Calcein, AM, Ultra Pure Grade 鈣黃綠素（綠色）

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産品關鍵詞：

Calcein, AM 鈣黃綠素AM；Calcein Red 鈣黃綠素紅(hóng)；TRITC；活細胞染色探針；Fluorescein diacetate (FDA)；CAS NO：148504-34-1；

産品信息                                                                                    

【好消息】：我司（懋康生(shēng)物(wù)）推出鈣黃綠素系列産品，覆蓋幾種熒光(guāng)光(guāng)譜，滿足你對活細胞進行多(duō)重标記和功能(néng)分析的需求。不用再困惑于GFP或FITC等常用熒光(guāng)素同鈣黃綠素之間的熒光(guāng)重疊啦。有這麽多(duō)的選擇，不用煩煩煩啦。

産品描述

Calcein, AM，中文名鈣黃綠素乙酰甲酯，CAS NO：148504-34-1，一(yī)種具細胞膜滲透性的活細胞熒光(guāng)染料，呈綠色熒光(guāng)（Ex/Em= 490nm/515nm）。AM基團的存在不僅加強疏水(shuǐ)性，使其能(néng)輕易穿透活細胞膜。而且封閉結合鈣離子的分子部分，本身不發熒光(guāng)。一(yī)旦進入細胞後，被細胞内酯酶水(shuǐ)解為(wèi)鈣黃綠素（calcein），能(néng)與胞内鈣離子結合，産生(shēng)強烈的綠色熒光(guāng)。因不具有細胞膜滲透性，從(cóng)而被保留在胞内。與其它活細胞染料（如BCECF-AM，CFDA）相(xiàng)比，Calcein, AM最适合用于活細胞染色探針，因細胞毒性很低(dī)，而且不會(huì)抑制任何細胞功能(néng)如增殖或淋巴細胞趨化性。另外，使用Calcein, AM活性檢測的實驗結果十分可信，與标準的51Cr釋放(fàng)法所得結果一(yī)緻。

由于死細胞缺乏酯酶，Calcein, AM僅對活細胞進行标記，這一(yī)特征使其非常适合用來檢測細胞活力和細胞的短期示蹤。常常與碘化丙啶PI聯合使用，因其僅能(néng)穿過死細胞膜的無序區域到(dào)達細胞核，嵌入細胞的DNA雙螺旋區域，并産生(shēng)紅(hóng)色熒光(guāng)（Ex/Em= 535nm/617nm），僅對死細胞染色。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激發，因此可用熒光(guāng)顯微鏡同時觀察活細胞和死細胞。用545 nm激發，僅可觀察到(dào)死細胞。結合這些特點，Calcein, AM和PI經常被結合用作活細胞和死細胞的雙重染色。

本品以粉末形式提供，超純級别（≥95%），可與碘化丙啶PI（貨号：MX4205-10MG）聯合使用，進行活細胞和死細胞的雙重染色。

産品特性

1） CAS NO：148504-34-1

2）同義名：鈣黃綠素乙酰甲酯；3'-O-乙酰胺-2',7'-二(羧乙基)-4或5-羧基熒光(guāng)素，二乙酰甲酯；

3）分子式：C46H46N2O23

4）分子量：994.86

5）純度：≥95%（HPLC）

6）外觀：白(bái)色或淺黃色結晶粉末

7）溶解性：溶于DMSO（1~5mM）

8）化學結構式：

保存與運輸方法

保存：-20℃幹燥保存，避免強光(guāng)直射，有效期一(yī)年(nián)。

運輸：冰袋運輸。

注意事(shì)項

1）熒光(guāng)染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光(guāng)，以減緩熒光(guāng)淬滅。

2）乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出後請在幹燥的環境放(fàng)至室溫後再開(kāi)封。由于試劑微量，開(kāi)封前請将其短暫離心，以保證粉末落入管底。

3） Calcein-AM對濕度非常敏感，粉末保存一(yī)定要保持幹燥。Calcein-AM儲存液需要分裝避光(guāng)凍存，且必須緊緊密封蓋子，幹燥保存。Calcein-AM工(gōng)作液必須現配現用。

4）為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

使用方法

A， 儲存液制備

儲存液配制範圍可為(wèi)1～5 mM，具體根據工(gōng)作濃度來決定，建議提前配制成1000×儲存液。若使用的工(gōng)作液為(wèi)5μM，那麽可配制5mM的儲存液，即往50μg Calcein, AM（Mw：994.86）内加入10μl 細胞培養級别的DMSO（貨号：MS4601-100mL）即可。

B， 20% Pluronic F-127制備【可選】

稱取100mg Pluronic F-127粉末（貨号：MS4301-100MG）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解過程需要在40-50℃加熱20-30min。溶液室溫保存，不用冷藏。如有結晶析出，可以重新加熱後溶解，不影響使用。

C， 染色步驟

大多(duō)數實驗體系中Calcein, AM的工(gōng)作濃度為(wèi)2-5μM。由于不同細胞系的最佳染色條件(jiàn)不同，初次實驗建議做梯度實驗，以确定Calcein, AM的最佳工(gōng)作濃度，以最低(dī)的探針濃度得到(dào)最好的熒光(guāng)結果為(wèi)篩選原則。

1） 取一(yī)管适量分裝的儲存液（1000×）置于室溫，至少回溫20min，低(dī)速離心後，用合适的緩沖液如PBS，HBSS-HEPES稀釋到(dào)1×染色工(gōng)作液。

【注意】：有時可添加一(yī)定量的非離子表面活性劑如Pluronic F127到(dào)Calcein AM儲存液内來增強其水(shuǐ)溶性。制備染色工(gōng)作液前，取一(yī)管Calcein AM儲存液内加入等體積的20% Pluronic F127，使Pluronic F127的終濃度為(wèi)0.02%。加入Pluronic F127的Calcein AM溶液不可長(cháng)期保存，需現配現用。

2） 對于貼壁細胞，先用胰酶-EDTA消化細胞，離心收集細胞（1000 rpm，3min）。對于懸浮細胞，直接離心收集細胞。

3） 去上(shàng)清，用PBS（或者其他緩沖液）清洗細胞2~3次，以充分去除殘留的酯酶活性。

4） 用1/10細胞培養基體積的Calcein, AM染色工(gōng)作液重懸細胞，37℃孵育15～30min。

【注意】：若細胞自(zì)身含有機(jī)陰離子轉運體，需加入丙磺舒（1-2.5mM）或者苯磺唑酮（0.1-0.25mM）到(dào)孵育體系内以降低(dī)Calcein洩露到(dào)胞外。

5） 用PBS（或者其他緩沖液）洗滌細胞兩次去除多(duō)餘染料。

【注意】：如有必要，使用含有機(jī)陰離子轉運抑制劑的緩沖液來進行細胞清洗。用含合适濾光(guāng)片（Ex/Em= 490nm/515nm）的熒光(guāng)顯微鏡進行檢測。

相(xiàng)關産品

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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