ER-Tracker Green, for live-cell imaging 内質網綠色熒光(guāng)探針

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産品标簽

ER-Tracker Green; ER-Tracker Blue-White DPX；BODIPY™ FL Glibenclamide；格列本脲；DiOC6(3)；CAS: 53213-82-4；

産品信息

【溫馨提示1】：見(jiàn)我司懋康生(shēng)物(wù)整理得溶酶體熒光(guāng)探針（Lysotracker and Lysosensor）産品專題。

【溫馨提示2】：見(jiàn)我司懋康生(shēng)物(wù)整理得線粒體熒光(guāng)探針（Mitotracker）産品專題。

産品描述

ER-Tracker dyes是一(yī)系列細胞膜滲透性的活細胞染料，高(gāo)度選擇性結合内質網（ER）。不同于傳統的内質網染料DiOC6(3)，該系列染料極少染色線粒體，且低(dī)濃度下(xià)染色無細胞毒性。使用提供的優化步驟對細胞染色和甲醛處理後，可以保留部分的活細胞染色特征。

ER-Tracker Green是一(yī)種藥物(wù)熒光(guāng)偶聯物(wù)，即BODIPY™ FL标記的格列苯脲（BODIPY™ FL Glibenclamide）。格列本脲，又(yòu)名優降糖（Glyburide），是一(yī)種磺酰脲類口服降糖藥，用來調查胰島素β細胞活性和胰島素分泌，以及研究心肌細胞功能(néng)和心律失常。格列本脲能(néng)夠結合内質網上(shàng)突出的ATP敏感性鉀通(tōng)道（KATP）的磺脲類受體。格列本脲的藥理學活性可能(néng)影響内質網功能(néng)。某些特定細胞上(shàng)磺脲類受體的可變表達可能(néng)引起非内質網标記。BODIPY™ FL是Invitrogen (Molecular Probe)公司開(kāi)發的BODIPY™熒光(guāng)染料之一(yī)，最大激發/發射波長(cháng)~504/511nm，光(guāng)譜特性類似于傳統的FITC，與檢測該染料的标準濾片兼容。

本品為(wèi)DMSO儲存液，濃度為(wèi)1mM。用于活細胞内質網染色，建議工(gōng)作濃度約為(wèi)1µM，需根據實際情況做優化調整。按照(zhào)說明書的标準步驟操作，活細胞染色後用甲醛等固定可保留部分染色效果。

産品特性

1）   分子式：C37H42BClF2N6O6S

2）   分子量：783.0952

3）   外觀：液體

4）   Ex/Em：504/511nm (in methanol)

5）   檢測濾片：FITC

6）   化學結構式：

保存與運輸方法

保存：≤-20ºC避光(guāng)幹燥保存，至少6個(gè)月(yuè)有效。

運輸：冰袋運輸。

注意事(shì)項

1）   整個(gè)染色過程中需注意避光(guāng)。

2）   ER-Tracker Green（1mM）在4℃，冰浴等較低(dī)溫度下(xià)會(huì)凝固而粘附在離心管官底、管壁或管蓋内，可将置于25℃水(shuǐ)浴溫育片刻直至全部融解後使用。對于微量液體，每次使用前低(dī)速離心使得液體全部沉降至管底，再開(kāi)蓋使用。

3）   為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

使用方法

以下(xià)實驗方案是根據牛肺動脈内皮細胞（BPAE）優化所得，且已驗證适用于其他常規細胞系的染色。建議以下(xià)步驟僅作起始實驗的參考，請根據具體的細胞類型和實際情況來優化标記條件(jiàn)。

1.      試劑準備

ER-Tracker Green以1mM的DMSO儲存液形式提供，使用前請将ER-Tracker Green 從(cóng)冰箱内取出，确保回溫至室溫或于25℃水(shuǐ)浴溫育直至完全融解，經短暫離心将所有溶液沉到(dào)管底。第一(yī)次使用将儲存液根據單次用量分裝，≤-20ºC避光(guāng)幹燥保存。

2.      細胞染色

2.1    制備染色工(gōng)作液：将1mM ER-Tracker Green稀釋至工(gōng)作濃度，建議工(gōng)作濃度~1µM。為(wèi)了最小(xiǎo)化染料過高(gāo)引起的假象，建議使用能(néng)達到(dào)實驗目的的最低(dī)濃度來完成染色。【注意】：在含Ca2+/Mg2+ 的Hank’s 平衡鹽溶液（HBSS/Ca/Mg, Cat# MS3501-500ML）内進行染色可得到(dào)最佳結果。

2.2    細胞染色：對于貼壁細胞，吸除培養基，用HBSS清洗細胞，加入預熱的染料工(gōng)作液，37℃孵育15-30min。吸除染色液，加入不含探針的新鮮培養基，并在熒光(guāng)顯微鏡下(xià)觀察細胞。如果細胞需要固定，請跳轉到(dào)步驟3。

3.      細胞固定【選做，固定隻能(néng)保留部分熒光(guāng)信号】

3.1    固定細胞：用4%甲醛于37℃固定細胞2min。

3.2    清洗和觀察細胞：固定後，用合适緩沖液清洗2次，每次5min。之後可進一(yī)步染色或滴加抗熒光(guāng)淬滅劑封片後觀察。不建議進行透化處理，因用Triton X-100做透化處理會(huì)導緻熒光(guāng)信号消失。

染色示例

Fig 1.Live bovine pulmonary artery endothelial cells labeled with ER-Tracker Green and MitoTracker Red 

CMXRos.Organelle staining of live bovine pulmonary artery endothelial cells. Endoplasmic reticulum was labeled with ER-Tracker Green; mitochondria were visualized with MitoTracker Red CMXRos 

相(xiàng)關産品

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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