目錄号 | MX2205-10ML | 售價 | 880.00元 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
規格 | 10ml | 運輸溫度 | 室溫運輸 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
其他名稱 | 線性化聚乙烯亞胺 | 保存溫度 | 4℃保存 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CAS号 | 49553-93-7 | 有效期 | 1年(nián) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
應用 | 轉染試劑 | 訂購數量 |
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
産品簡介: PEI 40K Transfection Reagent 線性化聚乙烯亞胺轉染試劑
産品标簽 PEI 40K轉染試劑,PEI 25K轉染試劑;線性化聚乙烯亞胺;PEI 40000;PEI25000;Lipofectamine 2000;Lipofectamine 3000;
産品信息
産品描述 線性化聚乙烯亞胺PEI 40000(Polyethylenimine Linear, MW 40000; PEI 40K)是一(yī)款優秀和低(dī)成本的瞬時性轉染試劑。在HEK293和CHO表達系統中,PEI在寬廣的生(shēng)産規模内(從(cóng)96孔闆到(dào)100L生(shēng)物(wù)反應器(qì))能(néng)提供連續性的高(gāo)基因表達。 作為(wèi)線性化聚乙烯亞胺PEI25000(PEI 25K)的升級産品,操作更簡單,且具有連續性的更高(gāo)表達滴度,優勢在于:1)PEI 25K轉染溶液通(tōng)常需幾個(gè)小(xiǎo)時來配置,然而,PEI 40K在2個(gè)小(xiǎo)時内即可轉化為(wèi)即用型的溶液;2)PEI 25K含4-11%殘留的丙酰基基團,該基團阻止聚合物(wù)骨架緊密結合到(dào)DNA。然而,PEI 40K完全去丙酰化結構,意味著(zhe)每個(gè)批次保持連續性更高(gāo)轉化效率。 本品是PEI 40K的無菌溶液,濃度為(wèi)1mg/ml,直接使用即可。1ml本品足以用來轉染250μg DNA,或者,6孔闆内約做60-120次轉染。
保存與運輸方法 保存:+4℃保存,1年(nián)有效。 運輸:室溫運輸。
注意事(shì)項 1)請務必使用高(gāo)質量的無内毒素質粒。通(tōng)過260 nm光(guāng)吸收測定DNA濃度,260nm/280nm比值确定DNA純度(比值應該在1.8~2.0的範圍之内)。如有可能(néng),請通(tōng)過瓊脂糖凝膠電(diàn)泳檢測質粒的完整性。 2)使用适當保存和經常傳代的健康細胞。确保培養基沒有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期複蘇的液氮凍存細胞,請在轉染前至少傳代兩次。 3)對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,在轉染前兩天鋪闆可顯著提高(gāo)重組蛋白(bái)的表達水(shuǐ)平。如果選擇轉染前兩天鋪闆,可适當降低(dī)鋪闆密度,以确保轉染時細胞的彙合度仍為(wèi)60-80%。 4)對于接觸抑制敏感的細胞,可适當降低(dī)鋪闆密度。 5)為(wèi)了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。
試劑準備 稀釋液準備:用細胞培養級水(shuǐ)來制備150mM NaCl(比如:稱取876.6mg高(gāo)純NaCl加入80ml細胞培養級水(shuǐ),充分溶解後,定容到(dào)100ml,經0.1或0.2μm濾膜過濾除菌。) 【注意】:也可使用商業(yè)化的無血清培養基(比如Opti-MEM I)來制備轉染複合物(wù)。
一(yī)、操作方法(貼壁細胞) 1.1鋪闆 a)轉染前18-24h進行鋪闆,調整合适的細胞密度(參考表1),使其在轉染時細胞密度達60-80%。 【注意】:高(gāo)血清水(shuǐ)平會(huì)抑制轉染效率,大多(duō)數情況,低(dī)血清水(shuǐ)平(≤5%)能(néng)産生(shēng)最高(gāo)的轉染效率。
1.2轉染步驟(以6孔闆的單孔為(wèi)例) a)轉染前1-2h,每孔替換為(wèi)3ml含2%血清的新鮮生(shēng)長(cháng)培養基。 b)制備PEI 40K-DNA轉染複合物(wù)(嚴格按照(zhào)順序進行):①往300μl稀釋液内加入2μg質粒DNA,低(dī)速混合/渦旋均勻;②往混合物(wù)内加入8μl PEI 40K(1mg/ml)(DNA/PEI 40K=1:4),低(dī)速渦旋5s;③無菌環境,室溫靜(jìng)置20min以形成PEI 40K-DNA轉染複合物(wù)。④用移液槍上(shàng)下(xià)吹打3次,輕輕混勻。 c)将PEI 40K-DNA轉染複合物(wù)轉到(dào)孔内。輕輕晃動培養皿或輕微渦旋,使得複合物(wù)分散均勻。 【注意】:以上(shàng)步驟可通(tōng)過調整PEI 40K-DNA複合物(wù)在稀釋液内的體積(稀釋液為(wèi)培養總體積的10%)來進行放(fàng)大或縮小(xiǎo)(可參考表2)。确保DNA/PEI 40K=1:4!
1.3 孵育 a)37℃,5% CO2培養箱内培養細胞,轉染後12-18h,去除含PEI 40K-DNA複合物(wù)的培養液,更換新鮮的生(shēng)長(cháng)培養基。 b)通(tōng)常,轉染後36-48h能(néng)檢測到(dào)重組蛋白(bái)表達。一(yī)般在轉染後72-96h能(néng)觀察到(dào)最大水(shuǐ)平的表達。
二、操作方法(懸浮細胞) 2.1接種準備 于轉染前2-3h,按照(zhào)1.0×106/ml培養接種細胞。 2.2 轉染步驟(以:50ml培養物(wù)/250ml搖瓶為(wèi)例) a)制備PEI 40K-DNA轉染複合物(wù)(嚴格按照(zhào)順序進行):①往2.5ml稀釋液内加入50μg質粒DNA,低(dī)速混合/渦旋均勻;②往混合物(wù)内加入200μl PEI 40K(1mg/ml)(DNA/PEI 40K=1:4),低(dī)速渦旋5s;③無菌環境,室溫靜(jìng)置20min以形成PEI 40K-DNA轉染複合物(wù)。④用移液槍上(shàng)下(xià)吹打3次,輕輕混勻。 b)将全部轉染溶液加入25ml懸浮細胞内。 c)将懸浮細胞放(fàng)回培養箱内。 2.3 孵育 a)在培養箱内搖動培養2-3h,之後加入25ml新鮮生(shēng)長(cháng)培養基。重新放(fàng)回培養箱。 b)通(tōng)常,轉染後36-48h能(néng)檢測到(dào)重組蛋白(bái)表達。一(yī)般在轉染後72-96h能(néng)觀察到(dào)最大水(shuǐ)平的表達。
相(xiàng)關産品
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海夢澤生物科技有限公司是一(yī)家涉足于生(shēng)命科學和生(shēng)物(wù)技(jì)術(shù)領域研究的試劑、儀器(qì)和實驗室消耗品與實驗服務工(gōng)作,主要從(cóng)事(shì)細胞生(shēng)物(wù)學、植物(wù)學、分子生(shēng)物(wù)學、免疫學、生(shēng)物(wù)化學、蛋白(bái)組學。生(shēng)物(wù)制藥與診斷試劑研發生(shēng)産等領域。 本公司秉承“以人為(wèi)本,以誠為(wèi)信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為(wèi)廣大客戶提供優質産品。 |