活性氧（reactive oxygen species, ROS）熒光(guāng)探針系列之：

CellROX Oxidative Stress Reagents 氧化應激檢測試劑

背景需求：

氧化應激是由于反應性活性氧物(wù)質ROS産生(shēng)和細胞清除ROS的不平衡導緻的，ROS與核酸、蛋白(bái)質和脂質反應導緻細胞和組織損傷。ROS的過多(duō)累積往往引起某些疾病的發生(shēng)，包括炎症、動脈粥樣硬化、衰老以及衰老相(xiàng)關的退行性疾病等。為(wèi)此，ROS産生(shēng)及其治病機(jī)理的研究越來越受到(dào)科學家的關注。

基本介紹：

CellROX氧化應激試劑（CellROX Oxidative Stress Reagents）是專門(mén)設計用來可靠檢測活細胞内活性氧ROS的一(yī)系列熒光(guāng)探針。這些細胞膜滲透性的試劑當處于還(hái)原态時無熒光(guāng)或極弱熒光(guāng)，一(yī)旦被氧化後發出強熒光(guāng)。

Thermo Fisher (Invitrogen)提供三種CellROX氧化應激試劑，CellROX Green Reagent是一(yī)種DNA染料，一(yī)旦氧化後與DNA結合，因此，信号主要定位在細胞核和線粒體。相(xiàng)反，CellROX Orange Reagent和CellROX Deep Red Reagent的熒光(guāng)信号定位在細胞質。CellROX氧化應激試劑産生(shēng)的熒光(guāng)皆可用傳統的熒光(guāng)顯微鏡、高(gāo)内涵篩選儀器(qì)（HCS）、流式細胞儀、熒光(guāng)酶标儀或高(gāo)通(tōng)量篩選（HTS）。還(hái)與各種台式儀器(qì)兼容，比如FLoid™，Tali™，和Attune™儀器(qì)。

産品優勢：

CellROX氧化應激試劑（CellROX Oxidative Stress Reagents）具有以下(xià)優勢：

◇ 染色流程非常簡單（見(jiàn)Fig 1. CellROX Green Reagent的染色流程圖），試劑直接加入完全培養基或緩沖液内的細胞。

◇ 與傳統的ROS檢測探針相(xiàng)比，光(guāng)穩定性非常好。另外，某些CellROX氧化應激試劑經後期的甲醛固定和去污劑透化處理後，仍維持良好的熒光(guāng)信号（見(jiàn)Table 1. ROS檢測方法的比較表）。

◇ 通(tōng)過對内皮細胞維生(shēng)素K3誘導的ROS生(shēng)成的抑制實驗，發現CellROX氧化應激試劑特異性檢測ROS（見(jiàn)Fig 2 基于CellROX氧化應激試劑定量和統計分析氧化應激水(shuǐ)平）。

A）CellROX Green Reagent. 在MatTek激光(guāng)共聚焦專用玻底培養皿内接種培養牛肺動脈内皮細胞（BPAE）。之後用含維生(shēng)素K3（100µM）或不含維生(shēng)素K3的培養基37℃處理1h。向某些對照(zhào)和維生(shēng)素K3處理孔内加入N-乙酰半胱氨酸（NAC，50µM）。之後細胞用CellROX Green Reagent（5µM）和Hoechst 33342染色，前者加入完全培養基内37℃孵育30min。細胞經PBS清洗後，在Zeiss Axiovert倒置顯微鏡下(xià)檢測（40X物(wù)鏡）。N-乙酰半胱氨酸處理抑制TBHP誘導生(shēng)成的ROS，證實CellROX檢測到(dào)的熒光(guāng)信号來自(zì)化合物(wù)誘導産生(shēng)的ROS。

B）CellROX Orange Reagent. 在96孔闆内接種培養牛肺動脈内皮細胞（BPAE）。之後用含TBHP（200µM）或不含TBHP的培養基37℃處理2h。向某些對照(zhào)和TBHP處理孔内加入依布硒（依布硒啉）（Ebselen，10µM）。之後細胞用CellROX Orange Reagent（5µM）和Hoechst 33342染色，加入完全培養基内37℃孵育30min。細胞經PBS清洗後，在Thermo Fisher Cellomics ArrayScan® VTI分析。依布硒啉抑制TBHP誘導産生(shēng)的ROS，證明CellROX檢測到(dào)的熒光(guāng)信号來自(zì)化合物(wù)誘導産生(shēng)的ROS。

C）CellROX Deep Red Reagent. 在96孔闆内接種培養牛肺動脈内皮細胞（BPAE）。之後用含維生(shēng)素K3（100µM）或不含維生(shēng)素K3的培養基37℃處理1h。在孵育的後30min向某些對照(zhào)和維生(shēng)素K3處理孔内加入超氧化物(wù)清除劑MnTBAP（100µM）。之後細胞用CellROX Deep Red Reagent（5µM）和Hoechst 33342染色，加入完全培養基内37℃孵育30min。細胞經PBS清洗後，在Thermo Fisher Cellomics ArrayScan® VTI分析。

◇ CellROX氧化應激試劑能(néng)偶與其他細胞活力檢測探針聯合檢測，是一(yī)種非常有用的多(duō)重熒光(guāng)方法來測定大量的細胞現象（見(jiàn)Fig 3 人U2-OS細胞的氧化應激檢測）。

Fig 3. 表達Celllight Actin-RFP的人骨肉瘤細胞（U2-OS）用維生(shēng)素K3(Menadione, 100µM)處理1h。之後用CellROX Green Reagent（5µM）和Nucblue live cell stain（2滴/ml）于37℃染色30min。細胞清洗後置于活細胞成像液内檢測。

CellROX訂購信息：以上(shàng)所有産品均為(wèi)Life（Invitrogen）原裝正品，原始包裝為(wèi)10x50 µg（10支50µg單個(gè)包裝構成）。我司對C10444、C10422進行拆開(kāi)銷售，特惠價為(wèi)2180元/支，單支50µl，現貨銷售，歡迎訂購。

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