BL21系列感受态細胞常見(jiàn)問題
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Part 1、BL21/BL21（DE3）/ BL21 (DE3) pLysS感受态細胞
一(yī)、BL21/BL21（DE3）/BL21 (DE3) pLysS菌株和基因型
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宿主菌Host Strain |
基因型Genotype |
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BL21 strain |
E. coli B F-ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm |
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BL21 (DE3) strain |
E. coli B F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3) |
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BL21 (DE3) pLysS strain |
E. coli B F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3) pLysS (CamR) |
基因型說明：
a）以上(shàng)三個(gè)宿主菌都是大腸杆菌E. Coli. B/r菌株，不含lon蛋白(bái)酶，也缺乏外膜蛋白(bái)酶OmpT。這兩個(gè)關鍵蛋白(bái)酶的缺乏降低(dī)菌株内表達外源蛋白(bái)的降解率。
b）DE3命名表明該菌株染色體上(shàng)整合λ噬菌體DE3溶原體（DE3 lysogen）（其上(shàng)攜帶lacUV5啓動子調控的T7 RNA聚合酶基因），IPTG能(néng)誘導T7 RNA聚合酶的表達。
c）pLysS命名表明該菌株攜帶pLysS質粒，含有表達T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能(néng)夠作用于大腸杆菌細胞壁上(shàng)的肽聚糖溶解大腸杆菌，從(cóng)而能(néng)夠降低(dī)目的基因的背景表達水(shuǐ)平，但不幹擾IPTG誘導的表達。pLysS質粒賦予菌株氯黴素抗性（CamR），而且含有p15A複制起始子，這一(yī)起始子使該菌株兼容于含ColE1或pMB1複制起始子的質粒（比如pUC或pBR322來源的質粒）。
二、BL21/BL21（DE3）/BL21 (DE3) pLysS菌株的應用特征
BL21/BL21（DE3）/BL21 (DE3) pLysS三種宿主菌内T7啓動子表達載體（比如pCAL, pET載體）呈現不同的蛋白(bái)表達水(shuǐ)平。BL21（DE3）感受态細胞是全能(néng)型菌株，滿足高(gāo)水(shuǐ)平蛋白(bái)表達且容易誘導。BL21 (DE3) pLysS感受态更嚴格控制毒性蛋白(bái)表達且具氯黴素抗性。
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表達宿主 |
誘導方法 |
優點 |
缺點 |
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BL21 |
λ噬菌體CE6感染 |
最嚴格控制背景表達（非誘導表達） |
誘導不如DE3衍生(shēng)菌有效；誘導（感染）過程更冗長(cháng) |
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BL21 (DE3) |
IPTG誘導lacUV5啓動子驅動的T7聚合酶 |
高(gāo)水(shuǐ)平表達 |
T7聚合酶洩露表達，引起潛在毒性蛋白(bái)的背景表達（非誘導表達） |
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BL21 (DE3) pLysS |
IPTG誘導的T7聚合酶 |
容易誘導 |
與BL21 (DE3)相(xiàng)比，稍微抑制誘導表達 |
三、BL21/BL21（DE3）/BL21 (DE3) pLysS菌株的異源蛋白(bái)表達特征
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表達宿主 |
異源蛋白(bái)（Heterologous protein）表達特征 |
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BL21 strain |
非毒性蛋白(bái)的高(gāo)水(shuǐ)平表達，不能(néng)用于T7啓動子驅動的蛋白(bái)表達（如pET） |
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BL21 (DE3) strain |
非毒性蛋白(bái)的高(gāo)水(shuǐ)平表達，用于T7啓動子驅動的蛋白(bái)表達（如pET） |
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BL21 (DE3) pLysS strain |
非毒性和毒性蛋白(bái)的高(gāo)水(shuǐ)平表達，背景表達低(dī)于BL21 (DE3)，BL21 |
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貨号 |
産品名稱 |
規格 |
價格（元） |
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10×100μl |
280 |
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MF2331-5000UL |
BL21 (DE3) Chemically Competent Cell 化學感受态細胞 |
50×100μl |
1280 |
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10×100μl |
280 |
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50×100μl |
1280 |
