AO/EB Double Staining Kit AO/EB雙染試劑盒

關鍵詞：

吖啶橙（Acridine Orange，AO）；溴化乙錠（Ethidium Bromide, EB）；Apoptotic cell凋亡細胞；Necrotic cells壞死細胞；Annexin V/PI細胞凋亡雙染；

産品信息

産品描述

吖啶橙（Acridine Orange，AO）是一(yī)種異染的核酸結合染料，具細胞膜滲透性，通(tōng)過插入或靜(jìng)電(diàn)吸引的方式與DNA或RNA結合。當與雙鏈DNA（dsDNA）結合發射綠色熒光(guāng)（Ex/Em=502/525nm），與單鏈DNA（ssDNA）或RNA結合發射紅(hóng)色熒光(guāng)（Ex/Em=460/650nm），少量結合呈橙紅(hóng)色熒光(guāng)。溴化乙錠（Ethidium Bromide, EB）是一(yī)種多(duō)環芳烴熒光(guāng)小(xiǎo)分子和核酸插入劑，嵌合到(dào)雙鏈DNA或RNA的堿基對内，無堿基特異性，呈紅(hóng)色熒光(guāng)（（Ex/Em=518/605nm）。EB不具細胞膜滲透性。

吖啶橙（AO）和溴化乙錠（EB）常常聯合使用來觀察細胞核變化和凋亡小(xiǎo)體形成，這些都是凋亡的特征。兩者結合能(néng)區分活細胞、凋亡細胞和壞死細胞。工(gōng)作原理在于吖啶橙能(néng)同時染活細胞和死細胞，EB隻能(néng)對喪失膜完整性的細胞進行染色。活細胞呈均勻的綠色。早期凋亡細胞呈綠色，并且在細胞核能(néng)看(kàn)到(dào)亮綠色的點，由于染色體濃縮和核斷裂。晚期凋亡細胞也會(huì)被EB著(zhe)色，從(cóng)而染成橙紅(hóng)色，但，與壞死細胞相(xiàng)比，晚期凋亡細胞會(huì)有濃縮和常常斷裂的核。壞死細胞也被染成橙紅(hóng)色，但會(huì)有和活細胞相(xiàng)似的核形态，沒有濃縮的染色體。

我司（懋康生(shēng)物(wù)）提供的AO/EB雙染試劑盒（AO/EB Double Staining Kit）提供完整的試劑，操作簡單，根據說明書操作能(néng)做100個(gè)反應。

産品包裝

保存與運輸方法

保存：4-25℃避光(guāng)保存，詳見(jiàn)瓶上(shàng)标簽。1年(nián)有效。

運輸：冰袋運輸。

注意事(shì)項

1）AO與EB都有一(yī)定毒性，請小(xiǎo)心操作。

2）為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

使用方法

1.染色工(gōng)作液的制備

于正式實驗前，取吖啶橙染液（試劑A）、溴化乙錠染液（試劑B）、稀釋緩沖液（試劑C），按照(zhào)A:B:C=1:1:8的比例稀釋成所需的AO/EB染色工(gōng)作液。

2.細胞準備

貼壁細胞：按照(zhào)常規方法消化。于1000rpm離心5min，收集細胞沉澱，用PBS清洗一(yī)次。

懸浮細胞：于1000rpm離心5min，收集細胞沉澱，用PBS清洗一(yī)次。

之後用稀釋緩沖液（試劑C）重懸細胞，細胞計數，調整細胞密度為(wèi)0.5-5×106個(gè)/ml。

3.染色

每25μl細胞懸液中，加入2μl新鮮制備的AO/EB染色工(gōng)作液，輕輕混合均勻。室溫孵育5~10min。

4.觀察

取幹淨載玻片，滴加5~10μl染色的細胞懸液，蓋上(shàng)蓋玻片。使用熒光(guāng)顯微鏡的熒光(guāng)素濾片和60倍放(fàng)大的物(wù)鏡來觀察和計數。該測定至少重複三次，每次觀察的總細胞至少100個(gè)。

【注意】：根據細胞類型選擇理想的物(wù)鏡放(fàng)大倍數（更高(gāo)或更低(dī)），前提是必須看(kàn)清核形态。

應用示例（來自(zì)文獻）：

文獻：Dual AO/EB Staining to Detect Apoptosis in Osteosarcoma Cells Compared with Flow Cytometry.

染色方法：Dual fluorescent staining solution (1 μl) containing 100 μg/ml AO and 100 μg/ml EB (AO/EB) was added to each suspension and then covered with a coverslip. The morphology of apoptotic cells was examined and 500 cells were counted within 20 min using a fluorescent microscope (OLYMPUS). Dual acridine orange/ethidium bromide (AO/EB) staining method was repeated 3 times at least.

Fig. (A)陰性對照(zhào)細胞（正常細胞）：環形細胞核均勻分布在細胞中央。(B)實驗組(早期凋亡細胞):吖啶橙（AO）染色後的細胞核呈黃綠色熒光(guāng)，以月(yuè)牙形或顆粒的形态聚集位于細胞的一(yī)邊。(C)實驗組(晚期凋亡細胞):經EB染色後的細胞核呈橙紅(hóng)熒光(guāng)，集中聚集且偏重定位。(D)壞死細胞：壞死細胞體積增加，顯示平整的橙紅(hóng)色熒光(guāng)和不清晰的輪廓。細胞正要溶解或接近崩潰。

相(xiàng)關産品

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