組織消化（Tissue Dissociation）專題 — —原代細胞/腫瘤細胞制備
搜索關鍵詞：
組織消化 Tissue dissociation；原代細胞；腫瘤細胞；細胞外基質；消化酶；膠原酶；中性蛋白(bái)酶；透明質酸酶；木(mù)瓜蛋白(bái)酶；DNase I；胰酶；胰酶抑制劑；
基本描述：
細胞原代培養具有廣泛的生(shēng)理意義，不僅可為(wèi)研究生(shēng)物(wù)體細胞的生(shēng)長(cháng)、代謝、繁殖提供有力的手段，還(hái)可服務于臨床實踐，用于藥物(wù)篩選等前期研究。所謂原代培養就(jiù)是将動物(wù)機(jī)體的各種組織，使用各種酶（比如胰蛋白(bái)酶、膠原酶）、螯合劑（如EDTA）或機(jī)械方法處理，分散成單細胞，并置于合适的培養基中培養，使細胞得以生(shēng)存、生(shēng)長(cháng)和繁殖，并保持原有的基本性質的過程。通(tōng)常将第一(yī)代至第十代以内的細胞培養過程稱為(wèi)原代培養。
原代培養最關鍵的一(yī)步便是獲得需要的原代細胞，并維持其最佳的細胞活力，以提高(gāo)成功培養和後期研究的幾率。原代細胞制備最常用的方法即是酶解法，根據組織類型和對應的組織構造，常用以下(xià)一(yī)種或者多(duō)種酶組合的方法來達到(dào)水(shuǐ)解目的。
1. 膠原酶 Collagenase
作為(wèi)一(yī)種蛋白(bái)水(shuǐ)解酶，常用來消化細胞外基質蛋白(bái)。作為(wèi)一(yī)種肽鏈内切酶，膠原酶特異性識别Pro-X-Gly-Pro序列（高(gāo)頻出現在膠原collagen，很少在其他蛋白(bái)中發現）并切割氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之間的肽鍵。不同于其他蛋白(bái)酶，膠原酶是唯一(yī)一(yī)種可識别并降解具三股超螺旋結構的天然膠原纖維，這種膠原纖維廣泛存在結締組織。
我司（MKbio，懋康生(shēng)物(wù)）提供的膠原酶來源于溶組織梭菌（Clostridium histolyticum），是一(yī)種酶粗提物(wù)，不僅含有梭菌蛋白(bái)酶A（Clostridiopeptidase A），能(néng)夠降解天然膠原和網狀纖維；還(hái)含有其他的一(yī)些蛋白(bái)酶、多(duō)糖酶、脂酶等，分别用以水(shuǐ)解存在結蹄組織和上(shàng)皮組織細胞外基質内的其他蛋白(bái)、多(duō)糖和脂質等。目前商業(yè)化的膠原酶因所含組分的差異，并結合科研團體的科研成果，應用上(shàng)分類見(jiàn)下(xià)：
|
膠原酶類型 |
組分特征和應用 |
|
I型膠原酶（Type 1） |
相(xiàng)對均量的多(duō)種酶活（包括膠原酶、酪蛋白(bái)酶、梭菌蛋白(bái)酶、胰蛋白(bái)酶活性）；通(tōng)常用作上(shàng)皮細胞、肝、肺、脂肪和腎上(shàng)腺組織的細胞制備。 |
|
II型膠原酶（Type 2） |
含更高(gāo)的梭菌蛋白(bái)酶活性；通(tōng)常用作心髒、骨、肌肉、胸腺和軟骨等組織的細胞制備。 |
|
III型膠原酶（Type 3） |
含較低(dī)的蛋白(bái)水(shuǐ)解活性；常用于乳腺細胞的制備； |
|
IV型膠原酶（Type 4） |
含較低(dī)的胰酶活性；通(tōng)常用于胰島制備，和維持受體完整性比較重要的其他研究。也可用于髓系細胞制備。 |
|
V型膠原酶（Type 5） |
部分純化型，含更高(gāo)的膠原酶和酪蛋白(bái)活性，更低(dī)胰酶水(shuǐ)平以降低(dī)對膜蛋白(bái)和受體造成損傷。适用于胰島制備。 |
産品訂購信息：
|
貨号 |
産品名稱 |
規格 |
價格（元） |
貨期 |
|
MX1001-100MG |
Collagenase I 膠原酶I型（Type 1） |
100mg |
280 |
現貨 |
|
MX1001-500MG |
Collagenase I 膠原酶I型（Type 1） |
5×100mg |
1260 |
現貨 |
|
MX1001-1000MG |
Collagenase I 膠原酶I型（Type 1） |
10×100mg |
2200 |
現貨 |
|
MX1002-100MG |
Collagenase I 膠原酶I型（Type 2） |
100mg |
280 |
現貨 |
|
MX1002-500MG |
Collagenase I 膠原酶I型（Type 2） |
5×100mg |
1260 |
現貨 |
|
MX1002-1000MG |
Collagenase I 膠原酶I型（Type 2） |
10×100mg |
2200 |
現貨 |
|
MX1003-100MG |
Collagenase III 膠原酶III型（Type 3） |
100mg |
740 |
現貨 |
|
MX1003-1000MG |
Collagenase III 膠原酶III型（Type 3） |
1g |
3800 |
現貨 |
|
MX1004-100MG |
Collagenase IV 膠原酶IV型（Type 4） |
100mg |
280 |
現貨 |
|
MX1004-500MG |
Collagenase IV 膠原酶IV型（Type 4） |
5×100mg |
1260 |
現貨 |
|
MX1004-1000MG |
Collagenase IV 膠原酶IV型（Type 4） |
10×100mg |
2200 |
現貨 |
|
MX1005-100MG |
Collagenase V 膠原酶V型（Type 5） |
100mg |
740 |
現貨 |
|
MX1005-1000MG |
Collagenase V 膠原酶V型（Type 5） |
1g |
3800 |
現貨 |
2. 中性蛋白(bái)酶Dispase II
中性蛋白(bái)酶（Neutral protease），商業(yè)名稱dispase II，也稱分散酶II。來源于Bacillus polymyxa，無支原體或其他動物(wù)病毒污染。一(yī)種非特異性金屬蛋白(bái)酶，具比較溫和的蛋白(bái)水(shuǐ)解酶活性，對細胞損傷小(xiǎo)且可維持細胞膜完整性，因此非常适合用于分離原代和繼代細胞培養。研究顯示Dispase II更能(néng)有效消化成纖維樣細胞，相(xiàng)比較于上(shàng)皮樣細胞。Dispase II還(hái)可用于消除懸浮細胞培養過程中發生(shēng)的細胞聚集。
産品訂購信息：
|
貨号 |
産品名稱 |
規格 |
價格（元） |
貨期 |
|
MX1006-100MG |
Dispase II 分散酶II（中性蛋白(bái)酶） |
100mg |
550 |
現貨 |
|
MX1006-1000MG |
Dispase II 分散酶II（中性蛋白(bái)酶） |
1g |
2150 |
現貨 |
|
04942078001 |
Dispase II 分散酶II（中性蛋白(bái)酶） |
1g |
2250 |
Roche原裝，現貨 |
3. 胰蛋白(bái)酶Trypsin
胰蛋白(bái)酶（胰酶，Trypsin），來源于胰腺的一(yī)種絲氨酸蛋白(bái)酶，由223個(gè)氨基酸殘基組成的單鏈多(duō)肽，底物(wù)特異性是帶正電(diàn)荷的賴氨酸和精氨酸側鏈。胰酶主要切割賴氨酸和精氨酸羧基端，當兩者之一(yī)緊随為(wèi)脯氨酸的情況除外。另外，當切割位點任一(yī)邊緊鄰酸性殘基，胰酶水(shuǐ)解速率也會(huì)減緩。
胰蛋白(bái)酶（胰酶，Trypsin），以無活性的胰蛋白(bái)酶原（Trypsinogen）形式分泌于胰腺中，通(tōng)過切割其末端六肽而得到(dào)活化，産生(shēng)天然單鏈形式的β-胰酶（β-Trypsin），随後進行有限的自(zì)發裂解産生(shēng)具水(shuǐ)解活性的α-Trypsin（由二硫鍵共價連接的二條肽鏈組成）。胰酶水(shuǐ)解活性可被多(duō)種化合物(wù)所抑制，有1）來源于胰腺、大豆、青豆、蛋清的天然胰蛋白(bái)酶抑制劑；2）銀(yín)離子；3）有機(jī)磷化合物(wù)，如氟磷酸異丙酯DFP；4）特定蛋白(bái)酶抑制劑，如AEBSF、抗蛋白(bái)酶、抑肽酶、PMSF、TLCK等；
胰蛋白(bái)酶（胰酶，Trypsin）的應用如下(xià)：
1）組織消化，需要配合其他蛋白(bái)酶如膠原酶和彈性蛋白(bái)酶一(yī)起使用；2）胰酶消化以收集細胞；3）線粒體分離；4）體外蛋白(bái)研究；5）從(cóng)塑料或者玻璃培養表面消化以去除單細胞層；6）多(duō)種血細胞凝集過程；7）流式DNA分析的樣品制備；8）胰酶消化肽圖譜；9）指紋和測序研究；10）環境監測；11）降低(dī)組織培養的細胞密度；12）細胞亞培養；13）融合蛋白(bái)切割；14）純化糖蛋白(bái)内消化得到(dào)糖肽。
産品訂購信息：
|
貨号 |
産品名稱 |
規格 |
價格（元） |
貨期 |
|
MX2002-25G |
Trypsin 1:250 (Porcine) 豬源胰蛋白(bái)酶1:250（粉末） |
25g |
180 |
現貨 |
|
MX2002-100G |
Trypsin 1:250 (Porcine) 豬源胰蛋白(bái)酶1:250（粉末） |
100g |
540 |
現貨 |
|
MX2003-100ML |
Trypsin (0.25%), Phenol Red 胰酶溶液（0.25%），含酚紅(hóng) |
100ml |
120 |
現貨 |
|
MX2004-100ML |
Trypsin-EDTA (0.25%), Phenol Red 胰酶-EDTA溶液（0.25%），含酚紅(hóng) |
100ml |
130 |
現貨 |
|
另，特别提供TPCK處理胰酶（TPCK可滅活胰酶混有的胰凝乳蛋白(bái)酶chymotryptic活性，得到(dào)更純和更高(gāo)特異性的胰酶）。我司提供兩種級别的TPCK-胰酶，分别達到(dào)組織培養和蛋白(bái)測序級。 |
||||
|
MX2005-100MG |
Trypsin, TPCK Treated 胰蛋白(bái)酶（TPCK處理）（組織培養級） |
100mg |
469 |
現貨 |
|
MX2006-100MG |
Trypsin, TPCK Treated 胰蛋白(bái)酶（TPCK處理）（蛋白(bái)測序級） |
100mg |
499 |
現貨 |
|
MX2006-500MG |
500mg |
1499 |
現貨 |
|
|
Worthington LS02120 |
Trypsin, Modified, Sequencing Grade（TPCK處理） |
4x25 ug |
299 |
原裝進口，2周 |
|
Worthington LS02115 |
Trypsin, Purified, Sequencing Grade II（TPCK處理） |
4x25 ug |
1175 |
原裝進口，2周 |
4. Elastase 彈性蛋白(bái)酶
彈性蛋白(bái)酶（Elastase），是另一(yī)種胰腺來源的絲氨酸蛋白(bái)酶，特異性識别并切割僅次于中性氨基酸的肽鍵。在所有蛋白(bái)酶中彈性蛋白(bái)酶非常獨特，因其能(néng)水(shuǐ)解天然彈力素。在血液和細菌内都有發現彈性蛋白(bái)酶。研究發現，彈性蛋白(bái)酶很适合用來消化肺髒以分離肺泡II型細胞。
産品訂購信息：
|
貨号 |
産品名稱 |
規格 |
價格（元） |
貨期 |
|
MX1010-25MG |
Elastase, from Porcine Pancreas 彈性蛋白(bái)酶（豬胰腺） |
25mg |
560 |
原裝進口，2周 |
5. Hyaluronidase透明質酸酶
透明質酸酶（Hyaluronidase）是一(yī)類能(néng)夠降低(dī)體内透明質酸活性的酶的總稱，一(yī)種糖蛋白(bái)，能(néng)随機(jī)裂解透明質酸，軟骨素和硫酸軟骨素中的β-N-乙酰己糖胺-[1→4]糖苷鍵。常與粗制蛋白(bái)酶，如膠原酶Collagenase，聯合使用于組織中分離活細胞。
産品訂購信息：
|
貨号 |
産品名稱 |
規格 |
價格（元） |
貨期 |
|
MX1007-100MG |
Hyaluronidase 透明質酸酶 |
100mg |
145 |
現貨 |
|
MX1007-1000MG |
Hyaluronidase 透明質酸酶 |
1g |
925 |
現貨 |
6. Papain 木(mù)瓜蛋白(bái)酶
木(mù)瓜蛋白(bái)酶Papain，一(yī)種半胱氨酸蛋白(bái)酶，具有廣泛且特異的切割活性。相(xiàng)比較于胰腺蛋白(bái)酶如胰酶，彈性蛋白(bái)酶，能(néng)降解大多(duō)數的蛋白(bái)底物(wù)。常用來分離組織内的神經元材質。三陰乳腺癌研究常使用木(mù)瓜蛋白(bái)酶分離Fab片段加速PET掃描，以改善疾病治療。
木(mù)瓜蛋白(bái)酶的應用如下(xià)：1）比其他蛋白(bái)酶更溫和的細胞分離（比如皮層神經元，視網膜，和平滑肌）；2）蛋白(bái)結構研究，多(duō)肽圖譜；3）紅(hóng)細胞表面修飾用于抗體篩選或鑒定；4）對IgG和IgM抗體處理以制備Fab；5）嵌入膜蛋白(bái)溶解；6）處理純化的蛋白(bái)聚糖以生(shēng)産糖肽；7）酶法傷口清創。
産品訂購信息：
|
貨号 |
産品名稱 |
規格 |
價格（元） |
貨期 |
|
MX1008-25G |
Papain, BC Grade 木(mù)瓜蛋白(bái)酶（試劑級） |
25g |
115 |
現貨 |
|
MX1008-100G |
Papain, BC Grade 木(mù)瓜蛋白(bái)酶（試劑級） |
100g |
325 |
現貨 |
7. DNase I 脫氧核糖核酸酶I
脫氧核糖核酸酶I（Deoxyribonuclease I，DNase I）常用在酶法細胞分離實驗過程中，以降解消化體系内殘留的核酸從(cóng)而增加粘度和活力。DNaseI不會(huì)破壞細胞完整性。
産品訂購信息：
|
貨号 |
産品名稱 |
規格 |
價格（元） |
貨期 |
|
MF0401-15KU |
Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas 脫氧核糖核酸酶I，來源于牛胰腺 |
15KU |
380 |
原裝進口，2周 |
8. Trypsin Inhibitor 胰酶抑制劑
胰酶抑制劑 Trypsin inhibitor，有多(duō)種來源。
本公司（MKbio）提供的為(wèi)大豆源的胰酶抑制劑，能(néng)夠失活胰酶活性，因此有時用于一(yī)些特定的細胞分離過程。
産品訂購信息：
|
貨号 |
産品名稱 |
規格 |
價格（元） |
貨期 |
|
MX1009-1G |
Trypsin Inhibitor, Soybean 大豆胰酶抑制劑 |
1g |
1659 |
現貨 |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上(shàng)海懋康生(shēng)物(wù)科技(jì)有限公司是一(yī)家涉足于生(shēng)命科學和生(shēng)物(wù)技(jì)術(shù)領域研究的試劑、儀器(qì)和實驗室消耗品與實驗服務工(gōng)作，主要從(cóng)事(shì)細胞生(shēng)物(wù)學、植物(wù)學、分子生(shēng)物(wù)學、免疫學、生(shēng)物(wù)化學、蛋白(bái)組學。生(shēng)物(wù)制藥與診斷試劑研發生(shēng)産等領域。 本公司秉承“以人為(wèi)本，以誠為(wèi)信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為(wèi)廣大客戶提供優質産品。
