DNase I Solution (RNase & Protease-free)

脫氧核糖核酸酶I溶液（無RNase&蛋白(bái)酶）

關鍵詞：

Deoxyribonucleate 5 –Oligonucleotidohydrolase，5′-寡核苷酸-水(shuǐ)解酶，Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas，EC No: 3.1.21.1，CAS NO：9003-98-9

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産品描述

脫氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，縮寫DNase I，在大多(duō)數細胞和組織中都能(néng)發現的一(yī)種核酸内切酶，偏好切割鄰近嘧啶的磷酸二酯鍵，産生(shēng)5’端為(wèi)磷酸基團、3’端為(wèi)羟基的多(duō)聚核苷酸，平均消化産物(wù)最小(xiǎo)為(wèi)多(duō)聚四核苷酸。Mg2+存在條件(jiàn)下(xià)，DNase I可随機(jī)識别和切斷DNA任一(yī)條鏈上(shàng)的任意位點；而在Mn2+存在條件(jiàn)下(xià)，DNase I識别DNA的兩條鏈并在幾乎相(xiàng)同的位點進行切割。DNase I可水(shuǐ)解多(duō)種形式DNA，如單鏈DNA、雙鏈DNA，甚至染色質（其切割速率受組蛋白(bái)影響）。

脫氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，縮寫DNase I，最早從(cóng)胰腺中分離而來，至今哺乳動物(wù)胰腺也是最主要的來源之一(yī)。DNase I以兩對二硫鍵結合的多(duō)種糖蛋白(bái)混合形式存在。最佳的工(gōng)作範圍是pH 7-8，DNase的活性依賴于Ca2+，并可被二價金屬離子如Co2+，Mn2+，Zn2+等激活。5mM Ca2+可保護酶使其不被水(shuǐ)解，而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原來的1/2。

本品是即用型溶液形式的DNase I，不含RNase和蛋白(bái)酶，适用于各種RNA處理。另外還(hái)提供實驗所需的反應緩沖液和終止液，節省時間且用起來更方便。

産品應用

◇   制備不含DNA的RNA樣本；

◇   RT-PCR反應前RNA樣本内基因組DNA等可能(néng)存在DNA污染的去除；

◇   T7，T3，SP6等RNA聚合酶催化的體外RNA轉錄後DNA模闆的去除；

◇   DNase I足迹法（DNase I footprinting）研究DNA-蛋白(bái)質相(xiàng)互作用；

◇   缺口平移法标記探針用；

◇   制備随機(jī)DNA片段文庫；

◇   TUNEL細胞凋亡檢測中用于剪切DNA制備陽性對照(zhào)；

産品包裝

保存與運輸方法

保存：-20℃凍存，1年(nián)穩定。

運輸：冰袋運輸。

注意事(shì)項

1）   本DNase I的儲存緩沖液為(wèi)50mM Tris-acetate(pH 7.5)，10mM CaCl2，50%(v/v) glycerol。如需對其進行稀釋，則使用本儲存緩沖液進行稀釋。

2）   酶的使用過程中需放(fàng)在冰盒或冰浴内，使用結束立即放(fàng)回-20℃保存。

3）  為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

使用方法

一(yī)、RT-PCR反應前RNA樣本内DNA污染的去除

1.1    DNA模闆經核酸内切酶線性化，用酚/氯仿和氯仿/異丙醇提取DNA，用乙醇沉澱後，溶于适量無菌去離子水(shuǐ)中。

1.2    往一(yī)個(gè)RNase-free EP管内依次加入下(xià)列試劑：

【注意】：如果需要處理較大量的RNA樣品，可按比例放(fàng)大上(shàng)述反應體系。條件(jiàn)許可下(xià)最好往體系内加入适量RNase抑制劑（貨号：MF0218-2KU）以防止RNA降解。

1.3    37℃孵育30min。

1.4    往上(shàng)述體系内加入1μl 10× Stop Solution使其終濃度為(wèi)1×，混勻。之後65℃孵育10min使DNase I失活。【注意】：一(yī)定要先加入10× Stop Solution，然後再加熱失活RNase I，否則先加熱可能(néng)引起RNA被降解。

1.5    加熱處理後的RNA樣品即可直接用作RT-PCR反應用的模闆。

二、體外RNA反轉錄後模闆DNA的去除

2.1 每個(gè)含有0.5μg模闆DNA的反轉錄體系中加入1U DNase I，某些情況下(xià)模闆DNA完全消化所需的DNase I需通(tōng)過實驗來摸索。

2.2 37℃孵育15min。

2.3 酚/氯仿抽提失活DNase I。

三、其他用途請參考上(shàng)述方法或參考文獻等進行。

相(xiàng)關産品

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