 【注意2】：特價供應含Zeo+基因序列的質粒— — pcDNA 3.1/Zeo（+）（Invitrogen of Thermo），序列圖譜點擊下(xià)載文檔。

應用圖片【Zeocin™篩選下(xià)的HEK293細胞】：

HEK293細胞用含10% FBS，1mM L-谷氨酰胺和400μg/mL雙抗的培養基，分别在添加和未添加400μg/mLZeocin™的培養基選擇培養。

 圖1，未經Zeocin™篩選的HEK293細胞。

 圖2，經Zeocin™篩選3天後的HEK293細胞。随著(zhe)質膜破裂，往細胞外延伸長(cháng)出長(cháng)臂（long appendages）。（見(jiàn)實心箭頭标注）

 圖3，經Zeocin™篩選3天後的HEK293細胞。細胞開(kāi)始破裂，培養基内發現細胞顆粒。（見(jiàn)空心箭頭标注）

— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海夢澤生物科技有限公司是一(yī)家涉足于生(shēng)命科學和生(shēng)物(wù)技(jì)術(shù)領域研究的試劑、儀器(qì)和實驗室消耗品與實驗服務工(gōng)作，主要從(cóng)事(shì)細胞生(shēng)物(wù)學、植物(wù)學、分子生(shēng)物(wù)學、免疫學、生(shēng)物(wù)化學、蛋白(bái)組學。生(shēng)物(wù)制藥與診斷試劑研發生(shēng)産等領域。 本公司秉承“以人為(wèi)本，以誠為(wèi)信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為(wèi)廣大客戶提供優質産品。