表1. 膠原酶NB系列産品選擇指南(nán)

Collagenase NB 1 Premium Grade

Collagenase NB 4 Standard Grade

Collagenase NB 4G Proved Grade

Collagenase NB 5 Sterile Grade

Collagenase NB 8 Broad Range

縮寫

NB 1

NB 4

NB 4G

NB 5

NB 8

貨号

17455

17454

17465

17459

17456

簡單描述

高(gāo)度純化膠原酶，含膠原酶Class I和Class II型，以及非常低(dī)的蛋白(bái)裂解酶次活性和細菌内毒素。

粗制酶，含膠原酶Class I和Class II型，以及平衡比的蛋白(bái)水(shuǐ)解酶次活性比如中性蛋白(bái)酶或梭菌蛋白(bái)酶。

粗制酶，與膠原酶NB 4 标準級别相(xiàng)比，具有更高(gāo)的膠原酶活性，具有更平衡的中性蛋白(bái)酶、梭菌蛋白(bái)酶和胰蛋白(bái)酶樣活性。

粗制酶，含與膠原酶NB 4 标準級别相(xiàng)同的酶活性。不同之處在于根據歐洲藥典EP規定的無菌條件(jiàn)下(xià)生(shēng)産。

純化膠原酶，含有增加的膠原酶活性和減低(dī)的蛋白(bái)水(shuǐ)解酶次活性和細菌内毒素。

純化程度

親和高(gāo)度純化酶

粗制酶

粗制酶

粗制酶

純化酶

膠原酶活性

++++

+

++

+

+++

蛋白(bái)裂解次活性

-

++

+++

+++

+

無菌程度

非無菌

非無菌

非無菌

無菌

非無菌

比活力

≥ 3.00 U/mg

≥ 0.10 U/mg

≥ 0.18 U/mg

≥ 0.10 U/mg

≥ 0.90 U/mg

内毒素

≤ 10.0 EU/mg

/

/

/

≤ 100 EU/mg

主要應用

用于分離敏感細胞并保證高(gāo)産量和高(gāo)活性。與中性蛋白(bái)酶NB聯合使用，特别适用于不同物(wù)種如人或豬來源的郎格罕氏島（胰島）分離。

适用于溫和和有效分離各種來源的細胞。比如，分離人和齧齒類動物(wù)肝細胞，軟骨細胞，神經和内皮細胞，成纖維細胞，脂肪細胞，幹細胞和齧齒類動物(wù)成骨細胞。

适用于廣譜的細胞類型分離，特别是成纖維細胞、人和齧齒類動物(wù)肝細胞、青蛙卵母細胞和上(shàng)皮細胞。

适用于溫和和有效分離各種來源的細胞。比如，分離人和齧齒類動物(wù)肝細胞，軟骨細胞，神經和内皮細胞，成纖維細胞，脂肪細胞，幹細胞和齧齒類動物(wù)成骨細胞。

适用于廣泛來源組織的消化用途比如齧齒類動物(wù)的郎格罕氏島（胰島）分離，人心肌細胞，腫瘤細胞，肌肉細胞，成骨細胞 和豬肝髒細胞。

基本描述

粗制酶，含與膠原酶NB 4 标準級别相(xiàng)同的酶活性，不同之處在于根據歐洲藥典EP規定的無菌條件(jiàn)下(xià)生(shēng)産。含膠原酶Class I和Class II型，平衡的蛋白(bái)酶副活性。無菌級别。

同義名

Collagenase NB 5 Sterile Grade from Clostridium histolyticum; Clostridiopeptidase A;

EC NO.

EC 3.4.24.3

CAS NO.

9001-12-1

分子量

Mr ca. 70 000 - 120 000 (collagenases)

活力

PZ activity (Wünsch): ≥ 0.10 U/mg

單位定義

1 U according to Wünsch (2) catalyzes the hydrolysis of 1 µmole 4-phenylazobenzyloxycarbonyl-L-prolyl-L-leucylglycyl-L-prolyl-D-arginine per minute at 25 °C, pH 7.1.

微生(shēng)物(wù)水(shuǐ)平

Sterility, absence of Clostridia, Sterile according to Ph. Eur.

應用

适用于溫和和有效分離各種來源的細胞。比如，分離人和齧齒類動物(wù)肝細胞，軟骨細胞，神經和内皮細胞，成纖維細胞，脂肪細胞，幹細胞和齧齒類動物(wù)成骨細胞。

Collagenase NB 5 Sterile Grade is applicable to tissue dissociation such as isolation of human and rodent hepatocytes, chondrocytes, neuronal and endothelial cells, fibroblasts, cells from adipose tissue (e.g. ADSCs), stem cells and rodent osteoblasts.

品牌

名稱

貨号

規格

SERVA

Collagenase NB 5 Sterile Grade膠原酶NB 5（無菌級别）

17459.03

1g

問：膠原酶NB（Collagenase NB）和中性蛋白(bái)酶NB（Neutral Protease NB）的來源是什麽？

答：SERVA公司所有膠原酶NB和中性蛋白(bái)酶NB産品都來源自(zì)溶組織梭菌（Clostridium histolyticum），其是一(yī)種厭(yàn)氧、革蘭氏陽性菌，天然代謝産生(shēng)膠原酶和中性蛋白(bái)酶。

問：為(wèi)什麽膠原酶NB1和中性蛋白(bái)酶NB根據活力值來包裝，而所有其他膠原酶NB産品按照(zhào)質量來包裝？

答：膠原酶NB1和中性蛋白(bái)酶NB特别适合用來分離人胰腺來源的郎格罕氏島（胰島），這些酶的包裝大小(xiǎo)特别設計用于消化一(yī)個(gè)人胰腺。而其他膠原酶NB産品适合各種應用所以很難确定特定包裝大小(xiǎo)。

問：如何保存膠原酶NB和中性蛋白(bái)酶NB？

答：SERVA公司膠原酶NB和中性蛋白(bái)酶NB産品以凍幹粉形式提供，應置于2-8℃幹燥保存（除非COA上(shàng)特别說明）。在此條件(jiàn)下(xià)，産品在COA上(shàng)注明的有效日期前都是穩定的。避免重複的開(kāi)/關瓶子。

問：是否應該重溶膠原酶NB和分裝儲存液或每次按需稱取凍幹粉産品？

答：SERVA公司推薦制備儲存液，通(tōng)過将膠原酶NB溶解在适當體積的緩沖液，如HBSS，PBS，Tris或Ringer溶液中。重溶儲存液需過濾除菌（如果産品本身非無菌），分裝，凍存在-20℃。内部穩定性測試顯示如此條件(jiàn)下(xià)能(néng)保存1年(nián)，避免重複凍融。

如果凍幹粉産品的瓶子開(kāi)關數次，會(huì)使得粉末酶接觸空氣濕氣，可能(néng)引起酶活性降低(dī)。

問：是否可以過濾膠原酶NB和中性蛋白(bái)酶NB溶液？

答：是的，這些溶液都能(néng)經0.22µm濾膜除菌。建議使用低(dī)蛋白(bái)結合特性的濾器(qì)（濾膜），比如醋酸纖維素膜，PVDF或PES。

問：加酶到(dào)細胞之前如何保存膠原酶溶液？

答：膠原酶NB和中性蛋白(bái)酶NB溶液需要持續性保存在冰上(shàng)直至使用，因保存在更高(gāo)溫度時酶活力降低(dī)很明顯。總而言之，盡快使用酶溶液。

問：膠原酶NB和中性蛋白(bái)酶的最佳工(gōng)作溫度和最佳pH？

答：膠原酶NB的最佳工(gōng)作溫度37℃，最佳pH=7.4；中性蛋白(bái)酶的最佳溫度37℃，中性pH皆可；

問：是否能(néng)提供關于細胞分離應用的操作步驟？

答：SERVA膠原酶NB應用範圍非常廣，且使用實驗室非常多(duō)。SERVA提供應用注意事(shì)項和關于各種組織來源的細胞分離所用的膠原酶濃度和消化時間的步驟信息。見(jiàn)官網：Application details for tissue dissociation。

問：哪種緩沖液應用于細胞分離？

答：不推薦使用特别的緩沖液，因已知幾種緩沖液，包括HBSS，PBS和Tris都适用于膠原酶的細胞分離。膠原酶依賴Ca²⁺，因此推薦緩沖液含≥2mM Ca²⁺。EDTA會(huì)抑制膠原酶活性，因此緩沖液中必須完全不含鈣離子螯合劑比如EDTA。

問：如何終止酶的消化反應？

答：通(tōng)過降低(dī)溫度、添加人或胎牛血清，稀釋或清洗掉消化液都能(néng)終止消化反應。沒有特别推薦因幾種方法都有效，還(hái)是取決于組織和細胞類型和具體應用。

問：如何換算(suàn)膠原酶單位？

答：SERVA states collagenase activity in PZ units according to Wünsch: 1 PZ U/mg ~ 3.9 FALGPA U/mg，1 PZ U/mg ~ 1000 Mandl or CDU/mg，1 PZ U/mg ~ 10 HP U/mg

更多(duō)産品問題請自(zì)行登錄SERVA官網或來電(diàn)索取，021-54736159，QQ：2971634497。