PEI 25K Transfection Reagent

線性化聚乙烯亞胺轉染試劑

搜索關鍵詞：

PEI25K;PEI 25000;PEI 40K;線性化聚乙烯亞胺PEI；PEI轉染試劑；PEI 25000；CAS：9002-98-6, 26913-06-4；Polysciences;

産品信息

【溫馨提示】：見(jiàn)我司整理的線性化聚乙烯亞胺PEI 25000/ PEI40000轉染試劑專題。

産品描述

線性化聚乙烯亞胺PEI 25，000，一(yī)種高(gāo)電(diàn)荷陽離子聚合物(wù)，非常容易結合于高(gāo)電(diàn)荷陰離子基質。工(gōng)業(yè)應用上(shàng)，線性化PEI可改善負電(diàn)荷染料的物(wù)理外觀，以調整染料的化學特性和增強染料與固相(xiàng)基質的黏附能(néng)力，常用作黏附增強劑，作用同多(duō)聚賴氨酸（poly-lysine）；科研應用上(shàng)，線性化PEI能(néng)與DNA或其他負電(diàn)荷生(shēng)物(wù)大分子簡單結合，正是這一(yī)特性，使得成為(wèi)一(yī)種非常行之有效的載體運輸介質（Vector carrier），即轉染試劑。

線性化聚乙烯亞胺PEI 25000（Polyethylenimine Linear, MW 25000）是一(yī)款優秀、低(dī)成本、值得信賴的瞬時性轉染試劑。在HEK293和CHO表達系統中，PEI在寬廣的生(shēng)産規模内（從(cóng)96孔闆到(dào)100L生(shēng)物(wù)反應器(qì)）能(néng)提供連續性的高(gāo)基因表達。

本品是PEI25K的無菌溶液，濃度為(wèi)1mg/ml，直接使用即可。按照(zhào)DNA：PEI25K=1：3的比例來操作，1ml本品足以用來轉染330μg DNA，或者，6孔闆内約做80-160次轉染。

保存與運輸方法

保存：-20℃保存，1年(nián)有效。

運輸：冰袋運輸。

注意事(shì)項

1）收到(dào)本品或第一(yī)次使用，請根據單次用量分裝後置于-20℃凍存，盡量降低(dī)反複凍融次數。

2）本品為(wèi)無菌溶液，請操作過程中執行無菌操作。

3）請務必使用高(gāo)質量的無内毒素質粒。通(tōng)過260 nm光(guāng)吸收測定DNA濃度，260nm / 280nm比值确定DNA純度（比值應該在1.8～2.0的範圍之内）。如有可能(néng)，請通(tōng)過瓊脂糖凝膠電(diàn)泳檢測質粒的完整性。

4）使用适當保存和經常傳代的健康細胞。确保培養基沒有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期複蘇的液氮凍存細胞，請在轉染前至少傳代兩次。

5）對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞，在轉染前兩天鋪闆可顯著提高(gāo)重組蛋白(bái)的表達水(shuǐ)平。如果選擇轉染前兩天鋪闆，可适當降低(dī)鋪闆密度，以确保轉染時細胞的彙合度仍為(wèi)60-80%。

6）對于接觸抑制敏感的細胞，可适當降低(dī)鋪闆密度。

7）推薦用商業(yè)化的無血清培養基比如Opti-MEM I來稀釋DNA和PEI25K，制備轉染複合物(wù)。

8）轉染過程請不要使用抗生(shēng)素。

9）為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

一(yī)、操作方法（貼壁細胞）

1.1鋪闆

a）轉染前18-24h進行鋪闆，調整合适的細胞密度（參考表1），使其在轉染時細胞密度達60-80%。

【注意】：高(gāo)血清水(shuǐ)平會(huì)抑制轉染效率，大多(duō)數情況，低(dī)血清水(shuǐ)平（≤5%）能(néng)産生(shēng)最高(gāo)的轉染效率。

1.2轉染步驟（以6孔闆的單孔為(wèi)例）

a）轉染前1-2h，每孔替換為(wèi)3ml含2%血清的新鮮生(shēng)長(cháng)培養基。

b）制備PEI25K-DNA轉染複合物(wù)（嚴格按照(zhào)以下(xià)步驟進行）：①往300μl無血清培養基（比如：Opti-MEM I）加入2μg質粒DNA,低(dī)速混合/渦旋均勻；②往混合物(wù)内加入6μl PEI25K（1mg/ml）（DNA/PEI25K=1：3），低(dī)速渦旋5s；③無菌環境，室溫靜(jìng)置30min以形成PEI25K-DNA轉染複合物(wù)。④用移液槍上(shàng)下(xià)吹打3次，輕輕混勻。

c）将PEI25K-DNA轉染複合物(wù)轉到(dào)孔内。輕輕晃動培養皿或輕微渦旋，使得複合物(wù)分散均勻。

【注意】：以上(shàng)步驟可通(tōng)過調整PEI25K-DNA複合物(wù)在無血清培養基内的體積（為(wèi)培養總體積的10%）來進行放(fàng)大或縮小(xiǎo)（可參考表2）。

1.3 孵育

a）37℃，5% CO2培養箱内培養細胞，轉染後12-18h，去除含PEI25K-DNA複合物(wù)的培養液，更換新鮮的生(shēng)長(cháng)培養基。

b）通(tōng)常，轉染後36-48h能(néng)檢測到(dào)重組蛋白(bái)表達。一(yī)般在轉染後72-96h能(néng)觀察到(dào)最大水(shuǐ)平的表達。

PEI25K客戶使用案例（逐步增加中）

圖片描述：以人結腸癌細胞（HCT116）為(wèi)對象，按照(zhào)質粒DNA：PEI 2,5000（MX2202-250MG）=1:4的比例制備轉染混合物(wù)并轉染進入HCT116細胞，36h後于熒光(guāng)顯微鏡下(xià)觀察轉染效率（GFP，綠色熒光(guāng)蛋白(bái)）。

【數據來源：廈門(mén)大學 于老師(shī)】

相(xiàng)關産品

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