Detection and measurement of hydrogen peroxide:

過氧化氫（Hydrogen peroxide, H₂O₂）特異性熒光(guāng)探針專題

專題關鍵詞：

ROSGreen^TM H2O2 Probe；BES-H2O2-Ac；hydrogen peroxide (H2O2) 過氧化氫；HYDROP-EX；Amplex Red reagent；Peroxidase 過氧化物(wù)酶；

專題背景：

活性氧（ROS）比如超氧陰離子（O2-.），過氧化氫（H2O2）和羟基自(zì)由基（HO .）是各種疾病病理發展中的重要調節劑。DCFH和DCFH-DA普遍用作熒光(guāng)探針測定細胞來源的過氧化氫（H2O2），但這些化合物(wù)最大的缺陷在于對H2O2的選擇性極其弱。

為(wèi)此，很多(duō)公司開(kāi)發特異性的過氧化氫（H2O2）探針，以闡明H2O2導緻疾病相(xiàng)關的細胞反應和動力學功能(néng)。

一(yī)、高(gāo)選擇性過氧化氫探針（BES-H2O2-Ac，BES-H2O2，from wako chemical）

Wako chemical公司開(kāi)發兩款BES-H2O2，分别檢測細胞來源的H2O2和細胞非滲透性的H2O2，具高(gāo)選擇性。

1）兩款探針作用機(jī)理如下(xià)：

2）兩款探針的應用示例：

圖：BES-H2O2檢測Jurkat T細胞的熒光(guāng)成像和同一(yī)視野下(xià)的相(xiàng)位對比成像圖。Jurkat T細胞用含50µM BES-H2O2-Ac的培養基孵育1h。之後，其中一(yī)組細胞用含5mM 丁酸（H2O2産生(shēng)的刺激物(wù)）的培養基處理，而另一(yī)組用正常培養基（不含H2O2産生(shēng)的刺激物(wù)）處理，分别培養1h。（圖片來源: Professor Hatsuo Maeda, PhD., School of Pharmacy, Hyogo Univ. of Health Sciences）。

3）兩款探針的訂購信息：歡迎來電(diàn)咨詢021-54736159，或QQ:2971634497，1563822900。

産品優勢：

□     高(gāo)度選擇性結合H2O2;

□     BES H2O2-Ac具細胞膜滲透性；

□     檢測細胞來源的H2O2；

□     适用于熒光(guāng)成像；

二、高(gāo)選擇性過氧化氫探針（ROSGreenTMH2O2 Probe過氧化氫熒光(guāng)探針，from MKBio）

懋康生(shēng)物(wù)（MKBio）開(kāi)發一(yī)款細胞膜滲透性的過氧化氫特異性探針：ROSGreenTMH2O2 Probe。

1）  探針描述

過氧化氫（Hydrogen peroxide, H2O2）是一(yī)種反映氧代謝副産物(wù)，用于許多(duō)氧化應激相(xiàng)關态的關鍵調節劑，參與人體大量的生(shēng)理和病理活動，比如哮喘、動脈粥樣硬化、糖尿病血管病變、神經性衰退疾病和唐氏綜合征等，但目前對H2O2生(shēng)成、積累、運輸和功能(néng)的分子機(jī)制仍了解很少，最大的限制在于缺乏靈敏且特異性H2O2探針，用于活細胞研究。目前能(néng)得到(dào)的H2O2反應性探針的缺陷包括1）來自(zì)其他ROS比如過氧亞硝基陰離子（ONOO-）、過氧化基（ROO•）、超氧化物(wù)（•O2–）的背景熒光(guāng)幹擾；2）對外源活化酶的需求；水(shuǐ)缺乏水(shuǐ)溶性或不兼容于水(shuǐ)溶體系；4）以及紫外區域的激發光(guāng)譜特征等。

本ROSGreenTMH2O2Probe正是克服以上(shàng)缺陷開(kāi)發的一(yī)款過氧化氫（H2O2）選擇性探針。探針本身無熒光(guāng)，可見(jiàn)光(guāng)區域内無吸收峰。一(yī)旦接觸H2O2，瞬間激發熒光(guāng)增加并伴随可見(jiàn)波長(cháng)吸收帶的生(shēng)成（Ex/Em= 490/514nm）。因其二元的吸收/發射熒光(guāng)反應，此探針具有較大的動力學範圍。與相(xiàng)似的ROS比如O2–，NO，或OCl-相(xiàng)比，ROSGreenTMH2O2Probe對H2O2呈現出＞100倍（100-fold）的選擇性。

2）  應用示例

圖. Costar 黑(hēi)色96孔培養闆内CHO-K1活細胞用ROSGreenTMH2O2Probe的染色圖。圖A：對照(zhào)細胞；圖B：用H2O2（100μM）處理5min後的細胞；

3）訂購信息：歡迎來電(diàn)咨詢021-54736159，或QQ:2971634497，1563822900。

産品優勢：

□     高(gāo)度選擇性結合H2O2;

□     ROSGreenTMH2O2 Probe具細胞膜滲透性；

□     檢測溶液或細胞來源的H2O2；

□     适用于熒光(guāng)成像和流式細胞分析；

三、選擇性過氧化氫探針（ADHP，Amplex®Red過氧化氫探針，from MKBio）

懋康生(shēng)物(wù)（MKBio）供應的10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP)，中文名10-乙酰基-3,7-二羟基吩嗪，以商标名Amplex®Red在市(shì)場上(shàng)銷售，是目前為(wèi)止最靈敏和穩定的熒光(guāng)探針用來檢測HRP和H2O2。

1）  基本描述

10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP)，中文名10-乙酰基-3,7-二羟基吩嗪，以商标名Amplex®Red在市(shì)場上(shàng)銷售。ADHP是一(yī)種高(gāo)度靈敏和穩定的過氧化物(wù)酶底物(wù)，選擇性檢測過氧化氫（H2O2）。存在辣根過氧化物(wù)酶（HRP）的體系中，這一(yī)基本無色和非熒光(guāng)的ADHP與H2O2以1：1的化學定量比反應，生(shēng)成強紅(hóng)色熒光(guāng)的試鹵靈（Resorufin），可通(tōng)過熒光(guāng)光(guāng)度計和酶标儀分析結果。許多(duō)酶反應能(néng)産生(shēng)H2O2，因此，ADHP能(néng)夠用在偶聯酶促反應中檢測許多(duō)不同酶的生(shēng)物(wù)活性。

2）  工(gōng)作原理

圖. 使用ADHP進行偶聯酶促反應的工(gōng)作原理。葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化生(shēng)成過氧化氫（H2O2），通(tōng)過辣根過氧化物(wù)酶（HRP）催化ADHP反應生(shēng)成強熒光(guāng)試鹵靈（Resorufin）。

3）  常見(jiàn)應用

10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine (ADHP)是目前為(wèi)止最靈敏和穩定的熒光(guāng)探針用來檢測HRP和H2O2。

A）  ADHP普遍用來檢測許多(duō)免疫實驗中的HRP；

B）  ADHP用來檢測微量的H2O2；

Zhou, M.等研究表明ADHP（Amplex®Red）檢測過氧化物(wù)酶活性，最少能(néng)檢測1×10−5U/mL HRP；或H2O2，最少能(néng)檢測50nM H2O2。【文獻來源：Zhou M et al. A stable nonfluorescent derivative of resorufin for the fluorometric determination of trace hydrogen peroxide: applications in detecting the activity of phagocyte NADPH oxidase and other oxidases. Anal Biochem. 1997 Nov 15;253(2):162-8.】

4）  訂購信息：歡迎來電(diàn)咨詢021-54736159，或QQ:2971634497，1563822900。

四、過氧化氫清除劑（Hydrogen Peroxide Scavenger from MKBio）

五、過氧化氫活性檢測試劑盒（Hydrogen Peroxide assay kit）

懋康生(shēng)物(wù)作為(wèi)AAT bioquest在中國(guó)的授權代理商，提供該品牌的優質過氧化氫活性檢測試劑盒，比色法（Cat#: 11500）和熒光(guāng)法（Cat#:11501），請根據實驗具體需求以及現有檢測儀器(qì)來選擇合适産品。

1）試劑盒特征（比色法，Colorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit）

測定對象：溶液和細胞裂解液

檢測原理：使用Amplite™ IR過氧化物(wù)酶底物(wù)來定量檢測溶液和細胞提取物(wù)内的過氧化氫水(shuǐ)平。一(yī)旦過氧化氫氧化，無色的Amplite™ IR産生(shēng)強藍色産物(wù)，在pH 4-10範圍内不受pH影響。

測定儀器(qì)：吸光(guāng)度測定酶标儀（650nm）

結果展示：

2） 試劑盒特征（熒光(guāng)法，Fluorimetric Hydrogen Peroxide Assay Kit）

測定對象：溶液和細胞裂解液

檢測原理：使用Amplite™ red過氧化物(wù)酶底物(wù)來定量檢測溶液和細胞提取物(wù)内的過氧化氫水(shuǐ)平。

測定儀器(qì)：熒光(guāng)酶标儀（540nm/590nm）

結果示例：

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海夢澤生物科技有限公司是一(yī)家涉足于生(shēng)命科學和生(shēng)物(wù)技(jì)術(shù)領域研究的試劑、儀器(qì)和實驗室消耗品與實驗服務工(gōng)作，主要從(cóng)事(shì)細胞生(shēng)物(wù)學、植物(wù)學、分子生(shēng)物(wù)學、免疫學、生(shēng)物(wù)化學、蛋白(bái)組學。生(shēng)物(wù)制藥與診斷試劑研發生(shēng)産等領域。 本公司秉承“以人為(wèi)本，以誠為(wèi)信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為(wèi)廣大客戶提供優質産品。