Di-4-ANEPPS 膜電(diàn)位熒光(guāng)探針

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膜電(diàn)位熒光(guāng)探針，Di-4-ANEPPS，Di-8-ANEPPS，ANEP染料，Fast-response probe快速響應探針，CAS：90134-00-2；

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産品描述：

ANEP (AminoNaphthylEthenylPyridinium)染料由Leslie Loew和同事(shì)開(kāi)發，是最靈敏且穩定的快速響應探針，能(néng)檢測亞毫秒(miǎo)級的膜電(diàn)位變化。Di-4-ANEPPS（MX4038）和Di-8-ANEPPS（MX4039）在各種組織、細胞和模型膜系統中表現出相(xiàng)當一(yī)緻的熒光(guāng)強度變化率（10%熒光(guāng)變化/100mV）。ANEP染料的電(diàn)子結構發生(shēng)變化，從(cóng)而，它們的熒光(guāng)光(guāng)譜對周圍的電(diàn)場變化做出響應。這些光(guāng)學響應足夠快來檢測興奮細胞（包括單個(gè)神經元、心肌細胞和完整組織制備物(wù)）的瞬時電(diàn)位變化。另外，ANEP染料的激發光(guāng)譜呈現出電(diàn)位依賴的遷移，從(cóng)而使其能(néng)通(tōng)過測定激發波長(cháng)下(xià)的熒光(guāng)比來定量膜電(diàn)位。ANEP染料結構上(shàng)的差異使其适用于各種特定應用（見(jiàn)附錄I和II）。

電(diàn)位敏感ANEP染料的特征：

①兩性離子分子，在不同細胞和組織樣本中表現出最穩定的電(diàn)位響應。

②結合到(dào)磷脂膜上(shàng)的最大激發和發射波長(cháng)約為(wèi)465/635nm【但光(guāng)譜特征與環境密切關聯】

③非熒光(guāng)直至結合到(dào)膜上(shàng)

④溶于乙醇、DMSO和DMF【Di-2-ANEPEQ（MX4040）是水(shuǐ)溶性的ANEP染料】

⑤快速響應探針，适用于檢測亞毫秒(miǎo)的膜電(diàn)位變化

Di-4-ANEPPS是各種細胞和組織類型中表現最穩定的電(diàn)位探針。細胞膜電(diàn)位的變化與染料激發熒光(guāng)強度的變化相(xiàng)關。Di-4-ANEPPS能(néng)快速被細胞内在化，因此，主要用于短期實驗。我司（懋康生(shēng)物(wù)）也提供Di-8-ANEPPS（MX4039），親脂性更好且能(néng)更好的保留在質膜外層。

基本特性：

1. CAS NO：90134-00-2

2. 化學名：Pyridinium, 4-(2-(6-(dibutylamino)-2-naphthalenyl)ethenyl)-1-(3-sulfopropyl)-, hydroxide, inner salt

3. 分子式：C28H36N2O3S 

4. 分子量：480.66g/mol

5. 外觀：橙色至暗(àn)紅(hóng)色固體

6. 純度：≥95%（HPLC）

7. 熒光(guāng)：λex 496 nm, λem 705 nm in methanol【需注意：相(xiàng)較于在有機(jī)溶劑内，苯乙烯染料與脂質結合後通(tōng)常發生(shēng)很大的藍光(guāng)遷移】

8. 溶解性：溶于DMSO、乙醇、DMF

9. 化學結構式：

保存與運輸方法

保存：+4℃幹燥避光(guāng)保存，可置于-20℃長(cháng)期幹燥避光(guāng)保存，2年(nián)有效。

運輸：室溫運輸。

注意事(shì)項

1）熒光(guāng)染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光(guāng)，以減緩熒光(guāng)淬滅。

2）為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

使用方法

1.儲存液制備

将低(dī)溫保存的凍幹粉置于室溫回溫至少20min，低(dī)速離心後，将其溶于有機(jī)溶劑比如乙醇、DMSO或DMF配制成1mg/ml（~2mM）的儲存液。将儲存液避光(guāng)保存在+4℃。

2.ANEP染料的細胞加載

2.1批量加載

爬片培養的貼壁細胞一(yī)般通(tōng)過将少量的染料儲存液（比如溶于DMSO）加入細胞培養基（終濃度為(wèi)0.2-2μM）進行标記即可。更高(gāo)的染料濃度（10-50μM）用于标記灌注的組織樣本。通(tōng)常要加0.05% Pluronic®F-127（MS4301）在标記溶液内，以提高(gāo)染料的溶解（對于親脂性更高(gāo)的ANEP染料比如Di-8-ANEPPS尤其不能(néng)省略）。低(dī)标記溫度（4-20℃）能(néng)抑制染料的内在化。含探針的溶液孵育10-20min，細胞用不含染料的培養基清洗3次。

2.2逆行标記

特定的神經元群細胞可通(tōng)過定位壓力注射高(gāo)濃度的染料溶液（10-20mg/ml，溶于DMSO或乙醇）進入神經組織來實現标記。

3.熒光(guāng)測定

一(yī)般通(tōng)過記錄激發在450nm和510nm，發射在＞570nm處的熒光(guāng)強度來進行熒光(guāng)比率成像測定。當膜超極化，熒光(guāng)強度比率（F450/F510）降低(dī)。電(diàn)位響應的校準可通(tōng)過使用離子載體缬氨黴素（MS0049）和添加不同鉀離子濃度到(dào)細胞外培養基來調整多(duō)種膜電(diàn)位來實現。

相(xiàng)關産品

— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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