5-bromo-2'-deoxyuridine (BrdU ) 5-溴-2’-脫氧尿苷

産品标簽

EdU 5-乙炔基-2’-脫氧尿苷；BrdU 5-溴-2’-脫氧尿苷；Alexa Fluor 488 azide；Anti-BrdU antibody（DSHB，G3G4）；Cell Proliferation 細胞增殖檢測；CAS NO: 59-14-3；

産品信息

産品描述

BrdU，英文全稱5-bromo-2'-deoxyuridine，中文全稱5-溴-2’-脫氧尿苷，是一(yī)種合成的胸苷溴化類似物(wù)，在S期可替代胸苷選擇性插入細胞DNA。BrdU通(tōng)常和廣泛用于測定DNA合成和标記分裂細胞，最後用來研究誘導細胞增殖的信号通(tōng)路(lù)和其他生(shēng)理過程。BrdU通(tōng)過體外細胞培養或體内注射的方式進行探針加載，然後用抗BrdU的抗體進行特異性檢測。

BrdU标記後，對組織或細胞進行固定和透化後，需要額外的DNA水(shuǐ)解步驟（有時也稱DNA變性），從(cóng)而允許抗BrdU的抗體能(néng)夠與插入DNA的BrdU結合。BrdU抗體能(néng)夠與其他細胞标記物(wù)如Ki67，雙皮質素（DCX）和NeuN聯合使用來鑒定增殖細胞和新分化神經元。

産品特性

1）CAS NO：59-14-3

2）化學名：5-Bromo-1-[(2R,4S,5R)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]pyrimidine-2,4-dione

3）英文同義名：5-Bromodeoxyuridine, 5-bromo-2'-deoxy-uridine,5-Bromouracil deoxyriboside,Broxuridine, 5-Bromo-1-(2-deoxy-β-D-ribofuranosyl)uracil, Br-dU, BUdR, 5-BrdU

4）中文同義名：5-溴去氧尿苷，5-溴脫氧尿苷，溴尿嘧啶苷，5-溴尿嘧啶-2’-脫氧核苷

5）分子式：C9H11BrN2O

6）分子量：307.10 g/mol

7）純度：≥99% (HPLC)

8）外觀：白(bái)色至類白(bái)色粉末

9）溶解性：溶于DMSO（20mg/ml），無水(shuǐ)乙醇（~25mg/ml），水(shuǐ)（10mg/ml）

10）化學結構：

保存與運輸方法

保存：-20°C幹燥保存，至少2年(nián)有效。

運輸：冰袋運輸。

使用方法

1. BrdU标記：體外标記細胞

制備BrdU儲存液（10mM）：稱取3mg BrdU（Mw：307.10）溶于1ml去離子水(shuǐ)，充分溶解即可。

用細胞培養基按照(zhào)1:1000的比例将儲存液稀釋到(dào)10μMBrdU染色液，并在無菌條件(jiàn)下(xià)用0.2μm濾膜對染色液進行過濾除菌。

吸掉細胞内培養基并更換無菌的10μMBrdU染色液，置于CO2培養箱37ºC孵育1-24h。【注意】：BrdU孵育時間取決于細胞分裂速度。原代細胞可能(néng)要高(gāo)達24h，但快速增值細胞系可能(néng)僅需1h。達到(dào)最佳信噪比的時間需要通(tōng)過優化條件(jiàn)來确定。

吸掉細胞内染色液，用PBS清洗2次，每次至少5s。

根據标準免疫細胞化學（ICC）操作流程進行細胞固定和透化。但是在開(kāi)始免疫染色前需參照(zhào)下(xià)述的DNA水(shuǐ)解步驟。

2. BrdU标記：BrdU體内标記

【注意】：BrdU體内标記方法比較多(duō)，常見(jiàn)的有腹腔注射法（Intraperitoneal injection）和口服法。以下(xià)為(wèi)腹腔注射法的步驟，其他方法可參考文獻或根據實驗室固有經驗操作。

用1×PBS溶解适量的BrdU配制成10mg/ml儲存液，過濾除菌，按照(zhào)單次用量分裝凍存後待用，避免反複凍融。

 對于小(xiǎo)鼠，通(tōng)用情況注射濃度為(wèi)100mg/kg。

BrdU标記完成後，根據實驗室已成的步驟處理動物(wù)。【注意】：BrdU插入快速分化組織比如小(xiǎo)腸，在注射後30min就(jiù)能(néng)檢測到(dào)。但大多(duō)數組織可能(néng)需要高(gāo)達24h才能(néng)檢測到(dào)。合适的處理時間和注射劑量需要根據組織類型來優化。

3. DNA水(shuǐ)解（DNA變性步驟）

3.1  細胞樣本

用1-2.5M HCl室溫孵育細胞10min-1h，實際的HCl濃度和孵育時間根據實驗來優化。如果使用更短的孵育時間，37°C孵育可能(néng)比室溫孵育效果更好

可選步驟：去除HCl，用0.1M硼酸鈉緩沖液，pH 8.5室溫中和30min。【注意】：0.1M硼酸鈉緩沖液（pH 8.5）配置方法：稱取3.8g硼酸鈉（Mw=381.4）加入100ml蒸餾水(shuǐ)，充分溶解後，用NaOH調整到(dào)所需pH。
用PBS清洗3次，每次不少于5s。

根據标準ICC操作流程繼續後續染色。

3.2 組織切片

【注意】：對于石蠟切片必須先做脫蠟處理再進行DNA水(shuǐ)解步驟。

用1-2 M HCl室溫孵育切片30min-1h，實際的HCl濃度和孵育時間根據實驗來優化。如果使用更短的孵育時間，37°C孵育可能(néng)比室溫孵育效果更好。

可選步驟：去除HCl，用0.1M硼酸鈉緩沖液（pH 8.5）室溫中和切片10min。【注意】：0.1M硼酸鈉緩沖液，pH 8.5配置方法：稱取3.8g硼酸鈉（Mw=381.4）加入100ml蒸餾水(shuǐ)，充分溶解後，用NaOH調整到(dào)所需pH。

用PBS清洗3次，每次不少于5s。

根據标準IHC操作流程繼續免疫染色步驟。

注意事(shì)項

1）BrdU是一(yī)種誘變劑，操作過程一(yī)定要注意防護，不要與皮膚直接接觸。另戴口罩避免粉塵吸入。

2）為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

相(xiàng)關内容（與anti-BrdU的共染色）

目的：BrdU常與其他抗體聯合使用以鑒定增殖和新分化神經元。常見(jiàn)以下(xià)3個(gè)指标：

Ki67：反映增殖的細胞标記物(wù)，細胞周期G1，S，G2和M期有Ki67表達，但靜(jìng)止期G0無Ki67表達。Ki67抗體能(néng)夠替代或與Brdu聯合使用來标記增殖神經元。

雙皮質素（Doublecortin，DCX）：微管相(xiàng)關的磷酸蛋白(bái)，由未成熟神經元表達。可與BrdU聯合使用鑒定未成熟的有絲分裂後神經元。

NeuN：成熟神經元标記物(wù)，能(néng)與BrdU聯合染色去鑒定新分化的神經元。

相(xiàng)關産品：

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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