DNase I from Bovine Pancreas, ≥500 units/mg protein

脫氧核糖核酸酶I (DNase I)，來源于牛胰腺

關鍵詞：

Deoxyribonucleate 5 –Oligonucleotidohydrolase，5′-寡核苷酸-水(shuǐ)解酶，Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas，EC No: 3.1.21.1，CAS NO：9003-98-9

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産品描述

脫氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，縮寫DNase I，在大多(duō)數細胞和組織中都能(néng)發現的一(yī)種核酸内切酶，偏好切割鄰近嘧啶的磷酸二酯鍵，産生(shēng)5’端為(wèi)磷酸基團、3’端為(wèi)羟基的多(duō)聚核苷酸，平均消化産物(wù)最小(xiǎo)為(wèi)多(duō)聚四核苷酸。Mg2+存在條件(jiàn)下(xià)，DNase I可随機(jī)識别和切斷DNA任一(yī)條鏈上(shàng)的任意位點；而在Mn2+存在條件(jiàn)下(xià)，DNase I識别DNA的兩條鏈并在幾乎相(xiàng)同的位點進行切割。DNase I可水(shuǐ)解多(duō)種形式DNA，如單鏈DNA、雙鏈DNA，甚至染色質（其切割速率受組蛋白(bái)影響）。

脫氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，縮寫DNase I，最早從(cóng)胰腺中分離而來，至今哺乳動物(wù)胰腺也是最主要的來源之一(yī)。DNase I以兩對二硫鍵結合的多(duō)種糖蛋白(bái)混合形式存在。最佳的工(gōng)作範圍是pH 7-8，DNase的活性依賴于Ca2+，并可被二價金屬離子如Co2+，Mn2+，Zn2+等激活。5mM Ca2+可保護酶使其不被水(shuǐ)解，而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原來的1/2。

本品來自(zì)牛胰腺，親和色譜純化制備所得，常用于去除蛋白(bái)或RNA樣品中的DNA，或者用于向DNA中引入缺口使标記堿基插入DNA。本品以凍幹粉形式供應，比活≥500 Kunit Units/mg蛋白(bái)。

産品特性

1）   CAS NO：9003-98-9

2）   分子量：~31 kDa

3）   同義名：DNase I, Deoxyribonucleate 5’-oligonucleotidohydrolase, Deoxyribonuclease A 脫氧核糖核酸 5′-寡核苷酸水(shuǐ)解酶，脫氧核糖核酸酶A

4）   比活力：≥500 Kunit Units/mg protein

5）   活力定義：在50µl含40mM Tris-HCl, pH8.0，2.5 mM MgSO4，1mM CaCl2的反應緩沖體系中，37℃，10min内完全降解1µg λ-DNA所需的酶量即為(wèi)一(yī)個(gè)活力單位。此反應條件(jiàn)下(xià)得到(dào)的一(yī)個(gè)單位DNase活力約等于一(yī)個(gè)Kuntiz unit。

6）   激活劑：多(duō)種二價金屬離子如Mg2+、Mn2+、 Ca2+、Co2+、and Zn2+

7）   抑制劑：EGTA，EDTA，鹽離子濃度（＞100mM）都能(néng)降低(dī)DNase活性

8）   熱失活：含終止溶液（20mM EGTA，pH 8.0）内65℃，處理10min

9）   溶解性：溶于緩沖液（≥1mg/ml in 20mM Tris-HCl（pH 7.5）, 1mM MgCl2, 50% 甘油）

保存與運輸方法

保存：凍幹粉-20℃幹燥凍存，至少3年(nián)穩定。

運輸：冰袋運輸。

使用方法

一(yī)、   儲存液制備

将低(dī)溫保存的本品置于室溫回溫至少20min，低(dī)速短時離心後，加入适量緩沖液配制成至少≥1mg/ml儲存液（如：20mM Tris-HCl（pH 7.5）, 1mM MgCl2, 50% 甘油），根據一(yī)定用量分裝置于-20℃保存，至少1年(nián)穩定。

二、   反應緩沖液制備

建議1×反應緩沖液：40mM Tris-HCl（pH 8.0）, 2.5mM (up to 10mM) MgSO4，1mM (up to 10mM) CaCl2

【注意】：當起始原料含EGTA，EDTA，其他螯合劑，和/或高(gāo)濃度鹽離子，此時反應緩沖液需更高(gāo)濃度的Mg2+和Ca2+。

三、使用步驟（作為(wèi)參考，具體實驗可做适當調整）

2.1 往一(yī)個(gè)RNase-free PCR管内加入：1µg RNA樣本；49 µl 1×反應緩沖液；1 µl DNase I, 1 unit/ml；【注意：酶的實際比活力請見(jiàn)産品标簽】，混勻。

2.2 37℃孵育10-15min。【注意：消化時間不要超過15min或消化溫度不要高(gāo)于37℃，否則殘留的RNase A污染可能(néng)會(huì)開(kāi)始降解RNA】

2.3 加入1µl終止液（20mM EGTA，pH 8.0）結合Ca2+和Mg2+，之後于65-70℃失活10min，終止反應。【注意：必須在熱失活之前加入終止液】

注意事(shì)項

1）  在不同的反應緩沖體系内，用來完全消化一(yī)定量DNA所需的DNase I量不同，請根據具體的工(gōng)作體系或實驗經驗來決定。【注意：鹽濃度＞100mM會(huì)降低(dī)DNase I活性】

2）  為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

相(xiàng)關産品：

注意事(shì)項

為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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