CFDA, SE細胞增殖示蹤熒光(guāng)探針

産品關鍵詞：

CFDA, SE (CFSE)；Calcein AM鈣黃綠素；活細胞染色探針；Fluorescein diacetate (FDA)；PKH26；CAS NO：150347-59-4；

産品信息

【溫馨提示】：見(jiàn)我司懋康生(shēng)物(wù)（maokangbio）提供的CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 細胞增殖與示蹤檢測試劑盒（#MX3010-500T）。

産品描述

CFDA, SE，英文全名5(6)-Carboxyfluorescein diacetate N-succinimidyl ester，CAS NO. 150347-59-4，是一(yī)種穩定的、細胞膜滲透性的非熒光(guāng)染料，由兩個(gè)醋酸基團和一(yī)個(gè)琥珀酰亞胺酯（SE）官能(néng)團組成的一(yī)個(gè)熒光(guāng)分子。一(yī)旦主動擴散進入細胞，其醋酸基團被胞内酯酶切割，生(shēng)成熒光(guāng)素酯CFSE。CFSE具有高(gāo)度熒光(guāng)，且能(néng)通(tōng)過其琥珀酰亞胺酯基團共價結合到(dào)細胞内的蛋白(bái)氨基基團。正是這個(gè)共價偶聯反應，CFSE能(néng)夠極其長(cháng)期的保留在細胞内，長(cháng)達數個(gè)月(yuè)。另外，歸因于這一(yī)穩定連接，一(yī)旦染料進入細胞，不會(huì)轉移到(dào)鄰近細胞。無活力細胞仍然是非熒光(guāng)。而活細胞一(yī)旦分化，CFSE能(néng)夠很均勻的分散到(dào)子細胞中，每分裂一(yī)次子代細胞約能(néng)得到(dào)親本細胞1/2的熒光(guāng)強度，因此，通(tōng)過流式細胞儀對熒光(guāng)強度的檢測，能(néng)夠依次分選出未分裂細胞，分裂一(yī)次的細胞（1/2熒光(guāng)強度），分裂兩次的細胞（1/4熒光(guāng)強度），分裂三次的細胞（1/8熒光(guāng)強度），以及以此類推其他分裂次數的細胞。CFSE可以檢測分裂多(duō)達8次或更多(duō)次數的細胞增殖。

CFSE廣泛用于細胞增殖和體内細胞示蹤研究。CFSE的最大激發和發射波長(cháng)分别為(wèi)492nm和517nm，标記細胞後呈綠色熒光(guāng)。使用流式細胞儀檢測可用FL1檢測通(tōng)道。也能(néng)用熒光(guāng)顯微鏡觀察，使用FITC濾片。

産品特性

1）   CAS NO.：150347-59-4

2）   化學名：3',6'-bis(acetyloxy)-3-oxo-2,5-dioxo-1-pyrrolidinyl ester-spiro[isobenzofuran-1(3H),9'-[9H]xanthene] -ar-carboxylic acid

3）   同義名：5(6)-Carboxyfluorescein diacetate N-succinimidyl ester, 5(6)-CFDA N-succinmidyl ester, CFDA-SE

4）   分子式：C29H19NO11

5）   分子量：557.46

6）   純度：≥94%（HPLC）

7）   Ex/Em：492/517nm

8）   外觀：近乎白(bái)色至黃色粉末或結晶

9）   溶解性：溶于DMSO，DMF

10）化學結構式：

保存與運輸方法

保存：-20ºC避光(guāng)幹燥保存，至少2年(nián)有效。

運輸：冰袋運輸。

使用方法

1.      儲存液制備

将低(dī)溫保存的凍幹粉産品置于室溫回溫至少20min，之後短暫低(dī)速離心，讓所有粉末都掉落至管底。稱取适量粉末用高(gāo)質量無水(shuǐ)DMSO溶解配制10mM儲存液。比如5mg CFDA, SE（Mw: 557.46）用897μl DMSO充分溶解即得到(dào)10mM儲存液。根據單次用量分裝，置于≤-20℃避光(guāng)幹燥保存，避免反複凍融。儲存液最好是一(yī)個(gè)月(yuè)内用完，最多(duō)不超過三個(gè)月(yuè)。

2.      工(gōng)作液制備

于正式實驗前，用HHBS緩沖液或其他生(shēng)理緩沖液（pH 7.0）稀釋儲存液到(dào)1-10μM工(gōng)作濃度，渦旋混勻。

【注意事(shì)項】：

1）   CFDA, SE是胺反應性。CFDA, SE标記步驟不可使用含首胺的緩沖液，比如，HHBS或PBS是推薦的CFDA, SE稀釋緩沖液。

2）   CFDA, SE的染色濃度需要根據使用的細胞類型和實驗目的來進行優化調整。比如，如果用于細胞增殖的熒光(guāng)逐漸稀釋分析，相(xiàng)對高(gāo)濃度的CFDA, SE染色工(gōng)作液比較理想；如果僅是用來标記細胞用作另外一(yī)種熒光(guāng)标志(zhì)探針的複染劑，相(xiàng)對低(dī)濃度的CFDA, SE染色工(gōng)作液比較理想，能(néng)夠良好的防止不同濾片設置間的熒光(guāng)溢出。

3.      染色步驟

此染色步驟僅做指導，具體實驗步驟可根據實際情況來做适當調整。

3.1 室溫300×g離心細胞5min，吸掉上(shàng)清。

3.2 用預熱的無菌HHBS，PBS或其他生(shēng)理緩沖液清洗細胞以去除任何殘留的血清蛋白(bái)。之後同上(shàng)離心細胞，吸掉上(shàng)清。

3.3 用上(shàng)述配制好的CFDA, SE染色工(gōng)作液重新懸浮細胞，制備成1-3 x 107cells/mL的單細胞懸液。

3.4 室溫或37℃避光(guāng)孵育15~30min。中間可偶爾的輕輕颠倒混勻使得細胞均勻接觸到(dào)染料。

3.5 加入5倍原始染色體積的細胞培養液（含10% FBS）來淬滅染色過程，輕輕颠倒幾次混勻。

3.6 室溫300×g離心細胞5min，吸掉上(shàng)清。再用10ml完全細胞培養液清洗細胞一(yī)次。

3.7 再用10ml完全細胞培養液重新懸浮細胞，37℃孵育5min，以促進CFDA, SE在細胞内的充分反應和未反應的CFDA, SE重新回到(dào)完全細胞培養液中。離心去上(shàng)清，完成最後一(yī)次清洗。

3.8 之後用完全細胞液重懸細胞，此時可用熒光(guāng)顯微鏡或流式細胞儀來觀察标記效果。或開(kāi)始用藥物(wù)刺激處理或繼續常規培養。經适當時間後用流式細胞儀檢測細胞增殖，或用于特定目的的細胞示蹤。标記細胞也可用于活體動物(wù)的移植，并用熒光(guāng)進行示蹤。

注意事(shì)項

為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

相(xiàng)關産品

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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