Deoxyribonuclease I (DNase I) 脫氧核糖核酸酶I，來源于牛胰腺

（凍幹粉形式，即用型液體形式，懋康生(shēng)物(wù)）

關鍵詞：

脫氧核糖核酸酶I DNase I；核糖核酸酶 RNase；全能(néng)核酸酶 Benzonase；Sigma D5025； Sigma DN25；CAS：9003-98-9；

需求背景：

分子生(shēng)物(wù)學實驗中，在RNA樣品的制備過程中，常常會(huì)受到(dào)樣品中不可避免存在的DNA的幹擾，為(wèi)了保證RNA樣品的純度以及滿足後續RNA相(xiàng)關研究的順利開(kāi)展，需要DNase I有針對性的酶解DNA。另外，在蛋白(bái)制品的生(shēng)産中比如抗體，重組蛋白(bái)，細胞裂解這步釋放(fàng)的内含物(wù)中除掉蛋白(bái)外，往往有很高(gāo)含量的核酸（DNA, RNA），核酸的存在嚴重幹擾制品的純化和活性，為(wèi)此，利用DNase I和RNase組合方式來去除核酸幹擾，也很必要。還(hái)有，在其他的實驗比如TUNEL細胞凋亡檢測中常用DNase I對細胞樣本核酸進行剪切，以得到(dào)實驗所需的陽性對照(zhào)。

基本介紹：

脫氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，縮寫DNase I，在大多(duō)數細胞和組織中都能(néng)發現的一(yī)種核酸内切酶，偏好切割鄰近嘧啶的磷酸二酯鍵，産生(shēng)5’端為(wèi)磷酸基團、3’端為(wèi)羟基的多(duō)聚核苷酸（見(jiàn)下(xià)圖反應流程圖），平均消化産物(wù)最小(xiǎo)為(wèi)多(duō)聚四核苷酸。Mg2+存在條件(jiàn)下(xià)，DNase I可随機(jī)識别和切斷DNA任一(yī)條鏈上(shàng)的任意位點；而在Mn2+存在條件(jiàn)下(xià)，DNase I識别DNA的兩條鏈并在幾乎相(xiàng)同的位點進行切割。DNase I可水(shuǐ)解多(duō)種形式DNA，如單鏈DNA、雙鏈DNA，甚至染色質（其切割速率受組蛋白(bái)影響）。

脫氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，縮寫DNase I，最早從(cóng)胰腺中分離而來，至今哺乳動物(wù)胰腺也是最主要的來源之一(yī)。DNase I以兩對二硫鍵結合的多(duō)種糖蛋白(bái)混合形式存在。最佳的工(gōng)作範圍是pH 7-8，DNase的活性依賴于Ca2+，并可被二價金屬離子如Co2+，Mn2+，Zn2+等激活。5mM Ca2+可保護酶使其不被水(shuǐ)解，而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原來的1/2。

主要應用：

◇   制備不含DNA的RNA樣本；

◇   RT-PCR反應前RNA樣本内基因組DNA等可能(néng)存在DNA污染的去除；

◇   T7，T3，SP6等RNA聚合酶催化的體外RNA轉錄後DNA模闆的去除；

◇   DNase I足迹法（DNase I footprinting）研究DNA-蛋白(bái)質相(xiàng)互作用；

◇   缺口平移法标記探針用；

◇   制備随機(jī)DNA片段文庫；

◇   TUNEL細胞凋亡檢測中用于剪切DNA制備陽性對照(zhào)；

我司（懋康生(shēng)物(wù)MKBio）提供的脫氧核糖核酸酶I（DNase I），來源于牛胰腺，通(tōng)過親和色譜純化所得，不含RNase和蛋白(bái)酶污染。為(wèi)了滿足工(gōng)業(yè)用戶和科研用戶的不同應用需求，我們提供凍幹粉（不同比活）和即用型液體形式的DNase I。具體信息如下(xià)：

一(yī)、脫氧核糖核酸酶I（DNase I）（凍幹粉形式，比活力≥2000 Kunit U/mg protein）

1.1 産品特征：

1）   CAS NO：9003-98-9

2）   蛋白(bái)純度：≥80%（biuret），色譜純化

3）   比活力：≥2000Kunit Units/mg protein

4）   活力定義：25℃，pH5.0條件(jiàn)下(xià)DNase催化底物(wù)DNA，使每毫升每分鍾ΔA260增加0.001的變化定義為(wèi)一(yī)個(gè)酶活力單位（Kunitz unit）。

5）   激活劑：多(duō)種二價金屬離子如Mg2+、Mn2+、 Ca2+、Co2+、and Zn2+

6）   抑制劑：β-巯基乙醇；螯合劑；SDS；肌動蛋白(bái)；并沒有特異性抑制DNase I酶活的通(tōng)用抑制劑，比如檸檬酸鹽抑制Mg2+活化的DNase I，但不能(néng)影響Mn2+激活的DNase I。

7）   溶解性：溶于0.15M NaCl（5mg/ml），無色透明溶液

1.2 訂購信息：産品性能(néng)媲美Sigma D5025，本品生(shēng)産至少十年(nián)以上(shàng)，銷售到(dào)國(guó)内各大實驗室，歡迎各大工(gōng)業(yè)和科研用戶前來咨詢。電(diàn)話：021-54736159，QQ：2971634497。

二、脫氧核糖核酸酶I（DNase I）（凍幹粉形式，比活力≥500 Kunit U/mg protein）

2.1 産品特征：

8）   CAS NO：9003-98-9

9）   分子量：~31 kDa

10）同義名：DNase I, Deoxyribonucleate 5’-oligonucleotidohydrolase, Deoxyribonuclease A 脫氧核糖核酸 5′-寡核苷酸水(shuǐ)解酶，脫氧核糖核酸酶A

11）  比活力：≥500 Kunit Units/mg protein

12）  活力定義：在50µl含40mM Tris-HCl, pH8.0，2.5 mM MgSO4，1mM CaCl2的反應緩沖體系中，37℃，10min内完全降解1µg λ-DNA所需的酶量即為(wèi)一(yī)個(gè)活力單位。此反應條件(jiàn)下(xià)得到(dào)的一(yī)個(gè)單位DNase活力約等于一(yī)個(gè)Kuntiz unit。

13）  激活劑：多(duō)種二價金屬離子如Mg2+、Mn2+、 Ca2+、Co2+、and Zn2+

14）  抑制劑：EGTA，EDTA，鹽離子濃度（＞100mM）都能(néng)降低(dī)DNase活性

15）  熱失活：含終止溶液（20mM EGTA，pH 8.0）内65℃，處理10min

16）  溶解性：溶于緩沖液（≥1mg/ml in 20mM Tris-HCl（pH 7.5）, 1mM MgCl2, 50% 甘油）

2.2 訂購信息：産品性能(néng)媲美Sigma DN25。比活低(dī)于MF0401（≥2,000 Kunit U/mg protein），價格更加經濟。歡迎咨詢，電(diàn)話：021-54736159，QQ：2971634497。

三、脫氧核糖核酸酶I（DNase I）（即用型溶液）

3.1 産品特征：

試劑盒形式提供，其中DNase I以即用型溶液(1U/μl) 形式提供，酶經過嚴格質控能(néng)極好的消化模闆；還(hái)提供10× Reaction Buffer和10× Stop Solution，節省了試劑配制的時間，用起來更加快捷。

3.2 試劑盒包裝：

3.3 使用方法【以RT-PCR反應前RNA樣本内DNA污染的去除為(wèi)例】

1）DNA模闆經核酸内切酶線性化，用酚/氯仿和氯仿/異丙醇提取DNA，用乙醇沉澱後，溶于适量無菌去離子水(shuǐ)中。

2）往一(yī)個(gè)RNase-free EP管内依次加入下(xià)列試劑：

【注意】：如果需要處理較大量的RNA樣品，可按比例放(fàng)大上(shàng)述反應體系。條件(jiàn)許可下(xià)最好往體系内加入适量RNase抑制劑（貨号：MF0218-2KU）以防止RNA降解。

3）   37℃孵育30min。

4） 往上(shàng)述體系内加入1μl 10× Stop Solution使其終濃度為(wèi)1×，混勻。之後65℃孵育10min使DNase I失活。【注意】：一(yī)定要先加入10× Stop Solution，然後再加熱失活RNase I，否則先加熱可能(néng)引起RNA被降解。

5）加熱處理後的RNA樣品即可直接用作RT-PCR反應用的模闆。

3.4  訂購信息：即用型試劑盒，科研單位且用量不多(duō)用戶的首選。歡迎咨詢，電(diàn)話：021-54736159，QQ：2971634497。

相(xiàng)關産品

貨号	名稱	規格
MF0402-10MG	Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥500 units/mg protein	10MG
MF0401-15KU	Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥2,000 units/mg protein	15KU
MF0405-200U	DNase I Solution (RNase & Protease-free) 脫氧核糖核酸酶I溶液	200U
MF0203-100MG	Ribonuclease A (RNase A) from Bovine Pancreas	100mg
MP1509-25KU	Benzonase Nuclease 全能(néng)核酸酶	25KU
MF0201-100MG	Proteinase K, Molecular Biology Grade蛋白(bái)酶K	100mg
MF0218-2KU	RNase Inhibitor (40U/µl), Murine小(xiǎo)鼠RNA酶抑制劑	2KU
MF0404-500ML	DEPC-treated Water (DNase、RNase free) DEPC水(shuǐ)（無DNase、RNase )	500ml

 

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海夢澤生物科技有限公司是一(yī)家涉足于生(shēng)命科學和生(shēng)物(wù)技(jì)術(shù)領域研究的試劑、儀器(qì)和實驗室消耗品與實驗服務工(gōng)作，主要從(cóng)事(shì)細胞生(shēng)物(wù)學、植物(wù)學、分子生(shēng)物(wù)學、免疫學、生(shēng)物(wù)化學、蛋白(bái)組學。生(shēng)物(wù)制藥與診斷試劑研發生(shēng)産等領域。 本公司秉承“以人為(wèi)本，以誠為(wèi)信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為(wèi)廣大客戶提供優質産品。