Dispase II 分散酶II（中性蛋白(bái)酶）

産品信息

【提示】：點擊此處，見(jiàn)Roche Dispase II（中性蛋白(bái)酶）産品專題。

【提示】：點擊此處，見(jiàn)我司MKbio整理的組織消化（各消化酶）産品專題。

産品描述

中性蛋白(bái)酶（Neutral protease），商業(yè)名稱Dispase II，也稱分散酶II，普遍用于不同組織和器(qì)官中的細胞分離。Dispase II是一(yī)種非特異性金屬蛋白(bái)酶，能(néng)快速有效且溫和的破壞組織細胞外基質釋放(fàng)單細胞培養物(wù)（原代細胞培養物(wù)）或收集已培養的細胞将其轉移到(dào)新的培養基質上(shàng)（傳代培養）。另外，還(hái)能(néng)預防懸浮細胞培養過程中發生(shēng)的成團現象。Dispase II極其穩定，不會(huì)受溫度、pH和血清内容物(wù)的幹擾；通(tōng)過螯合劑或稀釋很容易失活；酶活溫和，對細胞損傷小(xiǎo)，可良好維持細胞膜完整性。

本品來源于多(duō)粘芽孢杆菌（Bacillus polymyxa），無支原體或其他動物(wù)病毒污染。以非無菌的凍幹粉形式提供，比活力≥0.8 U/mg蛋白(bái)，使用前需進行除菌。常用工(gōng)作濃度範圍為(wèi)0.6-2.4 U/ml。

産品特性

1）  EC NO：3.4.24.4

2）  同義名：Neutral protease中性蛋白(bái)酶

3）  比活力：≥0.8 U/mg protein (37℃, casein as substrate, pH 7.5)

4）  酶活力單位定義：在37℃，pH 7.5的反應條件(jiàn)下(xià)，1min内釋放(fàng)福林酚陽性反應氨基酸和多(duō)肽量相(xiàng)當于1 μmol (181 μg)酪氨酸所需的酶量即為(wèi)一(yī)個(gè)活力單位。

5）  最佳pH：6.0 - 8.5

6）  激活劑：最佳Ca2+為(wèi)2mM，該酶已含足量Ca2+确保最佳酶活力。

7）  抑制劑： EDTA, EGTA, Hg2+,以及其他重金屬。該酶活性不受血清幹擾。

保存與運輸方法

保存：2-8℃幹燥保存，至少1年(nián)有效。

運輸：冰袋運輸。

使用方法

一(yī)、儲存液和工(gōng)作液制備

1）儲存液制備：用Hepe緩沖鹽溶液（50 mM Hepes/KOH pH7.4, 150 mM NaCl）溶解Dispase II凍幹粉，配制成10mg/ml的儲存液，用0.22µM濾膜過濾除菌。本儲存液置于2-8℃，2周穩定；根據單次用量分裝凍存，高(gāo)達2個(gè)月(yuè)穩定，避免反複凍融。

2）工(gōng)作液制備：使用時用合适的細胞培養液将儲存液稀釋到(dào)工(gōng)作液濃度即可，常用工(gōng)作濃度為(wèi)0.6-2.4 U/ml。不推薦使用>2.4 U/ml的工(gōng)作濃度。具體使用濃度請根據自(zì)身實驗體系或參考文獻來調整。

二、組織分離

1）用無菌手術(shù)刀或剪刀将組織切成3-4mm小(xiǎo)片，之後用無菌PBS緩沖液清洗組織片幾次；

2）用Dispase II工(gōng)作液（0.6-2.4 U/ml）浸沒并37℃孵育進行組織解離；

3）置于水(shuǐ)平搖床上(shàng)，低(dī)速轉動，37℃孵育直至組織完全解離；【注意】：第一(yī)次使用Dispase II，通(tōng)過細胞計數來确定總反應時間。對于堅硬緻密組織需要1h的孵育時間，不過孵育時間幾小(xiǎo)時也不會(huì)有副作用。

4）若有需要，将消化産物(wù)用無菌不鏽鋼網過篩，從(cóng)而分離解散細胞和殘留組織，或當更大片段組織靜(jìng)置到(dào)管底，輕輕倒出上(shàng)層細胞。若需要進一(yī)步解離，則加入新鮮的Dispase II工(gōng)作液到(dào)殘留組織。

5）低(dī)速離心收集細胞，吸掉酶工(gōng)作液；

6）用适當的細胞培養液重懸細胞，置于正常預優化條件(jiàn)下(xià)培養。

三、細胞亞培養

1）用37℃預熱的Dispase II工(gōng)作液完全覆蓋細胞，置于37℃孵育5min；

2）吸掉溶液，于37℃再孵育10min；

3）顯微鏡觀察以确定消化情況，若有需要，可再孵育15min；

4）用細胞培養液重懸細胞，低(dī)速離心并用培養基清洗細胞幾次；

5）用新鮮細胞培養液重懸細胞；

6）按照(zhào)常規方法進行分盤傳代。

注意事(shì)項

1）Dispase是Godo Shusei Co., Ltd.的注冊商标。

2）為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

 — — Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海夢澤生物科技有限公司是一(yī)家涉足于生(shēng)命科學和生(shēng)物(wù)技(jì)術(shù)領域研究的試劑、儀器(qì)和實驗室消耗品與實驗服務工(gōng)作，主要從(cóng)事(shì)細胞生(shēng)物(wù)學、植物(wù)學、分子生(shēng)物(wù)學、免疫學、生(shēng)物(wù)化學、蛋白(bái)組學。生(shēng)物(wù)制藥與診斷試劑研發生(shēng)産等領域。 本公司秉承“以人為(wèi)本，以誠為(wèi)信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為(wèi)廣大客戶提供優質産品。