| 目錄号 | MX3206-1MG | 售價 | 648.00元 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 規格 | 1mg | 運輸溫度 | 室溫 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 其他名稱 | Enhanced JC-1; | 保存溫度 | -20℃避光(guāng)保存 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| CAS号 | N/A | 有效期 | 至少1年(nián) | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 應用 | 線粒體膜電(diàn)位檢測 | 訂購數量 |
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産品簡介: JC-10（JC-1優越替代物(wù)）線粒體膜電(diàn)位熒光(guāng)探針
溫馨提示1）：見(jiàn)我司懋康生(shēng)物(wù)（MKBio）整理的線粒體熒光(guāng)探針産品專題。 溫馨提示2）：見(jiàn)我司懋康生(shēng)物(wù)（MKBio）整理的膜電(diàn)位檢測探針産品專題。
産品标簽 JC-10；JC-1；Rhodamine 123 羅丹明123； CCCP；Mitochondrial Membrane Potential 線粒體膜電(diàn)位探針；CAS：47729-63-5
訂購信息：現貨供應。歡迎來電(diàn)咨詢，電(diàn)話：021-54736159 ，18121428569；QQ：3308240863， 2971634497。
産品描述 JC-10是一(yī)種新型的用來監測線粒體膜電(diàn)位變化的熒光(guāng)探針，是JC-1的優越替代物(wù)。與JC-1相(xiàng)比，具有以下(xià)幾個(gè)重要優勢：1）溶解性得以改良——在水(shuǐ)溶液中形成沉澱可能(néng)性明顯降低(dī)；2）使用更方便——簡化步驟将手動操作時間最小(xiǎo)化；3）熒光(guāng)信号更高(gāo)——改良的信号與背景熒光(guāng)的信噪比；4）結果更穩定——優化探針以保證更連續性和穩定性結果。
JC-10是一(yī)種替換JC-1，用于檢測線粒體膜電(diàn)位△Ψm的理想熒光(guāng)探針。JC-10以電(diàn)勢依賴性的方式積聚在線粒體内，可以用來檢測細胞、組織或純化的線粒體膜電(diàn)位。正常線粒體内，JC-10聚集在線粒體基質中形成聚合物(wù)，聚合物(wù)發出強烈的紅(hóng)色熒光(guāng)（Ex=540 nm, Em=590 nm）；不健康的線粒體由于膜電(diàn)位的下(xià)降或喪失，JC-10隻能(néng)以單體的形式存在于胞漿中，産生(shēng)綠色熒光(guāng)（Ex=490 nm, Em=525 nm）。JC-10不僅可用于定性檢測，因顔色的變化可以非常直接的反映出線粒體膜電(diàn)位的變化。也可以用于定量檢測，因線粒體的去極化程度可以通(tōng)過紅(hóng)/綠熒光(guāng)強度的比例來衡量。觀察時，隻需使用常規的觀察紅(hóng)色熒光(guāng)和綠色熒光(guāng)的設置即可。
JC-10可用來檢測大量細胞類型如神經元和心肌細胞的線粒體膜電(diàn)位，也可用來研究重要的細胞生(shēng)理活動，比如ATP合成，活性氧（ROS）和凋亡發生(shēng)等。
本品以粉末形式提供，隻需溶于DMSO配制成2mg/ml的儲存液，然後用合适的緩沖液稀釋到(dào)工(gōng)作濃度即可使用。
産品特性 1）同義名：Enhanced JC-1; 2）分子量：~600 g/mol 3） 純度：＞95%（HPLC） 4） 溶解性：DMSO（2mg/ml）
保存與運輸方法 保存：-20℃避光(guāng)保存，至少1年(nián)有效。 運輸：室溫運輸。
注意事(shì)項
使用方法 1. 染色工(gōng)作液制備 JC-10儲存液制備：取本品溶于無水(shuǐ)DMSO配制成2mg/ml儲存液（比如5mg JC-10加入2.5ml DMSO），混勻後，按照(zhào)單次用量分裝，避光(guāng)凍存，避免反複凍融。
JC-10（1×）工(gōng)作液制備：取一(yī)管JC-10儲存液置于室溫，使其充分融化，之後用HHBS（1×Hanks with 20 mM Hepes buffer, pH 7.0）或其他緩沖液（pH 7-8，含0.02% Pluronic®F-127）配制成10-30μM的1×工(gōng)作液，漩渦混勻待用。 【注意】：對于某些細胞系pH8的工(gōng)作液可能(néng)防止JC-10洩露。
2. JC-10染色步驟（熒光(guāng)酶标儀） 1）用待測藥物(wù)處理細胞一(yī)段時間（比如，Jurkat細胞用喜樹堿camptothecin）處理4-6h）以誘導凋亡。對于空白(bái)孔（不含細胞的培養基）加入相(xiàng)應體積的藥物(wù)緩沖液。 2）按照(zhào)100μl/孔/96孔闆或25μl/孔/384孔闆的量加入JC-10工(gōng)作液到(dào)培養孔内。 3）将整個(gè)培養闆置于37℃，5% CO2孵育15-60min。【注意】：合适的孵育時間取決于細胞類型和細胞濃度。每次試驗建議優化孵育時間。 4）用熒光(guāng)酶标儀監測Ex/Em = 500/525 nm（FITC通(tōng)道）和540/595 nm（TRITC通(tōng)道）的熒光(guāng)變化，計算(suàn)兩者熒光(guāng)信号比值，以判斷細胞健康程度。 【可選】：吸掉JC-10染色工(gōng)作液，按照(zhào)100μl/孔/96孔闆或25μl/孔/384孔闆的量加入HHBS緩沖液或其他生(shēng)理緩沖液，然後再進行熒光(guāng)信号分析。
3. JC-10染色步驟（熒光(guāng)顯微鏡或流式細胞儀） 1）用待測藥物(wù)處理細胞一(yī)段時間（比如，Jurkat細胞用喜樹堿camptothecin）處理4-6h）以誘導凋亡。對于空白(bái)孔（不含細胞的培養基）加入相(xiàng)應體積的藥物(wù)緩沖液。 2）離心去上(shàng)清，調整細胞密度為(wèi)1-5×105細胞/管。 3）用500µl JC-10染色工(gōng)作液重懸細胞。 4）室溫孵育或37℃，5%CO2孵育10-30 min，避光(guāng)。【注意】：合适的孵育時間取決于細胞類型和細胞濃度。每次試驗建議優化孵育時間。 5）用熒光(guāng)顯微鏡分别觀察Ex/Em = 490/525 nm（FITC通(tōng)道）和540/595 nm（TRITC通(tōng)道）的熒光(guāng)變化；或者用流式細胞儀（FL1和FL2通(tōng)道進行檢測）。 【可選】：離心後吸掉JC-10染色工(gōng)作液，加入500µl HHBS緩沖液或其他合适緩沖液重懸細胞使其密度為(wèi)1-5×105細胞/管，然後再進行熒光(guāng)分析。
應用示例（熒光(guāng)顯微鏡觀察）： 文獻來源：Yokokura S et al. Calmodulin antagonists induce cell cycle arrest and apoptosis in vitro and inhibit tumor growth in vivo in human multiple myeloma. BMC Cancer. 2014 Nov 26;14:882.
實驗方法（線粒體膜電(diàn)位去極化檢測）：A total of 1 × 106cells were loaded with 10 μg/ml of JC-10 at 37°C for 30 min. Next, the cells were treated with 60 μM of CaM antagonists at 37°C for 1 h and the visualized using a fluorescence microscope (Olympus BX-51/DP-72; Olympus, Tokyo, Japan) fitted with a WIB filter (excitation, 460–490 nm; dichroic mirror, 505 nm; emission barrier filter, 510 nm).
實驗結果（線粒體膜電(diàn)位去極化檢測）：
Fig 1. Effects of CaM antagonists on intracellular Ca2+levels and mitochondrial membrane potential. Cells were pretreated with JC-10 dye for 30 min, and subsequently incubated with CaM antagonists (60 μM) for 1 h. The cells were then visualized under a fluorescence microscope to visualize the yellow fluorescent aggregation that indicates high mitochondrial membrane potential which is distinct from the green fluorescent monomer observed at a low mitochondrial membrane potential.
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