Trypsin 1:250, Powder (Porcine) 豬源胰蛋白(bái)酶1:250（粉末）

産品标簽

Trypsin 1:250 胰酶；Collagenase NB 4 膠原酶NB4（标準級别）；Trypsin-EDTA (0.25%)；Dispase II中性蛋白(bái)酶；Roche；CAS：9001-12-1；

産品信息

産品描述

胰蛋白(bái)酶（胰酶，Trypsin），CAS：9002-07-7，來源于胰腺的一(yī)種絲氨酸蛋白(bái)酶，由223個(gè)氨基酸殘基組成的單鏈多(duō)肽，底物(wù)特異性是帶正電(diàn)荷的賴氨酸和精氨酸側鏈。胰酶主要切割賴氨酸和精氨酸羧基端，當兩者之一(yī)緊随為(wèi)脯氨酸的情況除外。另外，當切割位點任一(yī)邊緊鄰酸性殘基，胰酶水(shuǐ)解速率也會(huì)減緩。

胰蛋白(bái)酶（胰酶，Trypsin），以無活性的胰蛋白(bái)酶原（Trypsinogen）形式分泌于胰腺中，通(tōng)過切割其末端六肽而得到(dào)活化，産生(shēng)天然單鏈形式的β-胰酶（β-Trypsin），随後進行有限的自(zì)發裂解産生(shēng)具水(shuǐ)解活性的α-Trypsin（由二硫鍵共價連接的二條肽鏈組成）。胰酶水(shuǐ)解活性可被多(duō)種化合物(wù)所抑制，有1）來源于胰腺、大豆、青豆、蛋清的天然胰蛋白(bái)酶抑制劑；2）銀(yín)離子；3）有機(jī)磷化合物(wù)，如氟磷酸異丙酯DFP；4）特定蛋白(bái)酶抑制劑，如AEBSF、抗蛋白(bái)酶、抑肽酶、PMSF、TLCK等；

本品是來源于豬胰腺的胰蛋白(bái)酶凍幹粉，經γ射線處理滅活病毒，經過豬細小(xiǎo)病毒和支原體檢測。基于标準測定方法的酶活力為(wèi)250 units/mg，即1:250。廣泛用于細胞傳代，對貼壁細胞進行消化以制備單細胞懸液，常用的工(gōng)作濃度是0.025-0.5%（w/v）。也可聯合其他蛋白(bái)酶如膠原酶、彈性蛋白(bái)酶一(yī)起使用，以消化組織。

産品特性

1）  EC NO：3.4.21.4

2）  CAS NO：9002-07-7

3）  同義名：Trypsin, from Porcine Pancreas; Trypsin Powder, Porcine 1:250; Tryptase; Tryptar; Cocoonase; Parenzyme; Parenzymol;

4）  分子量：23.4 kDa

5）  螯合劑：無EDTA

6）  酚紅(hóng)指示劑：無酚紅(hóng)

7）  外觀：白(bái)色至類白(bái)色粉末

8）  溶解性：溶于水(shuǐ)，幾乎不溶于乙醇和甘油

9）  最佳工(gōng)作溫度：37°C

10）最佳工(gōng)作pH：7.0-9.0

11）酶活性：根據美國(guó)藥典專論規定的胰蛋白(bái)酶活性測定條件(jiàn)（25°C 10 min，pH 7.6），1 g胰蛋白(bái)酶能(néng)消化250 g酪蛋白(bái)底物(wù)。

保存與運輸方法

保存：2-8℃幹燥保存，3年(nián)有效。

運輸：冰袋運輸。

使用方法

1. 胰酶儲存液（2.5%，w/v）的配制

1.1 稱取2.5g胰酶粉末溶于100ml不含鈣鎂的平衡鹽緩沖液，如HBSS（Hank′s Balanced Salt Solution），并調整pH在7.4-7.6，此時得到(dào)的即2.5%胰酶儲存液，置于4℃短時間保存，3個(gè)月(yuè)相(xiàng)對穩定。建議分裝凍存，利于長(cháng)期保存。解凍後可能(néng)會(huì)出現少量沉澱，屬于正常現象，不會(huì)影響使用效力。

1.2 細胞的消化可以直接用胰酶溶液，但常使用胰酶-EDTA溶液，因為(wèi)EDTA是一(yī)種II價金屬離子螯合劑，能(néng)夠螯合鈣鎂離子，減少細胞間的粘附性，從(cóng)而增強胰酶活性。

【注①】：胰酶用于細胞傳代的工(gōng)作濃度範圍為(wèi)0.025%-0.5%，具體濃度的選擇主要受胰酶活性、孵育時間和細胞系類型幾個(gè)方面影響。若用過高(gāo)濃度消化過長(cháng)時間，會(huì)破壞細胞膜結構，進而殺死細胞。當對使用濃度把握不大，建議先使用低(dī)濃度消化，慢(màn)慢(màn)的摸索出合适的工(gōng)作濃度。

【注②】：胰酶-EDTA溶液的配制（僅作參考，根據需要的實際胰酶濃度來調整）

1. 
   

2. 2. 貼壁細胞消化（培養闆）

3. 2.1 吸掉培養闆内培養液，用不含Ca2+/Mg2+的緩沖液清洗單層貼壁細胞，直至清除殘餘血清，吸掉鹽溶液。

4. 2.2 向上(shàng)述貼壁細胞中加入适量胰酶溶液或者胰酶-EDTA溶液，完全覆蓋細胞即可。此時将細胞置于37℃培養箱孵育2min左右

5. 2.3 立即取出，傾斜培養闆，吸掉胰酶或者胰酶-EDTA溶液，輕拍培養闆，觀察細胞的消化狀态。若消化不夠，可放(fàng)回37℃培養箱短時孵育，直至細胞從(cóng)表面脫落。整個(gè)消化過程可通(tōng)過倒置顯微鏡來觀察。

6. 【注①】：消化時間跟細胞類型、細胞密度、培養液内血清濃度、胰酶活性、以及消化前細胞培養時間等因素有關。胰酶對細胞的損傷以及消化時間盡量保持在最低(dī)水(shuǐ)平】。

7. 2.4 加入含血清的适量培養液到(dào)消化好的細胞内，輕輕反複吹吸從(cóng)而将細胞從(cóng)培養闆底盡可能(néng)吹離，以及吹散細胞團，吹洗時盡量避免氣泡的産生(shēng)。

8. 【注①】：血清能(néng)抑制進一(yī)步的胰酶消化，保護細胞不被過度消化。當使用無血清培養液，建議此時加入等摩爾的大豆胰酶抑制劑（Soybean trypsin inhibitor）以起到(dào)相(xiàng)同效果。

9. 2.5 進行下(xià)一(yī)步操作【亞培養，或細胞計數】或細胞凍存。

10. 【注①】：操作時務必小(xiǎo)心謹慎，同時時刻注意避免交叉污染發生(shēng)的可能(néng)性。

11. 
    

注意事(shì)項

1）胰蛋白(bái)凍幹粉産品常遇到(dào)的活性定義及其轉換，

1 BAEE Unit：在25℃，pH 7.6的條件(jiàn)下(xià)，以BAEE為(wèi)底物(wù)，3.2 ml的反應體系中，A253吸光(guāng)值每分鍾會(huì)發生(shēng)0.001的變化即為(wèi)一(yī)個(gè)酶活單位。

1 TAME Unit：在25℃，pH 8.2，0.001M Ca2+條件(jiàn)下(xià)，每分鍾水(shuǐ)解1μmol p-toluenesulfonyl-L-arginine methyl ester（TAME）的用量。

1 USP Unit：在指定條件(jiàn)下(xià)，每分鍾引起吸光(guāng)值發生(shēng)0.003的變化的樣品活性。

1 TAME unit = 19.2 USP or NF units = 57.5 BAEE Unit

2）為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

相(xiàng)關産品

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