BL21 (DE3) pLysS Competent Cell

大腸杆菌感受态細胞

産品标簽：

BL21 (DE3)；Rosetta (DE3)；Kanamycin（kan）卡那黴素；Carbenicillin 羧苄青黴素；In-fusion 一(yī)步法克隆檢測試劑盒；

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産品組分：

菌株描述

BL21 (DE3) pLysS菌株攜帶質粒pLysS，具有氯黴素抗性。pLysS含有表達T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶能(néng)夠作用于大腸杆菌細胞壁上(shàng)的肽聚糖溶解大腸杆菌，從(cóng)而能(néng)夠降低(dī)目的基因的背景表達水(shuǐ)平，但不幹擾IPTG誘導的表達。适合于毒性蛋白(bái)和非毒性蛋白(bái)的表達。該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區（DE3區含有T7噬菌體RNA聚合酶）。

BL21 (DE3) pLysS菌株基因型：F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3)pLysS Camr

産品描述

本品是大腸杆菌BL21(DE3)pLysS菌株經特殊工(gōng)藝制作所得的感受态細胞，可用于DNA的熱擊轉化。經pUC19質粒檢測轉化效率可達107 cfu/μg DNA。且在-80℃能(néng)穩定保存幾個(gè)月(yuè)轉化效率不發生(shēng)改變。

保存與運輸條件(jiàn)：

保存：-80℃保存，六個(gè)月(yuè)有效。

運輸：幹冰運輸。

注意事(shì)項

1）感受态細胞必須用幹冰運輸。感受态細胞應在-80℃保存，不可反複凍融且放(fàng)置時間過長(cháng)，否則會(huì)減低(dī)感受态細胞的轉化效率。

2）最好在冰上(shàng)融化感受态細胞。

3）進行轉化操作時，需在相(xiàng)應溫度及無菌條件(jiàn)下(xià)進行。

4）為(wèi)防止轉化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，将損失降到(dào)最低(dī)。

5）産品包裝内含質粒pUC19 DNA(0.1ng/μl)，供對照(zhào)實驗用。

6）BL21(DE3)pLysS菌株攜帶質粒pLysS，除複蘇培養基不含抗生(shēng)素外，其餘所用培養基/培養液均應含34μg/ml氯黴素，以防止質粒丢失。

7）為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無菌條件(jiàn)的标準下(xià)進行】

1）取感受态細胞置于冰浴中，如需分裝可将剛剛融化細胞懸液分裝到(dào)無菌預冷的離心管内，置于冰浴中。【注意：一(yī)次轉化感受态細胞的建議用量為(wèi)50-100 μl，可以根據實際情況分裝使用。需注意所用DNA體積不要超過感受态細胞懸液體積的十分之一(yī)。】以下(xià)實驗以50 μl感受态細胞為(wèi)例。

2）向感受态細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入适量的DNA，通(tōng)常100 μl感受态細胞能(néng)夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器(qì)輕輕吹打混勻，冰浴靜(jìng)置30min。

3）42℃熱擊45s，迅速将離心管轉移到(dào)冰浴中，冰上(shàng)靜(jìng)置2-3min。此過程不要搖動離心管。

4）向每個(gè)離心管中加入450 μl無菌的SOC或LB培養基（不含抗生(shēng)素），混勻後置于37℃ 搖床，150 rpm振蕩培養45min，目的使質粒上(shàng)相(xiàng)關的抗性标記基因表達，使菌體複蘇。

5）根據實驗需求，取适量已轉化的感受态細胞，加到(dào)含相(xiàng)應抗生(shēng)素的SOC或LB固體瓊脂培養基上(shàng)，用無菌的塗布棒将細胞均勻塗開(kāi)，将平闆置于室溫（或37℃）直至液體被吸收， 倒置培養，37℃培養12-16h。

【注意】：

a）塗布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多(duō)，可取少量轉化産物(wù)塗布平闆；反之，若轉化的DNA總量較少，可取200-300 μl轉化産物(wù)塗布平闆。若預計的克隆較少，可通(tōng)過離心（4,000 rpm，2min）後吸除部分培養液，懸浮菌體後将其塗布于一(yī)個(gè)平闆中。

b）新制備的固體培養基不易塗幹，可将平闆正置于37℃直至液體被吸收後再倒置培養。c）塗布剩餘的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以将剩下(xià)的菌液再塗布新培養基進行培養。

相(xiàng)關産品

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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