GUS Histochemical Stain Kit GUS染色試劑盒（組織化學法）

— — 轉基因植物(wù)GUS表達活性定性研究

關鍵詞：β-glucuronidase (GUS) β-葡（萄）糖苷酸酶；X-Gluc；GUS活性檢測；Histochemical 組織化學定位法；MUG；農杆菌介導的轉基因植物(wù)研究；

基本描述：

GUS，英文名β-glucuronidase，中文名β-葡（萄）糖苷酸酶，一(yī)種功能(néng)非常全面的報(bào)告基因檢測系統，廣泛用于植物(wù)分子生(shēng)物(wù)學和微生(shēng)物(wù)學研究。GUS基因融合系統，根據底物(wù)的類型，對細胞/組織或蛋白(bái)提取液的GUS酶活性進行定性或定量分析。組織化學方法（定性研究）用于GUS融合蛋白(bái)表達的亞細胞定位，多(duō)以X-Gluc為(wèi)底物(wù)，因其能(néng)被水(shuǐ)解生(shēng)成一(yī)無色的葡萄糖醛酸和一(yī)肉眼可見(jiàn)的氯-溴靛藍（chloro-bromoindigo）深藍色沉澱。熒光(guāng)分析法（定量研究）則用于GUS融合蛋白(bái)表達水(shuǐ)平的研究，常以MUG為(wèi)底物(wù)，因其能(néng)被水(shuǐ)解生(shēng)成一(yī)無色的葡萄糖醛酸和一(yī)熒光(guāng)産物(wù)4-MU（4-甲基傘型酮），藍色熒光(guāng)（Ex= 365nm，Em= 445nm）。

由于絕大多(duō)數植物(wù)細胞内不存在内源性的GUS活性，因此，GUS廣泛用作轉基因植物(wù)的報(bào)告基因，特别是外源基因瞬時表達的轉化實驗。

産品特點：

本試劑盒以X-Gluc為(wèi)顯色底物(wù)，用于GUS融合蛋白(bái)的組織化學染色（定性研究）。另，該試劑盒含染色所需的所有試劑，隻需将X-Gluc溶液和GUS染色緩沖液按比例混合即可制備成GUS染色工(gōng)作液。該試劑盒可制備50ml染色工(gōng)作液。具有操作簡單、快速，穩定，且低(dī)背景的優點。

産品組分：

産品使用：

一(yī)、X-Gluc（50×）溶液的配制

1）于實驗前提前将X-Gluc Substrate（組分A）、GUS Stain Buffer（組分C）置于室溫回溫至少20min；

2）低(dī)速離心組分A，X-Gluc Solvent（組分B）。然後将所有的組分B加入組分A，低(dī)速漩渦至粉末完全溶解，即配制X-Gluc（50×）溶液，根據單次用量，-20℃避光(guāng)保存。

【注意】：正常X-Gluc（50×）溶液呈無色，若溶液變為(wèi)紅(hóng)色或棕色，說明其失效。

二、GUS染色工(gōng)作液的配制

按照(zhào)以下(xià)比例，混合制備GUS染色工(gōng)作液。建議現配現用。

三、GUS染色步驟

1）取材：将根莖、葉片、花瓣等組織剪成小(xiǎo)片，放(fàng)到(dào)1.5ml離心管；

【注意】：染色用植物(wù)材料的制備方法根據特定組織和器(qì)官類型而有差異。對于拟南(nán)芥的根/花/葉片，以及煙(yān)草(cǎo)幼苗的根，可以不做任何預處理直接進行染色；但是，對于煙(yān)草(cǎo)和馬鈴薯的莖和葉片需要先剪切成薄片（~1-3mm）再進行染色。而，更大的組織樣品，需用真空滲透法來促進染色工(gōng)作液滲入細胞。

2）染色：加入适量體積現配好的染色工(gōng)作液，以完全覆蓋材料為(wèi)準。鋁箔紙(zhǐ)包好，室溫孵育3h-過夜。同時設置陰性和陽性對照(zhào)實驗；

3）脫色：将染色好的材料轉入70%酒精中脫色2-3次，直至陰性對照(zhào)材料變為(wèi)白(bái)色。GUS染色陽性的藍色斑點非常穩定，不會(huì)被酒精脫色。

4）觀察：大部分GUS染色陽性的藍色斑點肉眼能(néng)觀察到(dào)，然而，有些材料可能(néng)藍色斑點很細微，需要顯微鏡下(xià)才能(néng)觀察到(dào)。【注意】：白(bái)色背景上(shàng)的藍色斑點即為(wèi)GUS表達位點。

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