microRNA（miRNA）是一(yī)類小(xiǎo)片段單鏈RNA , 最初是在核内由RNA聚合酶轉錄形成具有帽子結構（7MGpppG）和多(duō)聚腺苷酸尾巴（AAAA）的pri-miRNA，pri-miRNA在核酸酶Drosha及其輔助因子Pasha的作用下(xià)被處理成約70個(gè)核苷的pre-miRNA。pre-miRNA被運輸出核後再由另外一(yī)個(gè)核酸酶Dicer将其剪切形成約22個(gè)核苷酸的成熟miRNA。成熟的miRNA 與RISC組裝成RNA誘導的沉默複合體，通(tōng)過堿基互補配對的方式識别靶mRNA，并根據互補程度的不同指導沉默複合體降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻譯。

圖示1：miRNA的成熟過程

★ 服務内容
1：miRNA 的過表達慢(màn)病毒包裝
我公司采用擴增pri-miRNA及其兩端的天然側翼序列來構建miRNA的過表達質粒，并包裝慢(màn)病毒。以實現miRNA在體外（内）的高(gāo)表達。該方法相(xiàng)比化學合成的miRNA，具有可持續性表達，并且能(néng)用于難轉染（例如幹細胞，懸浮細胞等）細胞等優點。比pre-miRNA和mature miRNA 形式的過表達，具有表達效果更好，更能(néng)模拟體内天然的成熟過程。

2：miRNA的抑制
我公司采用TuD RNA（Tough Decoy RNA）的設計方法構建miRNA的抑制慢(màn)病毒載體。TuD RNA不同于以往的單鏈RNA，它是含有頸環結構的雙鏈RNA , 能(néng)夠抵抗胞内核酸酶的降解，讓miRNA抑制可持續一(yī)個(gè)月(yuè)以上(shàng)。并且，TuD RNA的兩條鏈都包含一(yī)個(gè)miRNA結合位點，能(néng)夠更高(gāo)效地隔離濃度較低(dī)的目标miRNA。因此，相(xiàng)比其它方法，TuD RNA能(néng)夠更長(cháng)效的抑制miRNA。

圖示2：TuD RNA的工(gōng)作原理
3：miRNA的靶基因驗證
由于miRNA是通(tōng)過其seed sequence（5’端2-8位核苷酸）與靶基因的3’UTR結合抑制靶基因的表達。因此，我們将待定目的基因的3’UTR區域構建至報(bào)告基因luciferase的後面，通(tōng)過比較實驗組和對照(zhào)組報(bào)告基因表達的改變（監測熒光(guāng)素酶的活性變化）來間接反映miRNA對目的基因的抑制作用。同時結合定點突變等方法進一(yī)步确認miRNA與靶基因3’UTR的作用位點。

★  服務說明
1：客戶隻需提供miRBase數據庫中的miRNA編号，我們就(jiù)可以按照(zhào)您的要求完成相(xiàng)關實驗。
2：miRNA的過表達效果受諸多(duō)因素影響，與對照(zhào)組相(xiàng)比，可以提高(gāo)2—1000倍（如果本底表達水(shuǐ)平較低(dī)，可以達到(dào)較好的過表達效果，如果本底表達水(shuǐ)平較高(gāo)，過表達效果會(huì)相(xiàng)對較低(dī)）。
3：我們提供多(duō)個(gè)microRNA慢(màn)病毒載體供客戶選擇（見(jiàn)下(xià)方載體信息）；

★ 客戶所得
1：符合客戶要求的産品（質粒+甘油菌 或者 病毒+polybrene）；
2：完整的電(diàn)子版實驗報(bào)告（包括實驗材料，步驟，載體圖譜等）；
3：完整的測序報(bào)告；