JC-1 線粒體膜電(diàn)位熒光(guāng)探針

溫馨提示1）：見(jiàn)我司懋康生(shēng)物(wù)（MKBio）整理的線粒體熒光(guāng)探針産品專題。

溫馨提示2）：見(jiàn)我司懋康生(shēng)物(wù)（MKBio）整理的膜電(diàn)位檢測探針産品專題。 

産品标簽

Rhodamine 123羅丹明123；JC-1；JC-10；CCCP；CAS：62669-70-9

産品信息

産品描述

JC-1是一(yī)種廣泛用于檢測線粒體膜電(diàn)△Ψm位的理想熒光(guāng)探針。JC-1染料以電(diàn)勢依賴性的方式積聚在線粒體内，可以用來檢測細胞、組織或純化的線粒體膜電(diàn)位。正常線粒體内，JC-1聚集在線粒體基質中形成聚合物(wù)，聚合物(wù)發出強烈的紅(hóng)色熒光(guāng)（Ex=585 nm, Em=590 nm）；不健康的線粒體由于膜電(diàn)位的下(xià)降或喪失，JC-1隻能(néng)以單體的形式存在于胞漿中，産生(shēng)綠色熒光(guāng)（Ex=514 nm, Em=529 nm）。

JC-1不僅可用于定性檢測，因顔色的變化可以非常直接的反映出線粒體膜電(diàn)位的變化。也可以用于定量檢測，因線粒體的去極化程度可以通(tōng)過紅(hóng)/綠熒光(guāng)強度的比例來衡量。觀察時，隻需使用常規的觀察紅(hóng)色熒光(guāng)和綠色熒光(guāng)的設置即可。

本品為(wèi)溶于DMSO的JC-1儲存液，濃度5 mg/ml，CAS NO.3520-43-2 ，隻需用合适的緩沖液稀釋到(dào)工(gōng)作濃度即可使用。JC-1用于檢測細胞的線粒體膜電(diàn)位時常用的濃度範圍為(wèi)1～20 µg/ml，對于很多(duō)細胞适宜采用的工(gōng)作濃度為(wèi)10 µg/ml。   

産品特性

1）化學名：5,5‘,6,6’-Tetrachloro-1,1‘,3,3’-tetraethylbenzimidazolylcarbocyanine iodide

2）CAS NO：3520-43-2 

3）分子式：C25H27Cl4IN4

4）分子量：652.23 g/mol

5） 純度：＞95%（HPLC）

6） Ex/Em：單體形式（monomer form）：Ex=514 nm, Em=529 nm；

       聚合物(wù)形式（J-aggregate form）：Ex=585 nm, Em=590 nm；

保存與運輸方法

保存：-20℃幹燥避光(guāng)保存。第一(yī)次使用，建議将儲存液分裝成單次用量，避免反複凍融，約一(yī)年(nián)有效。

運輸：冰袋運輸。

注意事(shì)項

1）JC-1是光(guāng)敏感性的，所有染色步驟的操作過程中避免強光(guāng)接觸。

2）JC-1染色完成後，立即進行後續的結果分析非常必要；

3）為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

使用方法

1. 染色工(gōng)作液制備

将凍存的儲存液置于室溫充分融化，之後用緩沖液或者預熱的培養基直接稀釋儲存液（5 mg/ml）到(dào)需要的工(gōng)作濃度，邊震蕩邊稀釋，充分混勻。為(wèi)了去除任何不溶顆粒，建議13,000 x g離心JC-1工(gōng)作液1 min，小(xiǎo)心吸取上(shàng)清轉移到(dào)新的管子内。整個(gè)過程要避光(guāng)操作。【注意】：因JC-1不溶于水(shuǐ)，很可能(néng)在稀釋到(dào)工(gōng)作液的過程中形成聚集顆粒，建議細胞染色前用離心或者過濾的方法去除這些顆粒後再使用。

2. JC-1染色步驟（流式細胞儀）

1）于6-，12或24-孔闆上(shàng)進行細胞鋪闆，調整密度為(wèi)5×105cells/ml。37℃，5% CO2培養箱培養過夜。選擇合适的化合物(wù)根據特定的步驟進行凋亡誘導。【注意】：進行凋亡誘導時的細胞密度建議不超過1×106cells/ml，也可根據自(zì)己的細胞類型培養至合适的密度。

2）取0.5 ml細胞懸液至無菌的離心管内；

3）室溫條件(jiàn)400 x g離心5 min；吸掉上(shàng)清。

4）用0.5 ml JC-1工(gōng)作液重懸細胞，于37℃，5% CO2培養箱孵育15-30 min；【注意】：一(yī)般情況，15 min足以進行充分的染色。

5）室溫條件(jiàn)400 x g離心5 min；吸掉上(shàng)清；

6）用2 ml細胞培養液或者緩沖液重懸細胞，之後室溫條件(jiàn)400 x g離心5 min；吸掉上(shàng)清；

7）重複步驟6）；

8）用0.5 ml新鮮培養液或者緩沖液重懸細胞，即可進行後續的流式分析。【注意】：請馬上(shàng)進行流式定量分析，此細節很重要。

數據分析：含有紅(hóng)色JC-1聚集物(wù)的健康細胞線粒體用FL2通(tōng)道檢測；含有綠色JC-1單體的凋亡或不健康細胞用FL1（FITC）通(tōng)道檢測。

3. JC-1染色步驟（熒光(guāng)顯微鏡）

A. 懸浮細胞

1）-6）同上(shàng)JC-1染色步驟（流式細胞儀）；

7）用0.3 ml緩沖液重懸細胞，即可進行熒光(guāng)顯微鏡檢測。【注意】：請馬上(shàng)進行熒光(guāng)顯微分析，此細節重要。

數據分析：使用可同時檢測FITC/TRITC或者FITC/Texas RedTM的雙帶帶通(tōng)濾波器(qì)進行檢測。健康細胞因JC-1聚集後線粒體呈紅(hóng)色，最大發射波長(cháng)為(wèi)590 nm。而凋亡/壞死細胞内的JC-1以單體形式存在，線粒體呈綠色，最大發射波長(cháng)為(wèi)530 nm。

B.  貼壁細胞

1）培養皿内用蓋玻片進行細胞爬片或者細胞培養在腔室玻片（chamber slide）上(shàng)。選擇合适的化合物(wù)根據特定的步驟進行凋亡誘導。

2）染色前開(kāi)始配制JC-1工(gōng)作液，配制步驟見(jiàn)上(shàng)。

3）吸掉細胞培養液，然後加入足夠覆蓋所有細胞的JC-1工(gōng)作液。于37℃，5% CO2培養箱孵育15-30 min；【注意】：一(yī)般情況，15 min足以進行充分的染色。

4）吸掉培養液，然後用合适的緩沖液清洗細胞2次。

5）加入2ml細胞培養液（培養液可含血清和酚紅(hóng)）或者PBS緩沖液，于熒光(guāng)顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下(xià)觀察。數據分析同A.懸浮細胞。

4. JC-1染色步驟（熒光(guāng)酶标儀）

1）-7）同上(shàng)JC-1染色步驟（流式細胞儀）；

8）用0.3 ml緩沖液重懸細胞；然後按照(zhào)每孔0.1 ml的量将染色好的細胞轉移到(dào)黑(hēi)色的96孔闆内，即可進行熒光(guāng)酶标闆分析。【注意】：請馬上(shàng)進行熒光(guāng)顯微分析，此細節重要。

數據分析：健康細胞，JC-1單體聚集形成聚合物(wù)，線粒體呈現強烈的紅(hóng)色熒光(guāng)（激發波長(cháng)550 nm，發射波長(cháng)600 nm）。而凋亡或壞死細胞内JC-1以單體形式存在，線粒體呈強烈的綠色熒光(guāng)（激發波長(cháng)485 nm,發射波長(cháng)535nm）。之後計算(suàn)紅(hóng)色熒光(guāng)信号與綠色熒光(guāng)信号的比值，用來判斷細胞健康程度。

相(xiàng)關産品：

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