Tetramethylrhodamine Methyl Ester (TMRM)

四甲基羅丹明甲酯（線粒體膜電(diàn)位熒光(guāng)探針）

産品關鍵詞：

TMRM四甲基羅丹明甲酯；TMRE；4-Di-2-ASP；DASPEI；Styryl dye 苯乙烯染料；MitoTracker® Green FM；CAS NO：115532-50-8；

産品信息

【溫馨提示】：見(jiàn)我司懋康生(shēng)物(wù)（maokangbio）提供的線粒體熒光(guāng)探針産品專題。

産品描述

帶正電(diàn)荷的羅丹明染料（比如羅丹明酯）選擇性定位在線粒體，因此，普遍用來标記活細胞線粒體。除了選擇性标記線粒體外，與JC-1一(yī)樣，四甲基羅丹明甲酯（Tetramethylrhodamine Methyl Ester,TMRM）廣泛用來測定線粒體膜電(diàn)位。TMRM具細胞膜滲透性，聚集在活線粒體（完整膜電(diàn)位）上(shàng)。如果細胞健康且線粒體發揮功能(néng)，發出明亮的熒光(guāng)信号。一(yī)旦線粒體膜電(diàn)位喪失，TMRM不再累積，熒光(guāng)信号減弱或消失。TMRM信号可用熒光(guāng)顯微鏡、流式細胞儀、細胞分選、高(gāo)通(tōng)量篩選和高(gāo)内涵細胞成像分析進行檢測。TMRM具有以下(xià)特征：①适用于線粒體膜電(diàn)位的活細胞動态學研究，不适用于固定細胞。②可用RFP/TRITC濾片設置觀察，最大激發和發射波長(cháng)是548/574nm。③與綠色、深紅(hóng)色、紫色和藍色發射探針兼容，比如：GFP、DAPI、Hoechst，Lysotracker deep red，做多(duō)重染色。

産品特性

1） CAS NO.：115532-50-8

2） 化學名：3,6-bis(dimethylamino)-9-[2-(methoxycarbonyl)phenyl]-xanthylium, perchlorate

3） 同義名：Tetramethylrhodamine methyl ester, perchlorate 四甲基羅丹明甲酯高(gāo)氯酸鹽；TMR methyl ester TMR甲酯；

4） 分子式：C25H25ClN2O7

5） 分子量：500.93

6） Ex/Em：549/574nm

7） 純度：≥95%

8） 溶解性：溶于DMSO

9） 化學結構式： 

保存與運輸方法

保存：-20℃避光(guāng)幹燥保存，至少一(yī)年(nián)有效。 

運輸：室溫運輸。

注意事(shì)項

1） 熒光(guāng)染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光(guāng)，以減緩熒光(guāng)淬滅。

2） 為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

染色示例

Ref：Joshi DC, Bakowska JC. Determination of mitochondrial membrane potential and reactive oxygen species in live rat cortical neurons. J Vis Exp. 2011 May 23;(51):2704. doi: 10.3791/2704. PMID: 21654619; PMCID: PMC3143685.

Figure 1. Assessment of mitochondrial membrane potential and ROS levels in live rat cortical neurons. (A) Representative fluorescence image of cortical neurons loaded with TMRM. After scanning the baseline TMRM fluorescence, neurons were treated with the protonophore FCCP (1 μM). To the right is a pseudocolor intensity bar of TMRM fluorescence with bright yellow and black representing maximum and minimum intensity, respectively. The loss of TMRM fluorescence from the mitochondrial regions indicates the collapse of ΔΨm upon FCCP treatment (panel B). The quantitative representation of change in TMRM fluorescence intensity at different time points before and after FCCP treatment is shown in panel C. 

操作步驟

1.儲存液制備

1.1将低(dī)溫保存的産品置于室溫回溫至少20min（此步非常重要，請勿忽略操作），低(dī)速離心片刻使粉末沉至管底。

1.2對于25mg粉末，往瓶内加入5ml高(gāo)質量無水(shuǐ)DMSO配制成10mM儲存液；由于TMRM的使用濃度比較低(dī)，可再配制一(yī)個(gè)中間儲存濃度（比如：100μM），比如：取10μl TMRM（10mM）加入990μl DMSO，充分混勻後，即得到(dào)100μM的中間儲存濃度。

2.工(gōng)作液制備

于正式實驗前，用無血清細胞培養基稀釋母液到(dào)适宜的工(gōng)作濃度，比如：100nM。根據不同的實驗用途和細胞類型，TMRM的工(gōng)作濃度範圍一(yī)般在20nM~1000nM，初次使用務必優化獲得最佳工(gōng)作濃度。工(gōng)作液需現配現用。

3.染色步驟（以熒光(guāng)成像為(wèi)例）

注①：對于熒光(guāng)成像分析，常用的TMRM工(gōng)作濃度範圍是50-200nM。

注②：如果需測定某藥物(wù)對膜電(diàn)位的作用，需提前處理細胞，再用探針進行後續檢測。同時需要設置藥物(wù)未處理組和藥物(wù)處理組。

注③：如果需要陽性對照(zhào)，可選擇FCCP（Cat#：MX3259）或CCCP（Cat#：MX3258），這兩種化合物(wù)都是解偶聯劑，能(néng)夠降低(dī)線粒體膜電(diàn)位，從(cóng)而防止TMRM染色。

3.1 培養細胞。

3.2去除培養基，用生(shēng)理緩沖液比如PBS清洗1-2次。

3.3 加入新鮮配好的工(gōng)作液完全覆蓋細胞。

3.4于37℃避光(guāng)孵育15~45min。

3.5【可選】為(wèi)了增高(gāo)靈敏度，用PBS或類似緩沖液清洗細胞1~2次。

3.6熒光(guāng)成像。對于熒光(guāng)顯微鏡，用能(néng)夠觀察Ex/Em=548/573nm的濾片來進行觀察。

相(xiàng)關産品

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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