PEI 40K Transfection Reagent

線性化聚乙烯亞胺轉染試劑

産品标簽

PEI 40K轉染試劑，PEI 25K轉染試劑；線性化聚乙烯亞胺；PEI 40000；PEI25000；Lipofectamine 2000；Lipofectamine 3000；

産品信息

産品描述

線性化聚乙烯亞胺PEI 40000（Polyethylenimine Linear, MW 40000; PEI 40K）是一(yī)款優秀和低(dī)成本的瞬時性轉染試劑。在HEK293和CHO表達系統中，PEI在寬廣的生(shēng)産規模内（從(cóng)96孔闆到(dào)100L生(shēng)物(wù)反應器(qì)）能(néng)提供連續性的高(gāo)基因表達。

作為(wèi)線性化聚乙烯亞胺PEI25000（PEI 25K）的升級産品，操作更簡單，且具有連續性的更高(gāo)表達滴度，優勢在于：1）PEI 25K轉染溶液通(tōng)常需幾個(gè)小(xiǎo)時來配置，然而，PEI 40K在2個(gè)小(xiǎo)時内即可轉化為(wèi)即用型的溶液；2）PEI 25K含4-11%殘留的丙酰基基團，該基團阻止聚合物(wù)骨架緊密結合到(dào)DNA。然而，PEI 40K完全去丙酰化結構，意味著(zhe)每個(gè)批次保持連續性更高(gāo)轉化效率。

本品是PEI 40K的無菌溶液，濃度為(wèi)1mg/ml，直接使用即可。1ml本品足以用來轉染250μg DNA，或者，6孔闆内約做60-120次轉染。

保存與運輸方法

保存：+4℃保存，1年(nián)有效。

運輸：室溫運輸。

注意事(shì)項

1）請務必使用高(gāo)質量的無内毒素質粒。通(tōng)過260 nm光(guāng)吸收測定DNA濃度，260nm/280nm比值确定DNA純度（比值應該在1.8～2.0的範圍之内）。如有可能(néng)，請通(tōng)過瓊脂糖凝膠電(diàn)泳檢測質粒的完整性。

2）使用适當保存和經常傳代的健康細胞。确保培養基沒有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期複蘇的液氮凍存細胞，請在轉染前至少傳代兩次。

3）對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞，在轉染前兩天鋪闆可顯著提高(gāo)重組蛋白(bái)的表達水(shuǐ)平。如果選擇轉染前兩天鋪闆，可适當降低(dī)鋪闆密度，以确保轉染時細胞的彙合度仍為(wèi)60-80%。

4）對于接觸抑制敏感的細胞，可适當降低(dī)鋪闆密度。

5）為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

試劑準備

稀釋液準備：用細胞培養級水(shuǐ)來制備150mM NaCl（比如：稱取876.6mg高(gāo)純NaCl加入80ml細胞培養級水(shuǐ)，充分溶解後，定容到(dào)100ml，經0.1或0.2μm濾膜過濾除菌。）

【注意】：也可使用商業(yè)化的無血清培養基（比如Opti-MEM I）來制備轉染複合物(wù)。

一(yī)、操作方法（貼壁細胞）

1.1鋪闆

a）轉染前18-24h進行鋪闆，調整合适的細胞密度（參考表1），使其在轉染時細胞密度達60-80%。

【注意】：高(gāo)血清水(shuǐ)平會(huì)抑制轉染效率，大多(duō)數情況，低(dī)血清水(shuǐ)平（≤5%）能(néng)産生(shēng)最高(gāo)的轉染效率。

1.2轉染步驟（以6孔闆的單孔為(wèi)例）

a）轉染前1-2h，每孔替換為(wèi)3ml含2%血清的新鮮生(shēng)長(cháng)培養基。

b）制備PEI 40K-DNA轉染複合物(wù)（嚴格按照(zhào)順序進行）：①往300μl稀釋液内加入2μg質粒DNA,低(dī)速混合/渦旋均勻；②往混合物(wù)内加入8μl PEI 40K（1mg/ml）（DNA/PEI 40K=1：4），低(dī)速渦旋5s；③無菌環境，室溫靜(jìng)置20min以形成PEI 40K-DNA轉染複合物(wù)。④用移液槍上(shàng)下(xià)吹打3次，輕輕混勻。

c）将PEI 40K-DNA轉染複合物(wù)轉到(dào)孔内。輕輕晃動培養皿或輕微渦旋，使得複合物(wù)分散均勻。

【注意】：以上(shàng)步驟可通(tōng)過調整PEI 40K-DNA複合物(wù)在稀釋液内的體積（稀釋液為(wèi)培養總體積的10%）來進行放(fàng)大或縮小(xiǎo)（可參考表2）。确保DNA/PEI 40K=1：4！

1.3 孵育

a）37℃，5% CO2培養箱内培養細胞，轉染後12-18h，去除含PEI 40K-DNA複合物(wù)的培養液，更換新鮮的生(shēng)長(cháng)培養基。

b）通(tōng)常，轉染後36-48h能(néng)檢測到(dào)重組蛋白(bái)表達。一(yī)般在轉染後72-96h能(néng)觀察到(dào)最大水(shuǐ)平的表達。

二、操作方法（懸浮細胞）

2.1接種準備

于轉染前2-3h，按照(zhào)1.0×106/ml培養接種細胞。

2.2 轉染步驟（以：50ml培養物(wù)/250ml搖瓶為(wèi)例）

a）制備PEI 40K-DNA轉染複合物(wù)（嚴格按照(zhào)順序進行）：①往2.5ml稀釋液内加入50μg質粒DNA,低(dī)速混合/渦旋均勻；②往混合物(wù)内加入200μl PEI 40K（1mg/ml）（DNA/PEI 40K=1：4），低(dī)速渦旋5s；③無菌環境，室溫靜(jìng)置20min以形成PEI 40K-DNA轉染複合物(wù)。④用移液槍上(shàng)下(xià)吹打3次，輕輕混勻。

b）将全部轉染溶液加入25ml懸浮細胞内。

c）将懸浮細胞放(fàng)回培養箱内。

2.3 孵育

a）在培養箱内搖動培養2-3h，之後加入25ml新鮮生(shēng)長(cháng)培養基。重新放(fàng)回培養箱。

b）通(tōng)常，轉染後36-48h能(néng)檢測到(dào)重組蛋白(bái)表達。一(yī)般在轉染後72-96h能(néng)觀察到(dào)最大水(shuǐ)平的表達。

相(xiàng)關産品

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