MTT 噻唑蘭

産品标簽

MTT 噻唑蘭，WST-1，WST-8，CCK；Cell Proliferation 細胞增殖；LDH 乳酸脫氫酶；CAS：298-93-1；

産品信息

産品描述

噻唑蘭（Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,簡稱MTT，CAS：298-93-1），也稱作溴化噻唑藍四氮唑，是一(yī)種黃色染料，已經廣泛替代傳統的台盼藍染色法或者放(fàng)射性同位素插入法，用來檢測細胞活力、細胞增殖以及毒性分析。MTT是一(yī)種可接受氫離子的化合物(wù)染料，帶正電(diàn)荷，具有細胞膜滲透性。活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能(néng)夠将外源進入的MTT還(hái)原成為(wèi)水(shuǐ)不溶性的深藍色MTT-甲臜結晶，而死細胞不具此功能(néng)。甲臜結晶不能(néng)穿透細胞膜，因此沉積在處于增殖且未受損傷的細胞内。甲臜結晶可用DMSO或者酸化的異丙醇溶解，酶标儀測定的570 nm吸光(guāng)度能(néng)反映甲臜的生(shēng)成量。而甲臜的生(shēng)成量與活細胞數目成正比，因此可用來評估細胞存活狀況。MTT也可用在免疫組化和免疫細胞化學研究，也可用于NAD水(shuǐ)平檢測。MTT經快速還(hái)原為(wèi)甲臜後，能(néng)夠螯合鎳，銅和钴離子。钴螯合物(wù)可參與細胞氧化系統。

産品特性

1）  CAS NO：298-93-1

2）  英文同義名：3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazolium Bromide;Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide;Thiazoyl blue tetrazolium bromide;

3）  中文同義名：溴化噻唑藍四氮唑；3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四氮唑噻唑藍；

4）  分子式：C18H16N5SBr

5）  分子量：414.3 g/mol

6）  外觀：淡黃色至橙色粉末

7）  純度：≥98%

8）  溶解性：溶于水(shuǐ)（5 mg/ml）

9）  化學結構圖：

保存與運輸方法

保存：4℃避光(guāng)保存，5年(nián)有效。

運輸：冰袋運輸。

注意事(shì)項

1）溶解甲臜結晶的有機(jī)溶劑具有毒性，使用時注意防護。

2）MTT有緻癌性應小(xiǎo)心操作；MTT溶液4℃保存不可超過1周，否則會(huì)發生(shēng)降解并導緻檢測結果錯(cuò)誤。

3）MTT法屬于半定量檢測，隻能(néng)用來檢測細胞相(xiàng)對數和相(xiàng)對活力，但不能(néng)測定細胞絕對數。用酶标儀檢測結果的時候，為(wèi)了保證實驗結果的線性，MTT吸光(guāng)度最好在0-0.7範圍内。

4）建議用平底的酶标闆來做MTT檢測，僅當要求細胞生(shēng)長(cháng)量比較高(gāo)的情況下(xià)首推組織培養級的培養闆。

5）為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

使用方法

細胞生(shēng)長(cháng)的培養條件(jiàn)會(huì)影響檢測結果，因此進行MTT檢測時需考慮這些條件(jiàn)，包括：培養時間，傳代次數以及生(shēng)長(cháng)培養基的成分等。一(yī)般情況，48-72h培養時間下(xià)，最初鋪闆的細胞密度可控制在5000-10,000/孔。

【注意】：最終檢測的培養液内含有酚紅(hóng)會(huì)嚴重影響檢測結果。推薦MTT檢測時細胞培養在無酚紅(hóng)環境下(xià)，也可以在進行MTT孵育的時候改用無酚紅(hóng)培養液。

A．儲存液配制

1）MTT儲存液

生(shēng)化研究中，常配制成5mg/ml的儲備液。MTT最好現配現用，可以稱取MTT 0.5g，溶于100 mL的磷酸緩沖液（PBS）或無酚紅(hóng)的培養基中，用0.22μm濾膜過濾除菌，4℃避光(guāng)短時間保存。建議小(xiǎo)劑量分裝放(fàng)到(dào)-20℃長(cháng)期保存，避免反複凍融，至少6個(gè)月(yuè)有效。

2）SDS-HCl溶液（MTT終止液）

取10ml0.01 M HCl加入1g SDS，颠倒混勻或者超聲使其完全溶解，此時即為(wèi)終止液。建議現配現用。

B．MTT細胞增殖檢測【以96孔闆為(wèi)例】

1）接種細胞：用含10%胎牛血清（FBS）的培養液配制成單個(gè)細胞懸液，調整細胞密度，以每孔5000-10, 000個(gè)細胞接種到(dào)96孔闆，每孔體積100µl，培養闆的邊緣孔用無菌PBS填充。設置空白(bái)對照(zhào)孔（不含有細胞）。

2）37℃，5% CO2，培養24-72h。

3）【可選】：對于貼壁細胞，去除舊(jiù)的培養液，更換100µl/孔新鮮的培養液（不含酚紅(hóng)）；對于懸浮細胞，離心96孔闆，去除盡可能(néng)多(duō)的上(shàng)清液。然後加入100µl/孔新鮮的培養液（不含酚紅(hóng)）重懸細胞；

4）每孔加入10µl MTT溶液（5 mg/ml），加樣時盡量勤換槍頭，控制加量誤差。

5）水(shuǐ)平搖床上(shàng)低(dī)速混勻1min後，放(fàng)入37℃培養箱孵育4h。【注意】：對于高(gāo)密度的細胞（>100,000 cells/孔）可縮短孵育時間至2h。

6）對于貼壁細胞，直接吸掉舊(jiù)的培養液，避免槍尖刮破單細胞層。對于懸浮細胞，離心收集細胞，去除培養液。

7）加入100µl/孔SDS-HCl溶液，用槍充分混勻後放(fàng)入37℃培養箱孵育4h。【注意】：更長(cháng)的孵育時間會(huì)降低(dī)檢測靈敏度。

8）孵育結束，放(fàng)置在酶标儀上(shàng)搖勻後，選擇570nm，測定吸光(guāng)度。記錄結果，比色以空白(bái)調零。

【注意】：對于細胞毒性檢測，以未經藥物(wù)處理細胞的OD值為(wèi)100%，然後計算(suàn)藥物(wù)處理細胞所占的比率（x），公式如下(xià)：OD（未經藥物(wù)處理細胞）/OD（藥物(wù)處理細胞）=100%/x。然後建立直方圖。

相(xiàng)關産品

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