EDC HCl 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽

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産品關鍵詞

EDC 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺；EDC HCl；sulfo-NHS N-羟基硫代琥珀酰亞胺；Carboxyl activating agent 羧基活化劑；Peptide synthesis 多(duō)肽合成；CAS：25952-53-8；

産品信息

産品描述

1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride, EDC HCl）是一(yī)種水(shuǐ)溶性碳二亞胺衍生(shēng)物(wù)，用于偶聯半抗原到(dào)蛋白(bái)和多(duō)肽上(shàng)。EDC HCl能(néng)用來修飾NMDA受體，以及肽合成中用作一(yī)種縮合劑。

EDC HCl是一(yī)種零長(cháng)度交聯劑，用來偶聯羧基到(dào)伯胺上(shàng)。這一(yī)交聯劑應用非常廣泛，比如：肽合成中形成酰胺鍵，連接半抗原到(dào)載體蛋白(bái)上(shàng)形成免疫原，通(tōng)過5'磷酸基團标記核酸，制備生(shēng)物(wù)分子具胺反應指向的N-羟基琥珀酰亞胺酯（NHS Ester）。

EDC首先與羧基反應産生(shēng)一(yī)個(gè)具胺反應性的O-酰基異脲中間體，如果這一(yī)中間體未碰到(dào)胺，會(huì)水(shuǐ)解再生(shēng)成羧基。當體系内含N-羟基硫代琥珀酰亞胺（sulfo-NHS），EDC能(néng)将羧基轉化成具胺反應性的N-羟基硫代琥珀酰亞胺酯（sulfo-NHS ester）。這一(yī)步隻需将EDC與含羧基分子混合，并加入sulfo-NHS即可完成。

産品特性

1）   CAS NO：25952-53-8

2）   英文同義名：EDC Hydrochloride; EDAC HCl; EDAC Hydrochloride; WSC HCl; N-(3-Dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide hydrochloride; 3-(ethyliminomethylideneamino)-N,N- dimethylpropan-1-amine hydrochloride; 1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride;

3）   中文同義名：EDC鹽酸鹽；EDAC 鹽酸鹽；WSC 鹽酸鹽；1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽；N-乙基-N′-(3-二甲基氨丙基)碳二亞胺鹽酸鹽；

4）   分子式：C8H17N3·HCl

5）   分子量：191.7 g/mol

6）   純度：≥98%

7）   外觀：白(bái)色至灰白(bái)色粉末

8）   溶解性：溶于水(shuǐ)

9）   化學結構式：

保存與運輸方法

保存：-20℃幹燥保存，至少2年(nián)有效。

運輸：冰袋運輸。

注意事(shì)項

為(wèi)了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一(yī)次性手套操作。

操作步驟【僅做參考】

一(yī)、  用EDC将半抗原偶聯到(dào)載體蛋白(bái)上(shàng)

1.1   所需材料

載體蛋白(bái)：2mg 牛血清白(bái)蛋白(bái)（BSA）、卵清白(bái)蛋白(bái)（OVA）或鑰孔血藍蛋白(bái)（KLH）

共轭緩沖液：0.1M MES，pH 4.5~5

EDC：10mg

半抗原：1~2mg

離心脫鹽柱或其他具5~6k截留分子量的凝膠過濾柱

1.2   偶聯步驟

1）   将EDC平衡至室溫；

2）   加入2mg BSA、OVA或KLH到(dào)200μl共轭緩沖液；

3）   在500μl共轭緩沖液中溶解高(gāo)達2mg的肽或半抗原，并将其加入200μl載體蛋白(bái)溶液中。

4）   對于BSA或OVA偶聯，将10mg EDC溶于1ml超純水(shuǐ)中，并且立即加100μl該溶液到(dào)載體蛋白(bái)-多(duō)肽溶液。對于KLH偶聯，将10mg EDC溶于1ml超純水(shuǐ)中，并且立即加50μl該溶液到(dào)載體蛋白(bái)-多(duō)肽溶液。如果出現沉澱，之後減少EDC用量。

5）   室溫反應2h。

6）   使用脫鹽柱純化偶聯物(wù)。如果需将免疫原儲存數日，需過濾除菌，并在4℃或-20℃下(xià)保存于無菌管内。

二、  用EDC和NHS（或Sulfo-NHS）兩步法偶聯蛋白(bái)

【注意】以下(xià)步驟引用自(zì)Grabarek and Gergely，能(néng)夠順序偶聯兩個(gè)蛋白(bái)，并且不會(huì)影響第二個(gè)蛋白(bái)的羧基。此步驟需含巯基化合物(wù)淬滅第一(yī)個(gè)反應。

【注意】EDC與Sulfo-NHS的活化反應在pH 4.5~7.2最有效。然而，NHS活化或Sulfo-NHS活化分子與伯胺的反應在pH 7~8最有效。為(wèi)了得到(dào)最佳結果，第一(yī)步反應在pH 5~6的MES緩沖液（或其他非胺非羧酸鹽緩沖液）内進行，之後用磷酸鹽緩沖液（或其他非胺緩沖液）提高(gāo)pH到(dào)7.2~7.5，立即進行與伯胺分子的反應。為(wèi)了淬滅第一(yī)步反應，使用2-ME或通(tōng)過脫鹽柱進行緩沖液交換，可以簡單的除去過量試劑。

2.1   所需材料

活化緩沖液：0.1M MES，0.5M NaCl，pH 6.0

偶聯緩沖液：磷酸鹽（PBS），100mM 磷酸鈉，150mM NaCl，pH 7.2

蛋白(bái)1：制備于活化緩沖液（1mg/ml）

蛋白(bái)2：制備于偶聯緩沖液

NHS或Sulfo-NHS

2-ME

【可選】脫鹽柱或其他凝膠柱

羟胺鹽酸

2.2   偶聯步驟

1）   開(kāi)瓶前将EDC和NHS平衡至室溫。

2）   向1 ml蛋白(bái)1溶液中加入0.4 mg EDC（~2 mM）和0.6 mg NHS或1.1 mg Sulfo-NHS（~5 mM），室溫下(xià)反應15min。

3）   加入1.4 μl 2-ME（終濃度為(wèi)20 mM）以淬滅EDC。

4）   【可選】：使用已經用偶聯緩沖液（PBS）平衡的脫鹽柱将蛋白(bái)質與過量的還(hái)原劑和滅活的交聯劑分開(kāi)。

5）   将蛋白(bái)2以與蛋白(bái)質1等摩爾比加入活化的蛋白(bái)中。室溫反應2h。

6）   為(wèi)了淬滅反應，加入羟胺至終濃度為(wèi)10 mM。此方法水(shuǐ)解蛋白(bái)1上(shàng)未反應的NHS，生(shēng)成異羟肟酸。

7）   使用脫鹽柱除去過量的淬滅劑。

相(xiàng)關産品

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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