DiOC₆(3)内質網熒光(guāng)探針

産品關鍵詞：

DiOC6(3)；壬基吖啶橙NAO；JC-10 線粒體膜電(diàn)位探針；MitoTracker® Green FM 綠色線粒體熒光(guāng)探針；羅丹明123 Rhodamine 123；CAS NO：53213-82-4；

産品信息

【溫馨提示】：見(jiàn)我司懋康生(shēng)物(wù)（maokangbio）提供的線粒體熒光(guāng)探針産品專題。

産品描述

DiOC6(3)，英文全名3,3'-Dihexyloxacarbocyanine Iodide，CAS NO. 53213-82-4，是一(yī)種具細胞膜滲透性、發綠色熒光(guāng)的親脂性染料。作為(wèi)一(yī)種膜探針，DiOC6(3)在高(gāo)濃度下(xià)能(néng)對活細胞和固定細胞的内質網（高(gāo)爾基體）染色，也能(néng)對囊泡膜和線粒體染色。而在更低(dī)濃度下(xià)，偏向選擇性染色線粒體。DiOC6(3)能(néng)用來标記活細胞，然而，由于光(guāng)動力學毒性會(huì)快速破損，經其标記的細胞僅能(néng)短時間暴露在光(guāng)下(xià)。神經元和酵母細胞中，DiOC6(3)曾用來研究内質網（ER）結構的相(xiàng)互作用和動力學；當染料濃度提高(gāo)或在某些呼吸缺陷的酵母菌株内，DiOC6(3)能(néng)特異性染酵母核膜，而且具足夠靈敏性來揭式核膜（已知稱為(wèi)karmellae）的變化。

應用特征

DiOC6(3), a carbocyanine dye from the DiOC family, cannot be exclusive to the mitochondrial membrane potential measurement in intact cells, except by dissipating the plasmatic and ER membrane potentials as well as the DpH. DiOC6(3) is widely used as a cytofluorometric DCm indicator. To produce rigorous and reproducible results, the dye and the cell concentrations have to be monitored with care. When DiOC6(3) is used at low concentrations (10–20 nM), this dye rapidly reaches equilibrium in the mitochondria with low quenching effects. The use of higher concentrations (more than 50 nM) may result in non-mitochondrial staining (plasma membrane and endoplasmic reticulum) and in fluorescence quenching. Moreover, similar to probes previously mentioned, the use of relatively high concentrations of dye leads to a high accumulation in the inner mitochondrial membrane, resulting in a quenching of the fluorescence and, occasionally, in an inhibition of either mitochondrial respiration or complex I (except for TMRM and TMRE) (30). Many factors, such as the cell/dye ratio, cell size variability or the magnitude of plasma membrane potential may affect the fluorescence intensity of cells stained with DiOC6(3) (31). If the cell population studied is homogeneous and asynchronous, this potential pitfall is not of crucial interest; otherwise, internal standards and normalization procedures have to be used to allow the detection of DCm dissipation and DiOC6(3) fluorescence decrease (30). [Reference: Cottet-Rousselle C et al. Cytometric assessment of mitochondria using fluorescent probes. Cytometry A. 2011 Jun;79(6):405-25.]

産品特性

1）   CAS NO.：53213-82-4

2）   化學名：Benzoxazolium, 3-hexyl-2-(3-(3-hexyl-2(3H)-benzoxazolylidene)-1-propenyl)-, iodide

3）   同義名：3,3'-Dihexyloxacarbocyanine Iodide; DiOC6(3) Iodide;

4）   分子式：C29H37IN2O2

5）   分子量：572.52

6）   純度：≥97%（HPLC）

7）   Ex/Em：484/501nm（in methanol）

8）   外觀：紅(hóng)色粉末或塊狀

9）   溶解性：溶于DMSO，DMF，無水(shuǐ)乙醇，微溶于水(shuǐ)

10）化學結構式：

保存與運輸方法

保存：-20℃避光(guāng)幹燥保存，至少一(yī)年(nián)有效。

運輸：室溫運輸。

注意事(shì)項

1）   熒光(guāng)染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光(guāng)，以減緩熒光(guāng)淬滅。

2）   為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

使用方法

【注意】以下(xià)使用方法僅用作參考，可根據具體的實驗條件(jiàn)和具體的應用來做出調整。

1.染色液制備

1）儲存液制備：用 DMSO或無水(shuǐ)乙醇配置濃度1～5 mM的儲存液。例如，取10mg DiOC6(3)（Mw：572.52 g/mol）溶于3.49ml 無水(shuǐ)DMSO中，充分溶解，即得到(dào)5mM的儲存液。【注意】未使用的儲存液分裝儲存在-20℃，避免反複凍融，且要避光(guāng)保存。

2）工(gōng)作液制備：用合适的緩沖液（如：無血清培養基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，調整到(dào)1～5 μM的工(gōng)作濃度。【注意】：工(gōng)作液最終濃度需要根據不同細胞系和實驗體系來優化。建議從(cóng)推薦濃度開(kāi)始，以10倍範圍為(wèi)區間進行最優濃度的摸索。

2.懸浮細胞染色

1）加入适當體積的染色工(gōng)作液重懸細胞，使其密度為(wèi)1×106/mL。

2）37℃孵育細胞2～20min，不同的細胞最佳培養時間不同。可以20min作為(wèi)起始孵育時間，之後優化以保證得到(dào)均一(yī)化的标記結果。

3）孵育結束，按1000～1500 rpm離心5min。

4）去除上(shàng)清液，之後輕柔加入37℃預熱的生(shēng)長(cháng)培養液重懸細胞。

5）再重複3），4）步驟兩次。

3.貼壁細胞染色

1）将貼壁細胞培養于無菌蓋玻片上(shàng)。

2）從(cóng)培養基中移走蓋玻片，濾掉過量培養液，将蓋玻片放(fàng)在潮濕的小(xiǎo)室内。

3）在蓋玻片的一(yī)角加入100μL的染色工(gōng)作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。

4）37℃孵育細胞2～20min，不同的細胞最佳培養時間不同。可以20min作為(wèi)起始孵育時間，之後優化以保證得到(dào)均一(yī)化的标記結果。

5）吸掉染色工(gōng)作液，用培養液洗蓋玻片2～3次，每次用預溫的培養基覆蓋所有細胞，孵育5～10min，然後吸走培養基。

4.顯微鏡檢測

1）DiD，DiO，DiI，DiR濾光(guāng)器(qì)的選擇參見(jiàn)下(xià)表：

5.流式細胞儀檢測

經DiO，DiI，DiD和DiR染色的細胞分别用流式細胞儀的FL1，FL2，FL3或FL4通(tōng)道檢測。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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