結腸癌造模誘導劑（Wako/Sigma）

偶氮甲烷（Azoxymethane，AOM）

基本描述：

偶氮甲烷（氧化偶氮甲烷），英文Azoxymethane，縮寫AOM，可有效誘導大小(xiǎo)鼠結腸癌，廣泛用作一(yī)種基質引起實驗動物(wù)發生(shēng)結腸腫瘤，從(cóng)而研究癌症預防物(wù)和癌症形成機(jī)制。另外，越來越多(duō)結腸癌病例的發生(shēng)，使得癌症預防物(wù)的研究也越來越流行。按照(zhào)每周一(yī)次皮下(xià)注射AOM（15mg/kg體重）進入大鼠體内，連續3周給藥。數周後能(néng)觀察到(dào)癌前期病變。

作用機(jī)制：偶氮甲烷（AOM）能(néng)誘導DNA産生(shēng)O6-甲基鳥嘌加合物(wù)，導緻G→A轉化。

主要應用：偶氮甲烷（AOM）常聯合DSS（Mw：36000-50000 Da）注射動物(wù)，建立結腸癌模型，用來研究癌症發展機(jī)制和化學預防。

基本特征：

1）  CAS NO. 25843-45-2

2）  線性分子式：CH3N=N(→O)CH3【C2H6N2O】

3）  分子量：74.08

4）  純度：≥98%

5）  結構式：

結腸癌（Colon cancer）模型建立案例：

1、  文獻來源：Wirtz S, et al. Chemically induced mouse models of intestinal inflammation. Nat Protoc. 2007; 2(3):541-6.

1.1    DSS溶液制備（2% DSS溶液）：溶解10gDSS于500ml無菌的飲用水(shuǐ)中，使用前溶液保存在4℃，最好現配現用。

1.2    AOM溶液制備：用無菌水(shuǐ)溶解AOM配制10 mg/ml的儲存液，分裝後放(fàng)到(dào)-20℃保存，避免反複凍融。使用之前，融化分裝母液并用無菌生(shēng)理鹽水(shuǐ)1:10倍稀釋。

1.3    小(xiǎo)鼠結腸炎相(xiàng)關的依賴性結直腸癌造模方法

1）  第1天稱重和标記小(xiǎo)鼠；

2）  按10 mg/kg體重的劑量腹腔注射AOM溶液；

3）  加DSS溶液灌滿小(xiǎo)鼠籠内的飲水(shuǐ)槽，以5ml DSS溶液/小(xiǎo)鼠/天加量，對照(zhào)小(xiǎo)鼠加等體積不含DSS的飲用水(shuǐ)；

4）  第3天清空籠子内剩餘的DSS飲用水(shuǐ)，過兩天重新裝滿DSS溶液；

5）  第5天清空籠子内剩餘的DSS飲用水(shuǐ)，重新裝滿DSS溶液；

6）  第8天清空籠子内剩餘的DSS溶液，換上(shàng)不含DSS的無菌水(shuǐ)持續14天；

7）  第22-26天重複第3）-5）步；

8）  第29天清空籠子内剩餘的DSS溶液，換上(shàng)不含DSS的無菌水(shuǐ)持續14天；

9）  第43-47天重複第3）-5）步；

10）第50天清空籠子内剩餘的DSS溶液，換上(shàng)不含DSS的無菌水(shuǐ)；

2、文獻來源：Neufert C, et al. An inducible mouse model of colon carcinogenesis for the analysis of sporadic and inflammation-driven tumor progression. Nat Protoc. 2007; 2(8):1998-2004.

2.1 DSS溶液制備（2.5% DSS溶液）：稱取2.5g DSS溶于100ml無菌水(shuǐ)，本溶液置于4℃可穩定保存1周。最好現配現用。

2.2 AOM溶液制備：用無菌水(shuǐ)溶解AOM配制10 mg/ml的儲存液，分裝後放(fàng)到(dào)-20℃保存，避免反複凍融。AOM在水(shuǐ)或生(shēng)理鹽水(shuǐ)中的穩定性高(gāo)于PBS緩沖液，且在玻璃管内穩定性好于塑料管。使用之前，融化分裝母液并用無菌生(shēng)理鹽水(shuǐ)1:10倍稀釋。

2.3 小(xiǎo)鼠結腸癌造模方法

1）第1天稱重，等數分組并标記小(xiǎo)鼠；

2）按照(zhào)10mg/kg體重的濃度計算(suàn)所需的AOM量，取适量的AOM儲存液（10mg/ml）用無菌生(shēng)理鹽水(shuǐ)1:10倍稀釋。

3）腹腔注射AOM工(gōng)作液（劑量10mg/kg體重，則10g體重小(xiǎo)鼠注射100ul工(gōng)作液）到(dào)實驗組小(xiǎo)鼠，同時注射等體積的無菌生(shēng)理鹽水(shuǐ)到(dào)對照(zhào)組小(xiǎo)鼠。

4）自(zì)此步之後，按照(zhào)兩種方法繼續實驗。若建立自(zì)發性腫瘤進展模型，見(jiàn)方案A；若建立慢(màn)性炎症驅動的腫瘤進展模型，見(jiàn)方案B。

方案A，自(zì)發性腫瘤進展模型

A1，第8天重複步驟1）-3）；

A2，第15天重複步驟1）-3）；

A3，第22天重複步驟1）-3）；

A4，第29天重複步驟1）-3）；

A5，第36天重複步驟1）-3）；【到(dào)這步每隻小(xiǎo)鼠都腹腔注射給藥6次】

A6，第一(yī)次注射後的3個(gè)月(yuè)評估癌前病變，此時不需處死動物(wù)。

A7，第一(yī)次注射後的6個(gè)月(yuè)評估腫瘤發展。

方案B，慢(màn)性炎症驅動的腫瘤進展（Chronic inflammation-driven tumor progression）

B1，制備2.5%（wt/v）DSS溶液。此濃度的DSS能(néng)讓FVB/N小(xiǎo)鼠和其他品系産生(shēng)良好的造模效果。

B2，按3天的用量加DSS溶液灌滿小(xiǎo)鼠籠内的飲水(shuǐ)槽，以5ml DSS溶液/小(xiǎo)鼠/天用量，對照(zhào)小(xiǎo)鼠加等體積不含DSS的飲用水(shuǐ)；

B3，第4天清空飲水(shuǐ)槽内殘留DSS溶液，并且重新灌滿另2天所需量的新鮮DSS溶液。

B4，第6天清空飲水(shuǐ)槽内殘留DSS溶液，并且重新灌滿另2天所需量的新鮮DSS溶液。

B5，第8天清空飲水(shuǐ)槽内殘留DSS溶液，并且重新灌滿滅菌水(shuǐ)。

B6，第22-29日重複步驟B1）-B5）。

B7，第40日評估癌前病變，此時不需處死動物(wù)。

B8，第53-60日重複步驟B1）-B5）。

B9，第80日評估腫瘤發展。

2.4 AOM誘導腫瘤圖示（圖1）

圖1.内窺鏡腫瘤調研。通(tōng)過迷你腔鏡監測AOM誘導的腫瘤形成情況。a）還(hái)能(néng)用于縱向研究；b）對于腫瘤負荷分析，每隻小(xiǎo)鼠的腫瘤大小(xiǎo)按照(zhào)預設的時間點記錄并做總和。

Azoxymethane（AOM）訂購信息：原裝正品，歡迎來電(diàn)咨詢，021-54736159。

注意事(shì)項

為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

 — — Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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