Fluo-4, AM, Cell Permeant 鈣離子熒光(guāng)探針，超級純

— — Ca²⁺綠色熒光(guāng)探針Fluo-3的升級版本

【務必注意】：初次使用離子探針的用戶，強烈建議配合：Pluronic F-127, Cell Culture Tested 細胞培養級（MS4301-1G）一(yī)起使用，以提高(gāo)探針的水(shuǐ)溶性和胞内加載性。 

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Fluo-4 AM, Cell Permeant 鈣離子熒光(guāng)探針，超級純；Fluo-4,Acetoxymethyl Ester; 可見(jiàn)光(guāng)激發波長(cháng) Ca ²⁺熒光(guāng)探針；Fluo-3；Fluo-8, AM；Rhod-2, AM；CAS NO：273221-67-3；

Fluo-4是可見(jiàn)光(guāng)激發波長(cháng)Ca2+熒光(guāng)探針Fluo-3的改良版本，通(tōng)過将Fluo-3結構上(shàng)的氯離子（Cl-）替換為(wèi)電(diàn)子吸引力更強的氟離子（F-），使得最大激發波長(cháng)往短波長(cháng)偏移10nm左右。正由于這個(gè)波長(cháng)更接近氩激光(guāng)器(qì)的波長(cháng)，則當使用氩激光(guāng)器(qì)來激發探針Fluo-4，能(néng)夠得到(dào)更強的熒光(guāng)強度，比Fluo-3強一(yī)倍。另外，Fluo-4的Ca2+親和力幾乎接近Fluo-3（Fluo-3: Kd=0.4μM、Fluo-4: Kd=0.36μM），因此，使用上(shàng)幾乎同Fluo-3。Ca2+結合後的最大激發波長(cháng)為(wèi)494nm，最大發射波長(cháng)為(wèi)516nm。可通(tōng)過激光(guāng)共聚焦顯微鏡或流式細胞儀來檢測胞内鈣離子水(shuǐ)平的變化。

Fluo-4, AM是Fluo-4的一(yī)種乙酰甲酯衍生(shēng)物(wù)，具有細胞膜滲透性，隻需簡單培養，即可輕易進入細胞。一(yī)旦進入細胞内，即被其内酯酶剪切生(shēng)成不具膜滲透性的Fluo-4，從(cóng)而滞留在胞内以發揮相(xiàng)應生(shēng)理功能(néng)。

可見(jiàn)光(guāng)激發Ca2+熒光(guāng)探針的優勢：

與紫外光(guāng)激發的熒光(guāng)探針相(xiàng)比，如Fura-2和Indo-1，可見(jiàn)光(guāng)激發Ca2+探針具有以下(xià)特點：

1）适用于大多(duō)數的激光(guāng)共聚焦測鈣系統，包括共聚焦激發掃描顯微鏡以及流式細胞儀等。

2）具有更強的染料吸收性能(néng)，使得更低(dī)濃度的探針即可成功檢測Ca2+變化，從(cóng)而降低(dī)對活細胞的光(guāng)毒性。

3）Ca2+依賴性熒光(guāng)強度增強，對Ca2+變化水(shuǐ)平檢測敏感度更高(gāo)。

4）降低(dī)樣品自(zì)熒光(guāng)以及光(guāng)散射的幹擾。

5）兼容光(guāng)激活探針以及UV-激發試劑，因此更方便于多(duō)參數檢測。

6）無光(guāng)譜偏移。

Fluo-4, AM相(xiàng)比較于Fluo-3的優勢：

1）  激發和發射波長(cháng)往短波長(cháng)偏移10nm，更接近氩激光(guāng)器(qì)的波長(cháng)，。因此，當使用488nm進行熒光(guāng)激發，得到(dào)更強的熒光(guāng)信号，比Fluo-3強一(yī)倍。

2）  50μg小(xiǎo)包裝供應，使用方便，且能(néng)很好保證産品的穩定性。

Fluo-4, AM的應用圖片：

Fig. 1, U2OS cells were seeded overnight at 40,000 cells per 100 µL per well in a 96-well black wall/clear bottom costar plate. The growth medium was removed, and the cells were incubated with 100 µl of 4 µMFluo-3, AMorFluo-4, AMin HHBS at 37 °C, 5% CO2incubator for 1 hour. The cells were washed twice with 200 µl HHBS, then imaged with a fluorescence microscope using FITC channel.

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引用文獻

[1] Lin W, Xiong J, Jiang Y, Liu H, Bian J, Wang J, Shao Y, Ni B. Fibrillin-1 mutation contributes to Marfan syndrome by inhibiting Cav1.2-mediated cell proliferation in vascular smooth muscle cells. Channels (Austin). 2023 Dec;17(1):2192377. doi: 10.1080/19336950.2023.2192377. PMID: 36972239; PMCID: PMC10054150.

Determination of intracellular calcium concentration

Pluronic F-127 was dissolved in DMSO at 0.2 mg/mL. Fluo −4 AM was then dissolved in 20% pluronic F-127 solution to 5 mM Fluo-4 AM solution (MX4540, MKBio, Shanghai, China). 5 mM Fluo-4 AM was diluted with DMEM without phenol red to a final concentration of 5 μM. HASMCs were washed 3 times in PBS, incubated with 5 μM Fluo-4 AM for 30 min and washed 3 times in DMEM without phenol red. HASMCs were then stimulated with 100 nM Cav1.2 agonist. Videos were taken with a Thunder Imaging System (Leica Microsystems), and the fluorescence intensity was analyzed using imageJ.