★  服務簡介

Cas9蛋白(bái)的CDS長(cháng)達4kb，克隆難度和包毒難度都相(xiàng)對大，将Cas9基因高(gāo)效導入細胞是應用Cas9/CRISPR系統進行基因敲除的難點之一(yī)，極大地限制可供選擇的将基因導入細胞的方法。并且在用CRISPR/Cas9系統進行基因敲除時，還(hái)需要同時轉入識别靶點的gRNA，篩選陽性細胞的抗性基因或熒光(guāng)基因，用同源重組法進行基因敲除，還(hái)需要導入同源重組模闆。如此多(duō)的基因共同表達，很難得到(dào)較高(gāo)的基因編輯效率，造成後續的陽性克隆篩選和檢測工(gōng)作難度大。

懋康生(shēng)物(wù)獨創性研發出慢(màn)病毒Cas9表達體系。該體系采用慢(màn)病毒體系先在細胞中穩定表達Cas9蛋白(bái)，構建穩定表達Cas9蛋白(bái)的細胞系，再在該細胞系的基礎上(shàng)導入gRNA和基因敲除實驗中用到(dào)的其它原件(jiàn)。該體系采用慢(màn)病毒體系先在細胞中穩定表達Cas9蛋白(bái)，構建穩定表達Cas9蛋白(bái)的細胞系，再在該細胞系的基礎上(shàng)導入gRNA和基因敲除實驗中用到(dào)的其它原件(jiàn)用于特異性基因敲除。

CRISPR/Cas9是一(yī)種最新的靶向基因敲除技(jì)術(shù)，能(néng)夠強有力的作用于基因組的分子生(shēng)物(wù)學工(gōng)具。該技(jì)術(shù)現已證明能(néng)夠在多(duō)種哺乳動物(wù)細胞，植物(wù)細胞，酵母中進行靶向基因敲除和定點編輯。傳統的CRISPR/Cas9系統需要分别轉錄出tracrRNA（trans-activating RNA）和crRNA (CRISPR RNA)，然後這兩者通(tōng)過堿基配對形成tracrRNA:crRNA二元複合體指導Cas9蛋白(bái)剪切特定位點的雙鏈DNA（圖1）。我公司采用新型的單鏈引導RNA(single guide RNA,sgRNA)可以模拟tracrRNA:crRNA二元複合體,能(néng)夠直接與Cas9核酸酶構建在同一(yī)質粒上(shàng)，表達後指導基因組DNA的切割（圖2）。

                                            圖1：傳統的CRISPR/Cas9系統                                圖2：單質粒CRISPR/Cas9系統

1：适用于在同一(yī)個(gè)細胞系中需要進行多(duō)個(gè)基因敲除的實驗；

2：基因敲除效率比直接質粒轉染更高(gāo)；

3：提供多(duō)種不同熒光(guāng)和抗性标記的慢(màn)病毒表達載體，更易篩選到(dào)基因敲除成功細胞；

4：接受cas9蛋白(bái)穩定表達不同細胞系定制。