JC-10（JC-1優越替代物(wù)）線粒體膜電(diàn)位熒光(guāng)探針

溫馨提示1）：見(jiàn)我司懋康生(shēng)物(wù)（MKBio）整理的線粒體熒光(guāng)探針産品專題。

溫馨提示2）：見(jiàn)我司懋康生(shēng)物(wù)（MKBio）整理的膜電(diàn)位檢測探針産品專題。

産品标簽

Rhodamine 123羅丹明123；JC-1；JC-10；CCCP；CAS：62669-70-9

訂購信息：進口品質，現貨供應。歡迎來電(diàn)咨詢，電(diàn)話：021-54736159，18121428569；QQ：3308240863，2971634497。

産品描述

JC-10是一(yī)種新型的用來監測線粒體膜電(diàn)位變化的熒光(guāng)探針，是JC-1的優越替代物(wù)。與JC-1相(xiàng)比，具有以下(xià)幾個(gè)重要優勢：1）溶解性得以改良——在水(shuǐ)溶液中形成沉澱可能(néng)性明顯降低(dī)；2）使用更方便——簡化步驟将手動操作時間最小(xiǎo)化；3）熒光(guāng)信号更高(gāo)——改良的信号與背景熒光(guāng)的信噪比；4）結果更穩定——優化探針以保證更連續性和穩定性結果。

JC-10是一(yī)種替換JC-1，用于檢測線粒體膜電(diàn)位△Ψm的理想熒光(guāng)探針。JC-10以電(diàn)勢依賴性的方式積聚在線粒體内，可以用來檢測細胞、組織或純化的線粒體膜電(diàn)位。正常線粒體内，JC-10聚集在線粒體基質中形成聚合物(wù)，聚合物(wù)發出強烈的紅(hóng)色熒光(guāng)（Ex=540 nm, Em=590 nm）；不健康的線粒體由于膜電(diàn)位的下(xià)降或喪失，JC-10隻能(néng)以單體的形式存在于胞漿中，産生(shēng)綠色熒光(guāng)（Ex=490 nm, Em=525 nm）。JC-10不僅可用于定性檢測，因顔色的變化可以非常直接的反映出線粒體膜電(diàn)位的變化。也可以用于定量檢測，因線粒體的去極化程度可以通(tōng)過紅(hóng)/綠熒光(guāng)強度的比例來衡量。觀察時，隻需使用常規的觀察紅(hóng)色熒光(guāng)和綠色熒光(guāng)的設置即可。

JC-10可用來檢測大量細胞類型如神經元和心肌細胞的線粒體膜電(diàn)位，也可用來研究重要的細胞生(shēng)理活動，比如ATP合成，活性氧（ROS）和凋亡發生(shēng)等。

本品為(wèi)溶于DMSO的JC-10儲存液，濃度2 mg/ml，隻需用合适的緩沖液稀釋到(dào)工(gōng)作濃度即可使用。

産品特性

1）化學名：5,6 -Dichloro-1,1′,3,3′-tetraethyl-imidacarbocyanine iodide; Enhanced JC-1;

2）分子式：C25H27Cl2IN4

3）分子量：583.34 g/mol

4）  純度：＞95%（HPLC）

5）  Ex/Em：單體形式（monomer form）：Ex=490 nm, Em=525 nm；聚合物(wù)形式（J-aggregate form）：Ex=540 nm, Em=590 nm；

保存與運輸方法

保存：-20℃避光(guāng)保存。第一(yī)次使用，建議将儲存液分裝成單次用量，避免反複凍融，約一(yī)年(nián)有效。

運輸：冰袋運輸。

注意事(shì)項

1. JC-10是光(guāng)敏感性的，所有染色步驟的操作過程中避免強光(guāng)接觸。

2. JC-10染色完成後，立即進行後續的結果分析非常必要；

3. 為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

使用方法

1. 染色工(gōng)作液制備

本品以JC-10（2mg/ml in DMSO，約3mM）儲存液形式提供，第一(yī)次使用請按照(zhào)單次用量分裝，避光(guāng)凍存，避免反複凍融。

JC-10（1×）工(gōng)作液制備：實驗前取一(yī)管JC-10儲存液置于室溫，使其充分融化，之後用HHBS（1×Hanks with 20 mM Hepes buffer, pH 7.0）或其他緩沖液（pH 7-8，含0.02% Pluronic®F-127）配制成10-30μM的1×工(gōng)作液，漩渦混勻待用。

【注意】：對于某些細胞系pH8的工(gōng)作液可能(néng)防止JC-10洩露。

2. JC-10染色步驟（熒光(guāng)酶标儀）

1） 用待測藥物(wù)處理細胞一(yī)段時間（比如，Jurkat細胞用喜樹堿camptothecin）處理4-6h）以誘導凋亡。對于空白(bái)孔（不含細胞的培養基）加入相(xiàng)應體積的藥物(wù)緩沖液。

2）按照(zhào)100μl/孔/96孔闆或25μl/孔/384孔闆的量加入JC-10工(gōng)作液到(dào)培養孔内。

3）将整個(gè)培養闆置于37℃，5% CO2孵育15-60min。

【注意】：合适的孵育時間取決于細胞類型和細胞濃度。每次試驗建議優化孵育時間。

4）用熒光(guāng)酶标儀監測Ex/Em = 500/525 nm（FITC通(tōng)道）和540/595 nm（TRITC通(tōng)道）的熒光(guāng)變化，計算(suàn)兩者熒光(guāng)信号比值，以判斷細胞健康程度。

【可選】：吸掉JC-10染色工(gōng)作液，按照(zhào)100μl/孔/96孔闆或25μl/孔/384孔闆的量加入HHBS緩沖液或其他生(shēng)理緩沖液，然後再進行熒光(guāng)信号分析。

3. JC-10染色步驟（熒光(guāng)顯微鏡或流式細胞儀）

1）用待測藥物(wù)處理細胞一(yī)段時間（比如，Jurkat細胞用喜樹堿camptothecin）處理4-6h）以誘導凋亡。對于空白(bái)孔（不含細胞的培養基）加入相(xiàng)應體積的藥物(wù)緩沖液。

2）離心去上(shàng)清，調整細胞密度為(wèi)1-5×105細胞/管。

3）用500µl JC-10染色工(gōng)作液重懸細胞。

4）室溫孵育或37℃，5%CO2孵育10-30 min，避光(guāng)。

【注意】：合适的孵育時間取決于細胞類型和細胞濃度。每次試驗建議優化孵育時間。

5）用熒光(guāng)顯微鏡分别觀察Ex/Em = 490/525 nm（FITC通(tōng)道）和540/595 nm（TRITC通(tōng)道）的熒光(guāng)變化；或者用流式細胞儀（FL1和FL2通(tōng)道進行檢測）。

【可選】：離心後吸掉JC-10染色工(gōng)作液，加入500µl HHBS緩沖液或其他合适緩沖液重懸細胞使其密度為(wèi)1-5×105細胞/管，然後再進行熒光(guāng)分析。