Calcein Red, AM 鈣黃綠素紅(hóng)（紅(hóng)色）

産品關鍵詞：

Calcein, AM 鈣黃綠素AM；Calcein Red 鈣黃綠素紅(hóng)；TRITC；活細胞染色探針；Fluorescein diacetate (FDA)；CAS NO：148504-34-1；

産品信息                                                                                    

産品描述

Calcein, AM，中文名鈣黃綠素乙酰甲酯，CAS NO：148504-34-1，一(yī)種具細胞膜滲透性最受歡迎的活細胞熒光(guāng)染料，用來标記和監測活細胞功能(néng)，呈綠色熒光(guāng)（Ex/Em= 490nm/515nm）。然而，Calcein, AM單一(yī)顔色使其不能(néng)将其用在多(duō)重标記實驗，比如，其無法和GFP轉染細胞聯合使用，因光(guāng)譜一(yī)緻。為(wèi)了解決這一(yī)應用缺陷，我司特别開(kāi)發出Calcein Red, AM，實現聯合Calcein, AM對活細胞的标記和功能(néng)分析。

同樣原理，Calcein Red, AM自(zì)身無熒光(guāng)，具有細胞膜滲透性。一(yī)旦進入細胞後，被細胞内酯酶水(shuǐ)解為(wèi)鈣黃綠素紅(hóng)（Calcein Red），能(néng)與胞内鈣離子結合，産生(shēng)強烈的紅(hóng)色熒光(guāng)（Ex/Em=560/574），用标準的TRITC/Cy3濾片設置檢測。

産品特性

1）  同義名：Calcein Red Acetoxymethyl ester鈣黃綠素紅(hóng)乙酰甲酯；

2）  分子量：1015.79

3）  純度：≥90%（HPLC）

4）  Ex/Em：560/574nm

5）  溶解性：溶于DMSO（1~5mM）

保存與運輸方法

保存：-20℃幹燥保存，避免強光(guāng)直射，有效期一(yī)年(nián)。

運輸：冰袋運輸。

注意事(shì)項

1）熒光(guāng)染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光(guāng)，以減緩熒光(guāng)淬滅。

2）乙酰氧基甲基酯（AM）易吸潮，冰箱取出後請在幹燥的環境放(fàng)至室溫後再開(kāi)封。由于試劑微量，開(kāi)封前請将其短暫離心，以保證粉末落入管底。

3）Calcein Red AM對濕度非常敏感，粉末保存一(yī)定要保持幹燥。Calcein Red AM儲存液需要分裝避光(guāng)凍存，且必須緊緊密封蓋子，幹燥保存。Calcein Red AM工(gōng)作液必須現配現用。

4）為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

使用方法

A、 儲存液制備

儲存液配制範圍可為(wèi)1～5 mM，具體根據工(gōng)作濃度來決定，建議提前配制成1000×儲存液。若使用的工(gōng)作液為(wèi)5μM，那麽可配制5mM的儲存液，即往1mg Calcein Red AM（Mw：1015.79）内加入196μl細胞培養級别的DMSO（貨号：MS4601-100mL）即可。儲存液需要根據單次用量分裝，-20℃避光(guāng)幹燥保存，一(yī)定要避免受潮，此種情況下(xià)可穩定保存數月(yuè)。

B. 20% Pluronic F-127制備【可選】

稱取100mgPluronic F-127粉末（貨号：MS4301-100MG）中加入500μl DMSO，配制成20%(w/v) DMSO母液。溶解過程需要在40-50℃加熱20-30min。溶液室溫保存，不用冷藏。如有結晶析出，可以重新加熱後溶解，不影響使用。

C. 染色步驟

大多(duō)數實驗體系中Calcein Red AM的工(gōng)作濃度為(wèi)2-5μM。由于不同細胞系的最佳染色條件(jiàn)不同，初次實驗建議做梯度實驗，以确定Calcein Red AM的最佳工(gōng)作濃度，以最低(dī)的探針濃度得到(dào)最好的熒光(guāng)結果為(wèi)篩選原則。

1. 取一(yī)管适量分裝的儲存液（1000×）置于室溫，至少回溫20min，低(dī)速離心後，用合适的緩沖液如PBS，HBSS-HEPES稀釋到(dào)1×染色工(gōng)作液。

【注意】：有時可添加一(yī)定量的非離子表面活性劑如Pluronic F127到(dào)Calcein Red AM儲存液内來增強其水(shuǐ)溶性。制備染色工(gōng)作液前，取一(yī)管Calcein Red AM儲存液内加入等體積的20% Pluronic F127，使Pluronic F127的終濃度為(wèi)0.02%。加入Pluronic F127的Calcein Red AM溶液不可長(cháng)期保存，需現配現用。

2. 對于貼壁細胞，先用胰酶-EDTA消化細胞，離心收集細胞（1000 rpm，3min）。對于懸浮細胞，直接離心收集細胞。

3. 去上(shàng)清，用PBS（或者其他緩沖液）清洗細胞2~3次，以充分去除殘留的酯酶活性。

4. 用1/10細胞培養基體積的Calcein Red AM染色工(gōng)作液重懸細胞，37℃孵育20min～1h。

【注意】：1）若細胞自(zì)身含有機(jī)陰離子轉運體，需加入丙磺舒（1-2.5mM）或者苯磺唑酮（0.1-0.25mM）到(dào)孵育體系内以降低(dī)去酯化的Calcein Red洩露到(dào)胞外；2）降低(dī)探針加載溫度，可能(néng)會(huì)減少探針區室化現象。

6. 用PBS（或者其他緩沖液）洗滌細胞兩次去除多(duō)餘染料。

【注意】：如有必要，使用含有機(jī)陰離子轉運抑制劑的緩沖液來進行細胞清洗；

7. 用含合适濾光(guāng)片（Ex/Em= 560nm/574nm）的儀器(qì)進行檢測。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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