Collagen, Type I, from Rat Tail 鼠尾膠原蛋白(bái)I

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Extracellular Matrix (ECM) 細胞外基質；Gelatin 明膠；Collagen Type I 膠原蛋白(bái)I型；Poly-L-lysine 多(duō)聚L-賴氨酸；Fibronectin 纖連蛋白(bái)；Matrigel 基質膠；CAS：9007-34-5；

産品信息：

基本介紹：

膠原蛋白(bái)是結締組織和内髒器(qì)官細胞外基質的主要構造成分，但在皮膚、肌腱、骨骼中分布最為(wèi)廣泛。從(cóng)遺傳和結構上(shàng)膠原蛋白(bái)分為(wèi)許多(duō)類型。膠原蛋白(bái)I（Collagen, Type I）是由2個(gè)α1鏈和1個(gè)α2鏈組成的異源多(duō)聚體，在37℃，中性pH下(xià)自(zì)發形成三螺旋骨架，是一(yī)種優秀的細胞培養用基質，廣泛用于肝細胞、成纖維細胞、脊神經節、肌肉細胞、施萬細胞、胚肺細胞、上(shàng)皮細胞和其他大量細胞系。還(hái)能(néng)用于研究細胞生(shēng)長(cháng)、分化、遷移以及發育過程中的組織形态發生(shēng)。

懋康生(shēng)物(wù)提供的鼠尾膠原蛋白(bái)I是根據Birkedal-Hansen方法，通(tōng)過醋酸抽提、氯化鈉沉澱、磷酸氫二鈉沉澱等步驟制備。可用于包被細胞培養器(qì)皿，培養細胞表面粘附性，特别适合那些在普通(tōng)培養器(qì)皿表面不易貼壁的細胞，比如成纖維細胞、肝細胞等原代細胞。還(hái)可用于三維膠的制備，模拟真實的生(shēng)長(cháng)環境，使得細胞在三維環境中生(shēng)長(cháng)。

本品為(wèi)溶于6mM HAc的無菌溶液，濃度5mg/ml，每個(gè)批次産品皆通(tōng)過細胞培養測試（包括三維空間培養）以保證質量的可靠性。

保存與運輸方法：

保存：2-8℃保存，不可凍存，一(yī)年(nián)有效。

運輸：冰袋運輸。

注意事(shì)項

1）整個(gè)操作請于冰上(shàng)進行，因室溫鼠尾膠原I可迅速成膠，操作過程盡量保持低(dī)溫。

2）整個(gè)操作請在無菌環境下(xià)無菌操作，避免污染以影響細胞生(shēng)長(cháng)。

3）為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

使用方法

1. 細胞培養器(qì)皿的表面包被

組織培養器(qì)皿的表面包被推薦濃度為(wèi)1-5µg/cm2，起始濃度可首選5µg/cm2。建議根據具體細胞類型來優化。

1.1 6mM HAc稀釋液的制備

本品以溶于6mM HAc（=0.36g/L HAc）的無菌溶液形式提供，本身不溶于中性pH，建議用6mM HAc溶液做進一(yī)步稀釋。

配制方法：取34.5µl冰醋酸（17.4 M）加入100ml雙蒸水(shuǐ)，充分混勻後即得到(dào)6mM HAc溶液，0.22µm濾膜過濾除菌後待用。

1.2 包被步驟

a，根據自(zì)身實驗體系以及優化後的包被濃度來計算(suàn)所需的膠原蛋白(bái)量，并加入相(xiàng)應孔内，确保膠原蛋白(bái)溶液完全覆蓋表面。

1）以包被濃度為(wèi)5µg/cm2，先用6mM HAc稀釋液将膠原蛋白(bái)（5mg/ml）稀釋到(dào)合适的中間濃度，如50µg/ml，然後參考表1不同培養皿内膠原蛋白(bái)加量表來加量到(dào)各孔内；

2）以包被濃度為(wèi)2µg/cm2，先用6mM HAc稀釋液将膠原蛋白(bái)（5mg/ml）稀釋到(dào)合适的中間濃度，如12µg/ml，然後參考表1不同培養皿内膠原蛋白(bái)加量表來加量到(dào)各孔内；

表1  不同培養皿内膠原蛋白(bái)加量表

b，室溫孵育1h，小(xiǎo)心吸掉多(duō)餘液體，用無菌PBS清洗3~4次後直接使用。或者加完膠原蛋白(bái)溶液後，在超淨台内開(kāi)蓋過夜晾幹。無菌條件(jiàn)下(xià)，包被好的器(qì)皿在4-25℃至少可保存3個(gè)月(yuè)。

2. 三維膠原的制備

當鼠尾膠原蛋白(bái)I使用濃度>1mg/ml，pH 7.0左右皆可形成具有一(yī)定強度的三維膠，建議成膠濃度為(wèi)1-2 mg/ml。

由于本品是以溶于6mM HAc的無菌溶液形式提供，在成膠過程需先加入0.06倍體積的0.1M NaOH中和。

2.1 需要溶液準備（無菌、預冷）

10×PBS（可含酚紅(hóng)）或10×細胞培養液

0.1M NaOH

雙蒸水(shuǐ)

2.2 三維膠原制備（不含細胞）（以配制1ml，1mg/ml三維膠為(wèi)例）：

a，取200µl膠原蛋白(bái)（5mg/ml）加到(dào)置于冰浴的離心管内，加入690µl無菌水(shuǐ)。之後加到(dào)12µl 0.1M NaOH【注意：該步驟不能(néng)反，如果反過來把12µl 0.1M NaOH加到(dào)膠原溶液中，會(huì)由于NaOH不能(néng)迅速混勻而産生(shēng)局部的膠原凝結】，立即混勻。再加入100µl 10×PBS或10×細胞培養液，混勻後立即加到(dào)培養器(qì)皿中【注意：混勻後pH為(wèi)7.0左右，如果PBS或培養液中沒有加酚紅(hóng)，初次使用時需要用pH試紙(zhǐ)測試】。

b，将培養器(qì)皿在室溫（25℃左右）放(fàng)置20min待膠凝固後，轉移到(dào)培養箱内。【注意】：如果配制中使用的是10×PBS，需要在做細胞培養前，先加入适當體積的細胞培養液預平衡。

2.3 三維膠原制備（含細胞）（以配制1ml，1mg/ml三維膠為(wèi)例）：

a，準備好細胞懸液，并放(fàng)置于冰浴中。

b，将200µl膠原蛋白(bái)（5mg/ml）加到(dào)12µl 0.1M NaOH【注意：該步驟不能(néng)反，如果反過來把12µl 0.1M NaOH加到(dào)膠原溶液中，會(huì)由于NaOH不能(néng)迅速混勻而産生(shēng)局部的膠原凝結】，立即混勻。再加入23µl 10×PBS或者10×細胞培養液，立即混勻【注意：混勻後pH為(wèi)7.0左右，如果PBS或培養液中沒有加酚紅(hóng)，初次使用時需要用pH試紙(zhǐ)測試】。再加入760µl的細胞懸浮液，混勻後立即加到(dào)培養器(qì)皿中。

c，将培養器(qì)皿在室溫（25℃左右）放(fàng)置20min待膠凝固後，加入适當體積細胞培養液，轉移到(dào)培養箱中培養。

相(xiàng)關産品：

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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