RNAi穩轉株構建服務 - 上海夢澤生物科技有限公司

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RNAi穩轉株構建服務

時間：2016-05-11 作者：懋康生(shēng)物(wù)

★ 服務描述
shRNA穩轉株是指能(néng)持續穩定表達幹擾特定基因shRNA的細胞。RNA幹擾是基因功能(néng)研究中最常用的手段之一(yī)。懋康生(shēng)物(wù)利用慢(màn)病毒将shRNA序列整合入細胞基因組，并通(tōng)過慢(màn)病毒載體攜帶的抗性基因（通(tōng)常為(wèi)新黴素，嘌呤黴素，潮黴素）篩選出穩定轉染shRNA的細胞，使其成為(wèi)shRNA穩定轉染細胞系。

★ 服務内容
1：shRNA幹擾靶點序列的設計；
2：shRNA 慢(màn)病毒質粒的構建；
3：shRNA慢(màn)病毒包裝與病毒滴度測定；
4：:病毒感染靶細胞并從(cóng)RNA水(shuǐ)平（Real-time PCR）和/或蛋白(bái)水(shuǐ)平（Western Blot）驗證幹擾效果；

5：選出幹擾效果最好的細胞，利用慢(màn)病毒載體攜帶的抗性基因篩選建立穩定細胞系；

★ 服務說明
1：我們的RNA幹擾服務針對所有的哺乳動物(wù)細胞，暫不提供植物(wù)和原核生(shēng)物(wù)的RNA幹擾服務；
2：RNA幹擾的對象可以是編碼蛋白(bái)的mRNA序列，也可以是長(cháng)的非編碼RNA(lncRNA)序列；
3：針對不同的靶基因，我們一(yī)般設計3-4條幹擾序列，保證至少有一(yī)條序列幹擾效果大于70%（RNA水(shuǐ)平）；
4：我們提供多(duō)個(gè)慢(màn)病毒幹擾載體供客戶選擇（見(jiàn)下(xià)方載體信息）；
5：對于幹擾效果的驗證，客戶可以選擇隻從(cóng)RNA水(shuǐ)平（或蛋白(bái)水(shuǐ)平）進行驗證，也可選擇兩個(gè)水(shuǐ)平都進行驗證（lncRNA無法從(cóng)蛋白(bái)水(shuǐ)平驗證）；
6：靶細胞和Western Blot 實驗需要的一(yī)抗由客戶提供，也可委托我公司代購；
7：Real-time PCR采用SYBR Green 法三複孔進行幹擾效果驗證，确保實驗結果真實可信；

★ 客戶所得

1：構建好的慢(màn)病毒幹擾質粒，剩餘病毒及穩轉株細胞；

2：完整的實驗報(bào)告（包括實驗材料，實驗步驟，實驗結果等）及慢(màn)病毒使用操作說明書一(yī)份；

★ 服務周期
從(cóng)靶點設計到(dào)穩轉株完成總共需要45個(gè)工(gōng)作日；

★ 載體信息

載體編号	篩選标記		載體骨架主要元件(jiàn)
載體編号	熒光(guāng)	真核抗性	載體骨架主要元件(jiàn)
pHY-LV-KD1.1	GFP	無	U6-shRNA-CMV-GFP
pHY-LV-KD1.2	RFP	無	U6-shRNA-CMV-RFP
pHY-LV-KD1.4	無	Puromycin	U6-shRNA-CMV-Puromycin
pHY-LV-KD2.1	GFP	無	U6-shRNA-EF1α-GFP
pHY-LV-KD3.1	GFP	無	U6-shRNA-UBC-GFP
pHY-LV-KD5.1	GFP	Puromycin	U6-shRNA-CMV-GFP-PGK- Puromycin
pHY-LV-KD5.2	RFP	Puromycin	U6-shRNA-CMV-RFP-PGK- Puromycin
pHY-LV-KD5.4	GFP	Puromycin	U6-shRNA-UBC-GFP-PGK- Puromycin